MS培养基及配制注意事项
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项：
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水
浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点，也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时，首先要对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化，因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基，还有B5培养基，N6培养基。
MS培养基及配制注意事项
、MS培养基母液的配制母液编种号类1大元KNO3NH4NO3MgS04・7H201900165037017044022.38.66.20.831010101010100100100100100100100100100100100100100成分浓缩母液配制1升规定量倍数称取量体积培养基吸(mg)( ml)取量定容1900016500370017004400223086083252.52.5373027801002525 500050010500101000101000 1000100101000100 素KH2PO43微元CaCl2 2H2OMnSO4 4H2OZnSO47H2OKINa2MoO4・7H2O0.25 0.0250.02537.327.82.00.50.10.5100CuSO4.5H2O4CoCL2.6H2O4铁Na2-EDTA盐FeSO4.4H2O5有机甘氨酸盐酸吡哆醇盐酸硫铵素6 肌酸注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl22H20 单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2 2H20 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20 分别溶于450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
MS培养基的配制
MS 培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L（（500ml 500ml）的母液。
各自倒入）的母液。
各自倒入1L 1L（（500ml 500ml）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液，倒入1L 试剂瓶中，存放于冰箱中。
试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：注：CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g，，CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液，然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
（3）配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
MS培养基的配制
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
组织培养成功率
组织培养成功率1.培养基配制注意事项植物组织培养最常用MS培养基，包含十几种化合物。
有些化合物相遇会发生化学反应产生沉淀，影响培养基的营养成分，所以MS培养基需要配制多种高倍母液。
配制母液时，尤其涉及大量元素的母液时，一定要等一种成分溶解之后，再缓慢的添加另一种成分；切记一锅煮，即不能将各种化合物一齐添加进去。
2.灭菌后培养基不凝胶或者凝胶偏软植物凝胶、琼脂都对酸性条件敏感，pH值低于5很难成胶或凝胶偏软，切记高压灭菌前调节培养基pH值（5.5-6.0）。
植物凝胶对二价阳离子浓度有要求，也就是相对于MS培养基，1/2MS培养基中植物凝胶要适当增加用量。
另外灭菌后，倒出培养基前一定将培养基摇匀（带防烫手套），因为琼脂密度大底层含量高，容易造成培养基强度不均匀。
3.水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分，在使用过程中有无区别？水解酪蛋白对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用，通常用量在500 mg/L，不管是酸解还是酶解，作用都是一样的，酶解更有利于发挥其作用。
4.怎么溶解组培常用植物激素？IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等应先溶解于少量95%的乙醇中，再加水定容配制成母液。
如有结晶析出，可考虑用 1 / 10 体积的乙醇溶解后再定容；2，4 -D 易溶于碱性水溶液，可用少量 1mol/L 的 NaOH 溶液溶解后再慢慢加水定容；KT 和 6 -BA 先用少量的 HCL 溶解，再加水定容到一定的浓度。
5.细胞分裂素使用浓度？一般情况下在培养基中加入 0.1～10.0 mg/L 的细胞分裂素（6 -BA/KT/ZT)，多数用 1.0～2.0 mg/L，KT 浓度为 0.5～2 mg/L，浓度要根据实验材料来调整。
细胞分裂素可以单独使用也可以与细胞生长素配合使用。
6.哪些植物激素能高压灭菌，哪些不能高压灭菌？IBA、NAA、6-BA、2,4-D可高温高压灭菌。
IAA、GA3、茉莉酸等不可高温高压灭菌，否则会分解失效，该类植物激素配制母液后需用0.22微孔滤膜过滤除菌，待培养基冷却（50-60℃）后尚未凝胶前加入混匀。
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg 的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
MS培养基配制中的五点注意[1]
![MS培养基配制中的五点注意[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/7595732e7375a417866f8fa2.png)
的，因为激素在低温环境中易析出沉淀，影响使用
效果。
3危险药品的使用与保管
尽管组织培养技术已经相当成熟，在高中教
学当中也逐渐地普及，但该技术并不安全。除注
意灭菌锅、超净台等大型仪器的使用安全外，最重
要的当属危险药品的使用与保管。原则上，MS培
用其他培养基，如N或B，培养基，无.. NHNO成
分，亦为组织培养所常用。..
(2)EDTA-Na2、CoC1，、2，.. 4一D
此三种药品为致癌物，配制时要带胶皮手套，
或两层塑料手套。ED TA—Na为金属螯合剂，有
一
定的粘性；.. CoCI：能够导致基因突变，遗传学实
验中也常用其作为致突变剂；.. 2，4-D是高效农药，
司承办
＼
；实验教学探究
一、P
如何增加生物实验教学的有效性
口徐晓红
浙江省杭州市第二中学.. 310053
摘要从提高教师自身实验素养、加强学生相关技能培养、加强学生质疑问题的能力等5个方面分析并提出了如何加强
生物实验教学的有效性。
关键词生物实验教学有效性
生物实验教学始终是中学教学中一个最为薄
制加热时间)，则培养基的.. pH自然地将处于最适
范围内。调解pH时最好用电子pH计，以保证精
确度。pH试纸的误差较大，要小心调节。可以将..
pH调到比最适值小一些，因为培养基在灭菌后，..
pH将变大。..
(收稿日期：2009．11．10)
·..
36 ‘.. EducationalEquipmentAndExperimentVo1．26，No．4，2 010
ms培养基配方及使用指南
ms培养基配方及使用指南嘿，大家好，今天咱们聊聊一个有趣的事情，那就是MS培养基！听到“培养基”，你可能觉得有点高大上，其实呢，简单得很。
咱们先来个小科普，MS培养基其实是Murashige和Skoog的缩写。
名字听起来很复杂，但实际操作起来，简直就像在做菜一样。
有些朋友可能觉得这玩意儿和咱们的生活八竿子打不着，实际上，它可是植物培养的好帮手，像小小的“植物健身房”！把它想象成植物的“营养套餐”，里面有啥呢？水、盐、糖，还有各种微量元素，给植物提供所需的营养。
准备工作很重要哦。
想要做出一份完美的MS培养基，得先准备好材料。
水是基础，没有水，啥都没戏。
一般来说，用蒸馏水或者去离子水，毕竟咱们可不想给植物喝矿泉水里那些多余的“杂质”。
接下来就是那些神奇的成分了，像氮、磷、钾这些大元素，别小看它们，它们可是植物生长的“动力源泉”。
有了这些，植物才能长得茁壮，开花结果。
微量元素也不能忽略，像锌、铁、硼这些小伙伴，它们的作用虽然不明显，但少了可是不行。
然后，咱们得讲讲怎么配制这个培养基。
说实话，这个过程就像做蛋糕，先把干成分在干净的容器里混合均匀，再慢慢加入水，搅拌均匀。
小心点，别像我一样一不小心把水洒了一地，那可是个大麻烦啊！搅拌的时候，得耐心点，慢慢来，别急。
直到所有的成分都溶解为止。
搅拌完了之后，可以加点琼脂，给它一点点凝固感，像给植物做个“美容”似的。
毕竟，要是培养基流淌不止，植物可就没法好好扎根了。
搅拌好后，就得加热消毒。
这里可以用水浴或者高压锅，反正就是要把那些“坏蛋”给消灭掉。
这样一来，培养基就干净得像新买的衣服。
要知道，细菌什么的可不是什么好客，咱们可不能让它们在植物的“健身房”里横行霸道。
消毒之后，等它稍微冷却，再倒入培养皿里。
注意，别烫到手哦，这可是个大忌讳！咱们要做的就是等待！在这个过程中，可以好好欣赏一下那些小种子，看看它们在新环境下的表现。
记得保持培养皿的湿润，这就像给小植物喝水一样，太干了它们可受不了。
MS培养基的配制-母液法
• 配好的培养基一般放置1-2条观察无菌落 后方可使用
• 配好的培养基在15-20℃存放,并尽快在 一个月内使用
组培室的卫生?
• 定期消毒,熏蒸 • 组培污染物的处理 • 污染的培养材料或培
养瓶,灭菌后洗涤 • 升汞等,回收后集中
灭菌温度与灭菌时间和培养基体积的关系
培养基的配制（母液法）
• 培养基配制过程 • /v_show/id_XMTE2Nzg
3MjA=.html • /player.php/sid/XM
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0.025
25
铁盐
Na2-EDTA
37.3
3730
FeSO4˙4H2O
27.8
100
2780
1000
10
微生素等
Gly VB1 VB2 VB6 肌醇
2.0
100
0. 1
5
0.5
525
100
5000
母液的配制
• 以MS培养基为例，其母液如下： • MS大量组份（扩大20倍）； • MS微量（扩大1000倍）； • MS有机组分（扩大50倍）； • MS铁盐（扩大100倍）；
2，配制分工：
• 1.配制母液 • MS大量------第1组 • MS微量------第2组 • MS有机------第3组 • MS铁盐------第4组 • 6-BA母液（50mL;1mg/ml） ------第5组 • NAA母液（50mL;1mg/ml） ------第6组 • 2,4-D母液（50mL,1mg/,mL)---第7组 • 0.1% 溶液升汞，2000mL ---第8组 • 来苏尔液—1000MmL-----第9组 • 75%酒精 ------------1000mL---第10组
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项：
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水
浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点，也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时，首先要对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化，因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基，还有B5培养基，N6培养基。
ms基础培养基的配方及配制注意事项
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实验二 MS培养基的配制与灭菌
实验二 MS培养基的配制与灭菌一、实验目的学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8%二、实验原理2,4-D（二氯苯氧乙酸）属生长素的范畴。
在自然界中，生长素可影响到茎和节间的伸长向性顶端优势叶片脱落和生根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，其中2,4-D（二氯苯氧乙酸）被广泛用于愈伤组织的诱导。
三、实验材料1.实验器械：灭菌锅，电磁炉，三角瓶量筒，酒精灯，镊子，解剖刀，超净工作台， pH，试纸，电子天平等。
2.实验药品：MS母液，蒸馏水， 2,4-D，升汞，乙醇，无菌水等。
四、（一）配置培养基（1L MS培养基的配置）1.瓶塞制作2.盖纸的准备及配置100mg/L（100ml）的2,4-D（二氯苯氧乙酸）3.称取8g/L（0.8%）的琼脂置于不锈钢的锅中，加蒸馏水直到培养基最终容积的3/4，在电炉上加热溶解。
待琼脂溶解后再加30/L(3%)的蔗糖，用玻璃棒搅拌均匀。
4.分别加入一定量的各种贮备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。
5.加蒸馏水定容。
6.分均匀后，用1.0或0.1mol/LNaOH或HCl调节培养基的pH (5.4~7.0)。
7.把培养基分装到所选用的培养容器中（约25~30mL）。
8.用包在纱布中的棉塞（它不仅能阻止微生物污染，而且还可以使气体自由交换），然后再用牛皮纸套在棉塞上（防止棉塞在高温灭菌时吸湿）。
（二）培养基的灭菌1.把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌（在灭菌之前，必须注意水至吃水线，防止烧干，接通电源升温后，首先要排净锅内的冷空气，然后在121℃ 1.06kg/cm2或者0.105MPa的条件下灭菌15至20min）。
2.灭菌结束后，切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基（过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢）。
（三）最后清理实验室。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
MS培养基及配制注意事项
一、MS 培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl 2·2H 2O 单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl 2·2H 2O 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO 4·7H 2O 和Na 2-EDTA.2H 2O ）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液 成 分规定量 浓缩倍数称取量（mg ） 母液体积（ml ） 配制1升培养基吸取量定容 编号 种类 1大量元素 KNO3 1900 10 19000 1000100NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4·7H2O370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl 2·2H2O 440 10 4400 1000 100 3微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 100 2230 100010ZnSO4·7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI0.83100 83 Na2MoO4·7H2O 0.25100 25 CuSO4.5H2O40.025 100 2.5 CoCL2.6H2O0.025 100 2.5 4铁盐 Na2-EDTA37.3 100 3730 100010FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5有机物 甘氨酸 2.0 100 100 50010盐酸吡哆醇 0.5 100 25 盐酸硫铵素0.1 100 5 烟酸 0.5 100 25 6肌酸100100500050010定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
ms基本培养基母液的配制方法
ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液：包括吲哚乙酸（IAA）、纯度较高的激素（如6-苄基腺嘌呤，BA）等。
2. 碱性植物激素溶液：如生长素（GA3）等。
3. 无机盐溶液：包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。
4. 维生素溶液：如次黄嘌呤核苷酸（NAA）等。
5. 蔗糖溶液：用于提供能量和碳源。
6. 琼脂：用于凝固培养基。
二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分，按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中，常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。
2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中，注意控制激素的浓度。
3. 加入维生素溶液，按照配方比例加入到溶液中。
4. 加入适量的蔗糖溶液，用来提供能量和碳源。
5. 最后将琼脂加入到溶液中，搅拌均匀。
6. 调节溶液的pH值，通常为5.8左右。
7. 用蒸馏水补充溶液至总体积，并充分搅拌均匀。
8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理，一般条件下为121摄氏度，压力为0.1MPa，持续20分钟。
三、注意事项1. 在配制过程中，要保持实验室卫生，使用无菌操作。
2. 使用高质量的试剂和蒸馏水，避免杂质的干扰。
3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。
4. 配制过程中要注意酸碱度的调节，尽量控制在5.8左右。
5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀，避免结块。
6. 灭菌处理要按照规定的条件进行，确保培养基的无菌性。
通过以上步骤，我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。
这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。
根据实验的需要，可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度，以满足不同植物材料的培养要求。
希望以上内容对您有所帮助。
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2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。
二、培养基配制和灭菌
一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算
配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————
母液浓缩倍数
培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二） 各种母液按顺序编号排列 A. 大量元素；B.CaCl2.2H2O； C.微量元素 ；D.铁盐； E.有机 物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA 用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、 激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后, 加蒸馏水定容至100ml。
(三) 配制培养基（1000ml） 1. 琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全 溶解为止. 2. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼 脂的300ml蒸馏水中。 3. 各种母液的吸取（培养基1L） （1） 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母 液（B）各100ml （2） 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐 （D）母液各10ml （3） 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml （4） 移取激素
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连 续接种，每5天要大强度灭菌一次。
常用植物激素
类别Байду номын сангаас
名 称
缩写词
分子量
使用浓度范 围
2，4－二氯苯氧 生 长 乙酸 素
α－萘乙酸
2，4－D NAA
221.0 186.2
0.001－ 10mg/L
0.001－ 10mg/L
吲哚－3－乙酸 IAA
IAA易被 植物细胞 所氧化。 故培养基 中很少单 独使用。
分裂素通 常能溶于 稀NaOH， 含水乙醇 或稀盐酸
玉米素不 耐热，不 能高压灭 菌。
能溶于乙 醇
不耐热不 能高压灭 菌在愈伤 组织和悬 浮培养物 的启动和 保持生长 时才需要 有时小植 株再生时 也需要
四、常用药品的配置方法
1.1mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度37%盐酸溶液的密度为1.19克/毫 升，假设要配制1000ml 1mol/L HCl，则需要盐酸的物质的量为1mol， 所以需要量取37%的盐酸为1*36.5/37%/1.19=82ml 2.1mol/L的NaOH的配制：称40gNaOH，然后融于1000ml的蒸馏水中。 （定容到100ml） 3.95%的酒精配制成75%的酒精：用量筒量取750ml的95%酒精加入 200ml的蒸馏水即可得到75%的酒精。 如果用无水酒精配制75%的酒精，则量取750ml的无水酒精，再加水 250ml。 4.0.1%的升汞配制：先称取1克升汞粉末，然后用蒸馏水溶解最后定容 到1000ml。 5. 1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2.4-D，用少量1mol/LnaOH或酒精助 溶，然后定容到100ml。 6.1 mg/ml的6-BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/L HCl或 1mol/LNaOH助溶，然后定容到100ml。 7.0.5mg/ml的NAA的配制：称取0.05gNAA，用少量95%酒精助溶，然 后定容到100ml。
注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化 合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯 中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏 水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编 号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另 一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格， 无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热 源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀 →0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打
开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐 （FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物 可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小 口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水 中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水 定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量 外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保 存，贴上标签。 5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜 过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就 不能再使用。
CoCL2.6H2O 0.025 100 2.5
4 铁 Na2-EDTA 盐 FeSO4.4H2O
37.3 100 3730 27.8 100 2780
1000 10
甘氨酸 5有
盐酸吡哆醇 机
2.0 100 100 0.5 100 25
500 10
物 盐酸硫铵素
烟酸
6
肌酸
0.1 100 5 0.5 100 25 100 100 5000 500 10
→→自来水冲洗 第二步：对材料的表面浸润灭菌 ： 70%酒精浸10-30秒→→无菌水 第三步：灭菌剂处理→→ 0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂） 第四步：无菌水进行冲洗 注意事项： １.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存． ２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８ 次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底． ４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。 ５.灭菌液要充分浸没材料
175.2
0.001－ 10mg/L
吲哚－3－丁酸 IBA
203.2
0.001－ 10mg/L
6－苄基氨基嘌呤 BA
细 胞
6－糠基氨基嘌呤 KT
分
N－异戊烯氨基嘌 ZT
裂
呤
（玉米素）
225.2 215.2 219.2
赤霉素 赤 霉 素
GA3
346.4
母液配制 说 明
生长素通 常用NaOH 溶液滴至 溶解成溶 液。 能溶于乙 醇
2
CaCl2·2H2O
440 10 4400 1000 100
MnSO4·4H2O 22.3 100 2230
3 微 ZnSO4·7H2O 8.6
量 H3BO3
6.2
元
KI
0.83
素
Na2MoO4·7H2O 0.25
100 860 100 620 100 83 100 25
1000 10
CuSO4.5H2O4 0.025 100 2.5
一、MS培养基母液的配制
母液 成 分
编种 号类
规定 量
浓缩 倍数
称取量 （mg）
母液 体积 （ml）
配制1 升培 养基 吸取 量定
容
大 KNO3
1900 10 19000
1 量 NH4NO3 元
1000
1650 10 16500
100
素 MgSO4·7H2O 370 10 3700
KH2PO4
170 10 1700
四、无菌操作技术 （一）植物材料表面——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污 染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严 格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接 种。 1.接种步骤： 第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗