细菌的分离纯化和接种实验

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

实验原理问答题：

1.为什么湖水用10－4、10－5、10－6稀释液进行平板稀释分离而不用更高或者更低的浓度？

答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开，使其成单个个体/细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。

2.为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养?

答：第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。

3.微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面？

答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射接种，活体接种等。

⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理，接种过程必须在煤气灯旁进行，接种环、玻璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置，操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触，往培养基是划线或点菌时动作要轻以防把培养基划破等。

四、实验步骤

1.制备细菌稀释液：

使用5ml移液管加4.5ml无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6标签的小试管中，用一根1ml的无菌移液管吸取10-2的湖水稀释液0.5ml放入贴有10-3标签的小试

六、思考题

1.氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillusferrooxidans,T.f ）为生物冶金重要菌种，属微生物中原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属。广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉和沉积硫内，尤以金属硫化矿和煤矿等酸性矿坑水（pH<4）中最为常见。其化能自养，专性好氧，嗜酸，革兰氏阴性，，主要利用利用CO2为碳源，并吸收氮、磷等无机营养来合成自身细胞。请思考其分离纯化的方法和步骤。

答：采取酸性矿坑水或实验室浸矿培养液作为菌液，在实验室用9K或Leathen 培养基反复分离纯化。

具体方法一：取菌液10mL，加入盛有100mL灭菌9K或Leathen液体培养基的250mL锥形瓶中，在30℃,120r/min的空气浴恒温摇床中培养，直至锥形瓶中的溶液变为红棕色，一般需4天。反复几次。然后采用固体培养基稀释涂布平板法分离纯化菌种以获得纯培养。在9K固体培养基上7～10天出现圆形凸起状小菌落（d≈1mm），将单独小菌落挑起，每个小菌落分别接种到装有5mL液体培养基的小试管中，以棉球封口，培养条件同上，直到小试管的液体颜色也变成红棕色。重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离，最后分离出优良菌株。

具体方法二：取菌液1mL，用pH=2.5的稀硫酸按每次稀释10倍，依次稀