高蛋白大米粉中磷含量测定

0.67％，符合要求（<5％）。结果见表 2。 表2 精密度试验结果
分组
取样量 （g） m1，m2
测定结果 平均值
(mg/100g) (mg/100g)
d1,d2
d
差值 ｄ1－ｄ2
差值/ 平均值
第1组0.4967,0.5001 92.31,93.00 92.65
-0.68 -0.00734
第2组0.4999,0.5021 95.22,94.26 94.74
470 2000
250 470 2000 250
930.0 2393.7
708.7 922.6 2361.9 689.4
97％ 96％ 94％ 98％ 95％ 91％
3 讨论
3.1 加热温度对回收率的影响 试样在加热过程中，逐渐增大温度发现，在 170—
200℃范围硝化最充分，所得回收率最高。当温度低于 160℃时硝化时间过长。温度高于 220℃时，样品易变 黑，变黑后应加入 5mL 硝酸继续消化。温度过高，样液 反映过于剧烈，造成样液飞溅，测得磷含量偏低。 3.2 酸碱度对显色反应的影响
0.95 0.0101
第3组0.5002,0.5013 96.19,96.87 96.53
-0.68 0.00708
54
中国食物与营养
第18卷
（续）
分组
取样量 （g） m1，m2
测定结果 平均值
(mg/100g) (mg/100g)
d1,d2
d
差值 ｄ1－ｄ2
差值/ 平均值
第4组0.5001,0.5003 98.02,97.20 97.61
样液中的磷酸根离子与偏钒酸和钼酸反应形成黄色 三元多杂酸，当硝酸浓度在 5.6mol/L 时，钒钼酸铵的显 色效果明显，因此在用硝酸回调加入过量的氢氧化钠溶 液时，所加硝酸应该使二硝基酚指示剂变为非常淡的黄 色为宜，避免引入更多硝酸。
本试验表明，用钒钼酸铵显色法来测定高蛋白大米粉 中磷含量，检出限、精密度、重复性、回收率等各项指标 都符合要求，并且灵敏度高，结果证明本法准确可靠。◇
参考文献 ［1］郭经燕. 食品卫生手册. 郑州：河南科学技术出版社，
1984: 47-50. ［2］陈志娟，蔡梦华，高素虹. 食品中磷测定方法研究. 预
防医学论坛，2009, 12(15): 1204-1207. ［3］王钦德，杨坚. 食品实验设计与统计分析. 北京：中国
农业大学出版社，2003: 104-107. ［4］GB/T 5009. 87-2003食品中磷的测定. ［5］GB 5413. 11-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品
2 结果与分析
2.1 检出限、线性范围
试验的使用检出范围是 0—Baidu Nhomakorabea0μg，标准曲线线性相 关系数 R2>0.994，见表 1 和附图。
表1 标准溶液的浓度
浓度 （μg/mL）
0
1 2.5
5
7.5 10
吸光度（A） 0.000 0.0339 0.0870 0.1741 0.2589 0.3823
附图 磷标准曲线
0.82 0.00842
第5组0.5001,0.5009 92.57,92.16 92.37
0.41 0.00444
第6组0.5021,0.5013 97.14,96.87 97.01
0.27 0.00282
2.3 回收率试验结果
本方法的低浓度回收率为 92.5％，高浓度的回收率 为 95.5％，与样品相当浓度的回收率为 97.5％，总的回 收率为 95.2％，符合试验要求。结果见表 3。
(1Institute of Food Science, Jishou University, Jishou 416000, China; 2Key Laboratory of Plant Resources Conservation and Utilization of Hunan Province, Jishou University, Jishou
Keywords：tea seed；protein；enzymatic method；extraction
第5期
李则均等：高蛋白大米粉中磷含量测定
53
1 试验部分
1.1 主要仪器与试剂 1.1.1 仪器
UVmini-1240 紫外可见分光光度计（岛津生产）; HP10 电加热板（IKA生产）。 1.1.2 试剂
表3 回收率试验结果
样品 编号
称样 质量 (g)
样品本 底值 （mg/100g）
取样量 （μg）
加标量 （μg ）
样品加标 测得微克数
（μg）
回收率
样品1 0.5003 0.5000 0.5001
样品2 0.5002 0.5000 0.5000
94.74 92.37
474.0 473.7 473.7 462.0 461.9 461.9
作者简介：李则均（1983— )，女，黑龙江哈尔滨人，大学本科，助理工程师，从事乳品仪器分析。 通讯作者：刘滨青（1979— )，黑龙江哈尔滨人，大学本科，助理工程师，从事食品检验。
Protein Extraction from the Tea Seed by Enzymatic Method
FENG Lei1, MA Cheng-jin1,2, HUANG Wei1, HUANG Qun1,2, PENG Zhong-jin1, XIANG Yong-ping3
关键词：钒钼酸铵显色法；高蛋白米粉；磷测定
高蛋白大米粉作为一种低过敏源食品添加剂，已经 越来越多地被添加到婴幼儿配方食品中。磷存在于人体 所有细胞中，是维持骨骼和牙齿的必要物质，几乎参与 所有生理上的化学反应。所以高蛋白大米粉中磷的测定 很重要，食品中磷的测定方法有分光光度法、原子吸收
光谱法、磷酸根测定法等。用分光光度法检验，赶酸过 程中酸的挥发量很难控制，显色颜色比较浅，线性比较 差。用原子吸收光谱法显色受硫酸和氯化亚锡加入量对 测定结果影响严重。本试验采用GB 5413.11-2010中钒钼 酸铵显色法测定，显色效果明显、线性好、灵敏度高。
最低检出限以 3 倍的标准偏差除以工作曲线的斜率
求得检出限为 0.223μg/mL。
2.2 精密度试验结果
n
∑ 根 据 标 准 偏 差 的 计 算 公 式 s（x）=
（xn-x)2
n＝1
计
n－1
算得标准偏差为 0.744，符合要求。在重复条件下获得
的 6 次独立测定结果的绝对差值与算数平均值的比值为
440nm，用 1cm 比色杯。 1.4 精密度试验
准确称取 6 组平行样，每日 1 组，按照本方法操作， 再将结果求出精密度。 1.5 回收率试验
取 1 组已经测定含量的样品或标准品 2 个，每个各 3 份，第 1 份加入标准液后使它的浓度与样品含量基本相 同，第 2 份加入标准液加入后使总浓度接近线性范围上 限，第 3 份加入标准液后使它的浓度接近（或略大于） 检测下限，然后测定算出回收率。
中磷的测定.
Phosphorus Content Determination in High Protein Rice Flour
LI Ze-jun1, LIU Bin-qing2
(1Quality Inspection Center, Heilongjiang Wandashan Dairy Company Limited, Harbin 150078, China; 2The Ministry of Agriculture Dairy Quality Supervision Testing Center, Harbin 150078, China)
416000, China; 3Science and Technology Bureau of Guzhang County, Guzhang 416300, China)
Abstract：Effects of variety of enzymes, dosage of enzyme, reaction temperature of enzyme, pH, reaction time of enzyme and solid-liquid ratio(M/S) on the enzymatic extraction technology of protein from tea seeds were investigated and optimized by means of orthogonal design. The results showed that the the protein obtained was characterized by pH 3.6， and the best effects of factors on extraction were alkali protease and the above parameters had different effects on protein extraction in the following order of time， pH， temperature, and alkali protease concentration. A maximum protein yield of 83.04％ was obtained under the optimal values of extraction parameter which were solid/liquid ratio 1:25, alkali protease concentration 200U/g, pH 10.0, extraction temperature 40℃ and extraction time 45min.
硝酸，高氯酸（优级纯），钼酸铵，偏矾酸铵，2、 6- 二硝基酚，硫酸（优级纯），水为去离子水。
矾钼酸铵试剂： A 液：25g 钼酸铵，溶于 400mL 水中。 B 液：1.25g 偏矾酸铵溶于 300mL 沸水中，冷却后加 入 250mL 硝酸，将 A 液缓缓倾入 B 液中，不断搅匀，并 用水稀释定容至 1 000mL，贮于棕色瓶中。 氢氧化钠溶液（6mol/L）：称取 240g 氢氧化钠，溶 于 1L 水中。 硝酸溶液（0.2mol/L）：吸取 12.5mL 硝酸，用水稀 释至1 000mL。 磷的标准储备液（50μg/mL）：称取在 105℃ ±1℃ 烘干至恒重的磷酸二氢钾标准品 0.2197g，溶于 400mL 水中，加 8mL 硫酸，定容至 1L。 二硝基酚指示剂（2g/mL）：称取 0.2g2、6- 二硝基 酚溶于 100mL 水中。 1.2 样品预处理 1.2.1 样品消化 称取 0.5000g 样品于 125mL 三角瓶中，加入几粒玻 璃球，加入 10mL 硝酸，然后放在电加热板上加热。待 剧烈反应结束后取下，稍冷却，在加入 10mL 高氯酸， 重新放于电加热板上加热。若消化液变黑需取下再加入 5mL 硝酸继续消化，直到消化液变为无色或淡黄色，且 冒出白烟，在消化液剩下 3—5mL 时取下，冷却，转入 50mL 容量瓶中，定容。同时做空白试验。 1.2.2 试样测定 吸取试样 10mL 于 50mL 容量瓶中，加少量水后，滴 加2滴二硝基酚指示剂，先用氢氧化钠溶液（6mol/ L）调 制微黄色，再用硝酸溶液（0.2mol/L）调至无色，最后用 氢氧化钠溶液（0.1mol/L）调制微黄色。加入 10.00mL 钒 钼酸铵用水定容至刻度，在 25—30℃显色 15min。 1.2.3 标准曲线和相关系数 分别吸取磷的标准储备液0mL、1mL、2.5mL、5mL、 7.5mL、10mL，分别至于50mL容量瓶中，加入10mL钒钼 酸铵试剂，用水定容至刻度，在25—30℃下显色15min。 1.3 测定条件 开机，机器自检通过后，即可开始检测，测定波长
中国食物与营养 2012,18(5):52-54 Food and Nutrition in China
高蛋白大米粉中磷含量测定
李则均1，刘滨青2
（1黑龙江完达山乳品有限公司质检中心，哈尔滨 150078； 2农业部乳品质量监督检验测试中心（哈尔滨），哈尔滨 150078）
摘 要：采用 G B 5413.11-2010 中钒钼酸铵显色法测定高蛋白大米粉中的磷，方法显色效果明显，线性好， 灵敏度高。在波长为 440nm 条件下，分光度与磷浓度在 1—10μg/mL 范围内呈线性关系，检出限为 0.223μg/mL， 测定高蛋白大米粉中磷的计算标准偏差为 0.744，相对偏差为 0.67％，总回收率为 95.2％。