氟喹诺酮类药物在牛奶中残留研究

样品加标回收率
标样2ppb LC-MS/MS MRM谱图
空白牛奶LC-MS/MS MRM谱图
加标 2ppb LC-MS/MS MRM谱图
检测限和定量限
本方法对13种FQs药物的检测限（LOD）和定 量限（LOQ）分别为（ppb）：
麻保沙星0.5(2)；诺氟沙星0.5(2)；氧氟沙星 0.5(2)；培氟沙星0.5(2)；环丙沙星0.5(2)；洛 美沙星0.1(0.5)；达氟沙星0.2(1)；恩诺沙星 0.2(1)；沙拉沙星0.5(2)；二氟沙星0.5(2)；氟 甲喹0.5（2）；恶喹酸0.5(2)；萘啶酸0.1(0.4) 。
LC-MS/MS方法研究
仪器 高速分散器：IKA T18；氮气浓缩仪：Zymak TurboVap(r) LV；全 自动固相萃取仪：Gilson ASPEC XL4;Agilent 1100 高效液相色谱 仪；API 2000四极杆串联质谱仪。
标准品 盐酸环丙沙星、甲磺酸培氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、甲磺酸 达氟沙星和盐酸洛美沙星，为化学对照品，含量大于99.0%，均 由中国兽医药品监查所提供；氧氟沙星、诺氟沙星标准品，购于 Sigma；盐酸二氟沙星对照品，广州惠华动物保健品有限公司提 供；麻保沙星对照品，广东燕塘动物药业有限公司提供。
氟喹诺酮类药物在牛奶中残 留研究
一、概述
氟喹诺酮类 (fluoroquinolones, FQs) 药物是第三代喹诺酮类(quinolones,
QNs)药物，其主要作用机制是抑制细菌的DNA螺旋酶，因其抗菌谱广 、抗菌力强、组织穿透力强、不良反应少而且价格较低而被广泛的 应用麻于保人沙星类m及arb动of物lox感aci染n* 性疾病的预防和诺治氟疗沙星。norfloxacin
样品前处理过程
提取 吸取牛奶1.0 mL于2.0 mL聚丙烯离心管中，加入30%乙腈三氯乙
酸0.5 mL，涡旋混匀15 sec，15 000 g离心6 min；下层残余物中 加入蒸馏水1.0 mL及30%乙腈三氯乙酸0.5 mL，涡旋，离心，重复 提取一次，合并上清液为SPE净化样液。 SPE净化（GILSON全自动固相萃取）
LC-MS/MS条件
色谱条件
色谱柱：Nucleodur 100-3 c18 保护柱：zorbax xdb-c8 2.1×12.5mm 进样量：20μL。 流动相：0.1%甲酸（A）和0.1%甲酸乙睛（B） 梯度洗脱
质谱条件
扫描方式：多级反应监测（MRM）；正离子；ESI源。
13种氟喹诺酮类药物MRM离子对、CE和CEP
反相聚合物SPE柱（Strata-X或HLB）以3 mL甲醇活化和3 mL纯 净水平衡，上样，3 mL纯净水和3 mL 20%甲醇淋洗，负压抽干； 甲醇3 mL洗脱药物，收集洗脱液，负压抽干。 浓缩及定容
将洗脱液于60～70℃氮气流吹干，用1.0 mL流动相溶解残留物 ，旋涡混匀，15 000 g离心6 min，取上清液测定。
耐药率 11%
69% 69% 55% 76% 69% 13% 76% 99%
我国动物性食品中氟喹诺酮的最高残留限 量（MRL，μg/kg）
美国：禁止该类药物用于食品动物 欧盟：计划到2006年全面禁止抗生素在食品动 物中的使用 中国：农牧发[1999]17号规定了最高残留限量
残留限量（农牧发[1999]17号）
洛美沙星lomefloxacin
*表示畜禽专用
残留危害
过敏反应 肝毒性和肾毒性 软骨损伤 潜在的致癌性 破坏消化道微生物的群落结构 耐药性
鸡源大肠杆菌的对9种氟喹诺酮类药物的耐药率
喹诺酮类药物 Gatifloxacin
沙拉沙星 恩诺沙星 环丙沙星 二氟沙星 达氟沙星 左氟沙星 奥比沙星 萘啶酸
结语
本方法制备了抗恩诺沙星单克隆抗体，为试剂 盒和IAC免疫亲和柱的开发建立了基础
本方法建立了13种FQs 在牛奶中的LC-MS/MS 确证方法。
环丙沙星ciprofloxacin
恩诺沙星enrofloxacin*
沙拉沙星sarafloxacin*
二氟沙星difloxacin*
萘啶酸nalidixic acid
氟甲喹flumequine*
氧氟百度文库星ofloxacin
培氟沙星pefloxacin
达氟沙星danofloxacin*
恶喹酸oxolinic acid*