体外放射性分析

定义：在体外条件下、以放射性核素标记的配体为示踪剂、以结合反应为基础、以放射性测量为定量手段、对微量物质进行定量分析的一类分析方法。

按照方法学设计原理分类

竞争性结合分析——竞争性结合反应为基础，结合剂和标记物是限量的。（放射免疫酶促受体）

放射免疫分析（最有代表性）、放射受体分析、蛋白质结合竞争分析、放射酶促分析

非竞争性结合分析——结合剂的结合位点是过量的，待测配体全量参加反应，灵敏度高。

免疫放射分析、受体放射分析、酶的放射化学测定、酶的激活剂或者抑制剂测定。※共同基础为分子识别。

放射免疫分析(RIA)——待测抗原和定量标记抗原与有限量的特异性抗体竞争性结合，以放射性测量为定量手段，获得待测抗原浓度的分析。

条件1、待测Ag和标记具有相同免疫活性。

2、待测Ag和标记Ag*总量必须＞Ab量（只有多了才能竞争）

3、Ag*量和Ab量保持恒定。

4、Ab必须有合适的滴度（常以能与50%标记抗原结合的稀释倍数表示）

5、降低Ab浓度→提高检测灵敏度，但是缩窄检测范围

6、增加Ab浓度→降低检测灵敏度，但是适合较高浓度的抗原检测。

公式：（Ag+Ag*）＋Ab——→Ag·Ab + Ag*·Ab + Ag + Ag*

免疫放射分析（IRMA）——过量的标记抗体与待测抗原结合，分离标记抗原抗体复合物和未结合标记抗体，通过反射性测量可求得抗原的含量。

Ag+＋*Ab——→Ag·*Ab + *Ab

具体方法：单位点法、双位点法（应用最最多的方法）和标记第三抗体法

两种方法异同点

相同点：1、均已抗原抗体的免疫反应为基础；2、测定的对象都是物质的抗原

不同点：见下表

受体放射分析——研究受体数目和性质的分析技术，非竞争性结合分析

受体放射分析时标记配体的要求：1、与相应的受体有高亲和力，在一定浓度达到最大结合率，转移性好；2、标记配体比活度高（＞10ci/mmol），纯度高、常用的多为3H标记拮抗剂，某些具有酪氨酸残基的多肽也可以125I标记。

体外分析的标记抗原或者抗体的质量要求

1、比活度；

2、免疫性；

3、放化纯度；

4、稳定性。