结核分枝杆菌_干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用

论 著

结核分枝杆菌 -干扰素体外释放定量试验

诊断结核感染的临床应用

张 华,黄圣文,罗振元

(贵州省人民医院检验科,贵州贵阳550002)

摘要:目的 探讨结核分枝杆菌 -干扰素体外释放(T B -IGRA)定量试验用于临床诊断结核的实验价值。方法 收集患者血清及痰标本,ELISA 法定量检测血清特异性 -干扰素的含量、EL ISA 法定性检测血清HI V 抗体、胶体金法检测结核抗体,FQ -PCR 检测痰中结核分枝杆菌核酸。结果 T B -IGR A 的敏感度为90.24%,特异度为93.34%;82例肺结核病患者中,痰涂片镜检、结核分枝杆菌D NA 和结核抗体检测的阳性率分别为:64.63%、76.83%和40.24%,经卡方检验,T B -IGR A 与另3种方法阳性率差异有统计学意义(P <0.05、<0.01、<0.01)。结论 T B -IGR A 较灵敏、特异,是一种诊断肺结核的有价值的检测方法。关键词: -干扰素体外释放试验;结核分枝杆菌;诊断

中图分类号:R378.91 文献标识码:A 文章编号:1005-4529(2009)14-1898-02

IFN - Release Assays for Rapid Diagnosis of Active Tuberculosis:

Clinical Application

ZH ANG H ua,H UAN G Sheng -w en,LU O Zhen -yuan

(G uiz hou Pr ovincial P eop le s H osp ital ,Guiy ang,Guiz hou 550002,China)

Abstract:OBJECTIVE T o evaluate the clinical applicatio n of T -cell based IF N - r elease assays (IGRA )for t he r apid diag nosis of act ive tuber culosis.METHODS IFN - and H IV antibo dy were detected by using EL ISA.A nt ibody to M y cobacter ium tuber culosis w as detect ed by collo idal go ld.A t the same time,the M.tuberculosis DN A lo ads w ere examined by F Q -PCR.Statist ical ana lysis w ere perfor med to analyze t he cor relation of IF N - w ith M.tuber culos is antibody and DN A,r espectiv ely.RESULTS T he sensit ivity of T B -IGRA was 90.24%,specif icity was 93.34%;the posit ive rate of T B -IGRA in 82tuberculosis pat ient s w as hig her than fro m sput um smear (64.63%),T B -PCR (76.83%)and t uberculo sis antibody (40.24%).CONCLUSIONS A s a r eplacement of T B -PCR,IFN - can be used as a v alued index to evaluate tuberculosis infectin.Key words:IF N - release assays;M y cobacter ium tuber culos is ;Diagnosis

收稿日期:2009-02-14; 修回日期:2009-05-15

目前临床普遍采用的结核诊断主要依赖于临床症状、影像学特征和病原学诊断。至今没有一种准确、快速、可靠检测结核分枝杆菌的方法[1]。结核分枝杆菌可诱导强烈的细胞免疫反应,因此,检测结核

分枝杆菌菌特异的T 淋巴细胞可作为检测感染的一种新路径。我们利用北京万泰公司研制的结核分枝杆菌 -干扰素体外释放(T B -IGRA)定量诊断试剂盒,对贵阳市疾控中心结防科确诊的肺结核患者进行检测,并初步探讨其临床意义。1 资料与方法

1.1 资料 正常对照组:本院健康体检者30名,年龄25~48岁。肺结核组:贵阳市疾控中心结防科确

诊的肺结核患者82例,其中,男42例,女30例,年龄20~52岁,平均32.73岁。两组均空腹抽取静脉血2ml,同时采集患者晨痰。

1.2 仪器 主要仪器为美国ABI 公司的7500

FAST 荧光定量PCR 仪;瑞士H am ilto n 公司AT 2/FAM E 16/20全自动酶标仪;H eal Force 二级生物安全柜。

1.3 检测方法 抗酸染色法进行晨痰涂片镜检;ELISA 法定量检测结核分枝杆菌特异性 -干扰素的含量,试剂盒由北京万泰生物技术有限公司惠赠;ELISA 法定性检测血清H IV 抗体,试剂盒购自北京万泰生物技术有限公司;结核抗体检测胶体金法,试剂盒购于上海奥普生物医药有限公司;结核分枝杆菌-DNA 采用荧光定量-聚合酶链反应技术(FQ -

1898 Chin J No so comio l V ol.19N o.142009

PCR)检测,试剂盒购于深圳匹基生物工程有限公司。以上均严格按照各自说明书进行操作,同时进行室内质量控制。

1.4 统计学分析 采用PEMS3.1软件进行 2检验。

2 结 果

2.1 血清H IV抗体检测结果 我们采用ELISA 法对对照组和肺结核疾病组所有病例均进行了血清H IV抗体检测,结果均为阴性,部分排除了受试者自身免疫缺陷所致T B-IGRA的假阴性。

2.2 TB-IGRA反应频率比较 正常对照组和肺结核疾病组的TB-IGRA阳性率。见表1。

表1 各组 -干扰素阳性率(%)

组 别例数阳性例数阳性率肺结核组827490.24

健康对照组302 6.67

2.3 TB-IGRA与其他检测方法的比较 82例肺结核病患者还进行了痰涂片镜检、结核分枝杆菌DNA和结核抗体检测,阳性率见表2。

表2 82例患者T B-IGRA与T B-P CR及T B-抗体

检测阳性率(%)

方 法阳性例数阳性率

T B-IGRA7490.24

涂片5364.63

T B-PCR6376.83

T B-抗体3340.24

2.4 涂片阳性与阴性肺结核患者TB-IGRA结果比较 T B-IGRA阳性率在抗酸杆菌涂片阳性与阴性结核病患者中,经四格表卡方检验,差异无统计学意义(P>0.05),见表3。

表3 痰涂片阳性与阴性结核病患者 -干扰素

反应阳性率(%)

痰涂片检查例数阳性例数阳性率阳性535094.34

阴性292482.76

3 讨 论

目前临床普遍采用的结核诊断主要依赖于临床症状、影像学特征和病原学诊断。患者临床症状和影像学特征有助于疑似患者的发现,但进一步诊断需要结合病原学检测。结核菌感染的免疫反应主要是细胞介导免疫反应,作为细胞介导反应的一部分, T淋巴细胞被结核菌抗原致敏,这些抗原再次刺激时,活化的效应T淋巴细胞,产生细胞因子 干扰素。IGRA的原理正是通过加入结核特异性抗原ESAT-6和CFP-10,经过全血中的抗原递呈细胞刺激特异性Th细胞产生IFN- ,于37 体外培养16~24h后,检测培养液中IFN- 含量,以反应体内结核特异性T细胞应答的强弱,来间接判断结核分枝杆菌感染状况。

本试验用TB-IGRA检测30例健康对照、82例肺结核病患者外周血中,结核分枝菌特异抗原 干扰素释放含量,结果显示,该方法具有较高特异度(93.34%)和较高敏感度(90.24%),与国外报道一致[2-4]。整个检测过程,仅需26h。

本研究将T B-IGRA与涂片镜检、结核抗体检测,结核分枝杆菌核酸检测进行比较,其阳性率分别为:90.24%、64.63%、76.83%和40.24%。经统计学分析,TB-IGRA检测阳性率显著高于另3种方法,差异有统计学意义;说明TB-IGRA是用于检测结核分枝杆菌感染的较为敏感的指标。

我们的结果还显示,对痰涂片镜检阳性与阴性结核病患者,其T B-IGRA阳性率分别为:94.34%和82.76%,差异无统计学意义。说明该方法可作为痰菌阴性结核病诊断有效方法之一。

我们认为T B-IGRA快速简便,检测过程中仅需用到37 体外培养箱、酶标仪等常规设备,在绝大多数县级以上卫生机构都可以进行,是一种值得推广的检测方法。

参考文献:

[1] Garg SK,T iw ari D.Diagnosis of active tuberculosis:availa-

ble technologies,limitations,an d pos sibilities[J].J Clin Lab

Anal,2003,17:155-163.

[2] Fathy M M,Asaad A,M ans ou r M,et al.Cellular interferon-

gam ma b as ed as say for diagnosis of pulmonary tu berculosis

[J].Egypt J Immu nol,2007,14(1):33-41.

[3] Diel R,Lodd enkemper R,M eyw ald-Walter K,e t al.Predic-

tive value of a w hole blood IFN-gamm a ass ay for th e d evelop-

ment of active tuberculosis dis ease after recent infection with

M yc obac te rium tuberc ulosis[J].Am J Respir Crit Care M ed,

2008,177(10):1164-1170.

[4] T siouris SJ,Austin J,Toro P,et al.Results of a tuberculo-

sis-specific IFN-gam ma assay in child ren at high risk for tu-

berculosis infection[J].In t J T uberc Lung Dis,2006,10(8):

939-941.

1899

中华医院感染学杂志2009年第19卷第14期