蛋白纯化系统技术指标
蛋白的分离纯化详解
常用蛋白质电泳技 术
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
• SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS--PAGE）
• 等电聚焦电泳（ Isoelectric focusing- IEF）
• 双向电泳（ Two Dimensional Electrophoresis ）
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• 原理：蛋白质的净电荷取决于氨基 酸残基所带正、负电荷总和。
• 方法 – 电泳 – 离子交换层析
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溶解度
• 原理：由于蛋白质分子表面亲水 性和疏水性带电基团不同，因此 在溶剂中的溶解度不同。
• 方法： – 盐析法
– 有机溶剂沉淀法 – 等电点沉淀法
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分离纯化流程
原材料的获取
纯化
细胞破碎
研磨 超声 渗透压 酶 ……
蛋白溶解
酸、碱 醇 去垢剂 尿素 ……
粗提
沉淀 相分离 分子筛 ……
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精提
各种色谱 电泳分离 差速离心 ……
保存
浓缩
保存状态 保存条件
保存期限
……
• 分离纯化流程 • 预处理（沉淀、粗分离）-纯化（离子交换）
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4. 蛋白质免疫印迹技 术
( 重点 必须掌握）
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印迹法的基本原理
• 印迹（blotting）是生物大分子物质如核酸或蛋白质通 过不同途径转移到固相载体上的过程。
• 与凝胶相比，固相载体容易和各种探针发生化学或 免疫学反应。
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蛋白液相纯化系统技术参数
蛋白液相纯化系统技术参数.精确的全自动微量
柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气
阀。
2,流速：0. 001-25 ml/min （单泵）。
装柱模式可以双泵模式运行，最高达到50 nil/min：从低流速到50 ml/min的流速的变化只需要通过软件简单设置，不需要泵头的更换。
#3.流速准确度：±1.2%,流速精度：RSD<0. 5%,（条件：0. 25 - 25 ml/min, < 3 MPa, 0.8-2 cP）
*4.使用LED单一紫外冷光源（280nm）检测，无需预热。
*5 ,紫外检测范围：-6至I」+6 AU,线性：±5%,（条件：0-2 AU之间）6.光源和流动池分开设计，避免光源过热对样品的影响。
7.检测范围:0. 01 mS/cm—999. 9 mS/cm,宽广的电导范围,易于做疏水和反相层析。
8.缓冲液选择阀：4个缓冲液入口，内置气泡传感器保护层析柱。
9.圆形组分收集器具有滴感应器，防滴漏功能，可根据固定体积或峰收集进行自动收集。
10.圆形组分收集器可根据体积或峰自动收集，兼容3, 8, 15和50nli的收集管，最多可以同时放置175个3ml收集管,收集范围0. TSOniLo。
蛋白纯化原则和技术介绍
蛋白纯化原则和技术概览无论是蛋白研究还是应用，通常需要将蛋白利用不同的生物系统表达出来，然后进行分离和纯化。
研究实验室通常需要纯化微克或毫克级别的蛋白质，而工业上需要纯化数千克甚至数吨的蛋白质。
因此，蛋白纯化非常重要。
纯化过程中，主要需要考虑宿主污染、样品的可溶性、蛋白结构的完整性和生物活性。
蛋白的纯化可大致分为样品捕获、中度纯化阶段和精细纯化阶段3个阶段。
✓样品捕获：分离、浓缩和稳定化处理；✓中度纯化：去除核酸等其他细胞成分，可使用硫酸铵沉淀法；✓精细纯化：将靶蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，常用方法包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
蛋白纯化指导原则1. 明确目标，避免过度纯化或者纯化不够；表1. 对蛋白样本纯度要求的例子。
2、明确样本特性和主要的杂质，选择合适的纯化方法；可以通过检测蛋白稳定性窗口（如pH值、离子强度）和蛋白基础数据（如蛋白大小、等电点pl、疏水性、可溶性等）快速确定纯化技术组合。
3、能够快速检测蛋白的回收率、活性和杂质情况；4、尽量减少步骤，从而避免样本损失过多和活性降低过多；5、尽早除去蛋白酶等对样品有损害的杂质；6、尽量少使用添加剂，否则可能需要额外的步骤去除添加剂。
蛋白纯化方法由于样品和蛋白的性质各异，所含杂质也不尽相同，因此需要采用不同的蛋白纯化策略。
目前主要有六种蛋白纯化方法：凝胶过滤层析、离子交换层析、标签纯化、亲和层析、疏水作用层析、电泳等。
其他方法也可用于蛋白纯化，比如利用蛋白的热稳定性、蛋白酶解稳定性、溶解度等特性纯化蛋白。
1 凝胶过滤层析凝胶过滤层析是一种高效的蛋白分离纯化方法，根据分子大小的差异分离蛋白质混合物。
在蛋白溶液通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于不同蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒的能力也因此各不相同，大分子蛋白率先被洗脱出来，分子量越小，洗脱越晚，从而达到蛋白分离和纯化的目的。
一般来说，越细、越长的凝胶过滤层析柱的纯化效果越好。
蛋白质纯化色谱技术
手动（六通阀）进样器
进样位置
废液
样品
流动相
接色谱柱
进样阀
样品
采样位置
废液
流动相
接色谱柱
（ＬＯＡＤ）
（ＩＮＪＥＣＴ）
定量环
层析柱（填料/介质）
分离的关键场所 使用方法不同，先查阅说明书 注意清洗保养 防止气泡进入 样品及缓冲液的预处理 保湿
填料（层析介质）
分离官能团； 基质骨架； 粒径/分辨率；
ÄKTAexplorer
Fast method and process development and scale-up for proteins, peptides and nucleic acids
Fully equipped for development tasks
Options: Autosampler Sample pump Air sensors
04
峰拖尾：样品在柱滤膜上或凝胶床顶部沉淀
05
常见问题分析
四、疏水性相互作用色谱 (Hydrophobic Interaction Chromatography）
ÄKTAFPLC
Options: Valves Sample Pump Air sensors
Reliable, well proven technology High performance purification of proteins
ÄKTA prime
Options: Valves Sample Pump Air sensors
2
K＝ 固定相溶质浓度/流动相溶质浓度
3
分配系数反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能，是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数。
蛋白质纯化系统 AKTAprime
仪器描述
仪器说明
仪器标签
为实验室规模的蛋白质纯化而设计。和传统的手动操作比较，AKTAprime提供高速，高载量和组份收集的优点。 各式预装柱加上内置的应用模板，AKTAprime只需您按一个 键就可以进行纯化。
主要特点： * 容易使用 - 针对一般纯化的应用编程模板 - 所有层析技术的方法模板
file:///D|/webtopdf/蛋白质纯化系统 AKTAprime蛋白质纯化系统.htm[2010-1-8 22:46:38]
* 随时可用 - 所有必要部件已经整合在单一的系统中 - 精密设计使系统可被轻易移动到任何地方
* 经济和灵活 - 使用高质量的平台零件使开发成本大幅减低 - 可以用於任何纯化步骤中
技术参数： 手动控制，电脑数据采集和处理
AKபைடு நூலகம்Aprime 流速 0.1-50 ml/min 压力 0-2 MPa(292psi)
8通道程控缓冲液切换阀 UV 检测 254,280 nm 电导检测 1 μS/cm - 999.9 mS/cm 压力监控 电动混合 程控进样阀 收集器 - 95管 18 mm 试管自动收集
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蛋白质的高效表达和纯化技术
蛋白质的高效表达和纯化技术蛋白质是细胞中最为基本的分子，不仅构成细胞的基本结构，也参与到细胞的代谢、信号转导等生命活动中。
因此，蛋白质的高效表达和纯化技术是生命科学研究的重要基础。
蛋白质的表达技术主要包括原核和真核表达系统。
原核表达系统包括大肠杆菌和酵母表达系统，这两种表达系统都具有高效的蛋白质表达能力，并且易于操作和大规模生产。
在酵母表达系统中，通常会将目的蛋白质基因插入到酵母表达载体中，然后通过转化酵母细胞实现表达。
大肠杆菌表达系统则是将目的蛋白质基因插入到大肠杆菌表达载体中，然后通过转化大肠杆菌细胞进行表达。
相比于酵母表达系统，大肠杆菌表达系统具有更高的表达速率，但表达的蛋白质常常是未折叠的形态，需要进一步的纯化和折叠过程。
真核表达系统则利用真核细胞本身的细胞器完成蛋白质的表达和折叠，这类表达系统可以用于表达大多数复杂的蛋白质。
例如，哺乳动物细胞表达系统（如CHO细胞和HEK293细胞）是利用哺乳动物细胞自身的蛋白合成机制进行表达的，这种表达系统通常会得到高质量的蛋白质，但生产成本相对较高。
对于高效的蛋白质表达来说，关键是基因的优化和载体的选择。
在基因的优化方面，通常会进行基因的序列优化、信号肽的选取、启动子的选择等操作，以提高蛋白质的表达量和纯度。
而载体的选择则需要根据具体的表达需求进行选择，例如对于大肠杆菌表达系统来说，常用的载体有pET系列载体和pBAD系列载体；对于酵母表达系统来说，常用的载体有pYES2和pGAPZ系列载体；对于哺乳动物细胞表达系统来说，常用的载体有pCDNA3.1和pEF系列载体。
在蛋白质的纯化方面，常用的方法有离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤等。
离子交换层析是利用离子交换树脂对带有带电的蛋白质进行分离，在这个过程中，可以通过改变洗脱缓冲液的pH或离子浓度来调节分离效果。
亲和层析则是通过利用蛋白质与其特异性配体之间的亲和性实现分离，例如亲和层析树脂中的金属离子会与带有多个组氨酸残基的蛋白质结合形成配位键，从而实现分离。
akta fplc技术参数
AKTA FPLC 技术参数简介AKTA FPLC（Fast Protein Liquid Chromatography）是一种高效的蛋白质液相层析技术，常用于生物分离纯化领域。
它结合了液相层析和色谱技术，能够快速、高效地分离和纯化复杂的生物样品。
本文将详细介绍AKTA FPLC的技术参数，包括仪器规格、操作参数以及应用范围等内容，以帮助读者更好地了解该技术并合理选择使用。
仪器规格AKTA FPLC系统由多个核心组件组成，包括色谱柱、泵、检测器、自动采样器和控制软件等。
以下是一些常见的AKTA FPLC系统规格：1.色谱柱：通常为不锈钢或玻璃制成，内径范围从1 mm到30 mm不等。
2.泵：提供流体输送功能，通常有单泵或双泵可选。
3.检测器：用于检测和监测样品组分的变化，包括紫外-可见（UV-Vis）检测器和荧光检测器等。
4.自动采样器：可选组件，用于自动注入和采样样品。
5.控制软件：提供仪器操作和数据处理功能，通常具有友好的用户界面。
操作参数AKTA FPLC系统的操作参数对于成功进行蛋白质分离和纯化非常重要。
以下是一些常见的操作参数：1.流速：可以根据需要调整，通常在0.1 mL/min到100 mL/min之间。
2.柱温：控制色谱柱的温度，通常在4°C到80°C之间。
3.柱压：衡量流体通过柱子时产生的压力，可根据实验需求进行调整。
4.洗脱梯度：通过改变洗脱缓冲液的成分和浓度来实现目标分离效果。
应用范围AKTA FPLC技术广泛应用于许多生物领域，尤其是蛋白质纯化。
以下是一些常见的应用范围：1.蛋白质纯化：AKTA FPLC系统可以高效地纯化复杂混合物中的目标蛋白质。
通过选择合适的色谱柱、优化洗脱梯度和检测器设置，可以实现高纯度和高产量的蛋白质纯化。
2.抗体纯化：AKTA FPLC系统可用于抗体的分离和纯化。
通过选择具有亲和力的色谱柱，如蛋白A或蛋白G，可以高效地富集目标抗体。
蛋白质浓缩与纯化技术
★ ★★★ 需要有机溶剂 中，有损失生
物活性的风险
宁馨阁
提示： 1、 通过组和各种方法使纯化步骤之间的样品处理减至最少，以避免需要调节样品。第一
个步骤的产物的洗脱条件应适宜于下一个步骤的起始条件。 2、 硫酸铵沉淀是常用的样品澄清和浓缩方法，所以 HIC 是捕获阶段的理想方法。 3、 GF 很适宜在由浓缩效应的方法（IEX、 HIC、 AC）后使用，凝胶过滤对上样体积有限
宁馨阁
前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质 上亲和层析是把具有识别能力的配体 L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以 共价键的方式固化到含有活化基团的基质 M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂 M－L， 或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人 小层析柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体 有亲和力的物质 S 就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相 载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰。 然后，恰当地改变起始缓冲 液的 PH 值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把 物质 S 从固相载体上解离下来，并形成了第 M 个层析峰（见图 6－2）。显然，通过这一操 作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体 具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过 的固相载体经再生处理后，可以重复使用。
宁馨阁
二．重组蛋白纯化的基本策略
来源： 生物谷 >> 实 验 >> 蛋白实验 >> 蛋白纯化 >>
蛋白纯化技术简介
在固定相和流动相之间经过多次分配以不同的速率移
动，从而达到分离的目的。
蛋白质层析技术
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蛋白质层析技术
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❖ 层析技术基本原理
1. 吸附层析
混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相 对不同物质的吸附力不同而使混合物得到分离。
蛋白质纯化技术蛋白质纯化技术companylogo切向流过滤蛋白质纯化技术companylogo切向流工艺优化参数切向流流量跨膜压tmp透出液控制膜面积透析条件蛋白质纯化技术companylogocompanylogo具有透过液控制的切向流过滤系统示意图蛋白质纯化技术companylogo蛋白质纯化技术盐析等电点沉淀透析凝胶过滤层析离子交换层析亲和层析高压液相层析密度梯度离心companylogo蛋白质纯化技术companylogocompanylogo蛋白质纯化技术盐析等电点沉淀透析凝胶过滤层析离子交换层析亲和层析密度梯度离心companylogo层析技术层析分离又称色谱分离chromatographicresolutioncr或色层分离
亲水性聚合物--- 纤维素(Cellulose) 球状纤维素(Sephacel) 葡聚糖 (Sephadex)琼脂糖(Sepharose)
蛋白质层析技术 ❖ 根据目的蛋白的pI选择合适的缓冲液pH
▪ pH=pI时，蛋白质表面电荷为零；
▪ pH<pI时，蛋白质带正电荷；
▪ pH>pI时，蛋白质带负电荷。
强度相对较低
高效凝胶介质：颗粒尺寸小（一般为5~50 μm），机械强度相
对较高，柱效明显提高，适合于高分辨率或更快的分离。
蛋白质层析技术
❖ 琼脂糖凝胶 由β-D-半乳糖和3,6-脱水
(生物化学)蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技术摘要：蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。
本文分析了蛋白质分离纯化的特点及一般原则；综述了蛋白质分离纯化的传统技术：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层析、疏水作用层析、高效液相色谱层析(HPLC)、电泳法等及新型技术：亲和超滤、内含肽介导的蛋白质亲和纯化。
关键词：蛋白质分离纯化蛋白质是生命的物质基础,是生命活动的最终控制者和直接执行者,它参与生物体内几乎所有的生命活动过程,如生长、发育、遗传、代谢、应激、能量转换、信号传导等。
以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向。
对蛋白质进行纯化，得到高纯度的"高活性的蛋白质是生物学科研人员经常要面对的问题。
蛋白质的分离纯化主要包括4个步骤：预处理、蛋白质的抽提、蛋白质的粗分级和蛋白质的分离纯化[1]。
本文针对近年来有关蛋白质的分离纯化技术所取得的进展进行了综述,为今后的理论和应用研究提供依据。
1 蛋白质分离纯化的特点及一般原则1.1蛋白质分离纯化的特点1）大多数蛋白质产品是生物活性物质,在分离纯化过程中,有机溶剂、溶液pH值、离子强度的变化均可使蛋白质变性失活。
2）蛋白质产品在物料中含量很低,且物料组成非常复杂。
例如,利用基因工程菌发酵生产蛋白质,物料中含有大量组成复杂的培养基、菌体生产代谢物等,目标蛋白质的含量常常不到蛋白质总量的1%。
有些目标蛋白质存在于细胞内或在胞内形成包含体,为获取蛋白质,还需进行细胞破碎,结果物料中含有大量的细胞碎片和胞内产物。
3）含蛋白质产品的物料不稳定,蛋白质产品易受料液中蛋白水解酶降解。
4）很多蛋白质产品作为医药、食品被人类利用,因而要求蛋白质产品必须是高度纯化的,产品无菌、无致热源等[2]。
1.2蛋白纯化的一般原则1）蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
蛋白纯化系统一技术要求
蛋白纯化系统一技术要求1用途：快速纯化多种生物活性物质，如蛋白质、多糖、肽类、寡核苷酸、基因疫苗及病毒等2系统泵2.1精确的全自动微量柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀。
2.2单泵流速：0.01–150ml/min2.3装柱可以双泵模式运行，达到0.01–300ml/min2.4压力范围：0–5MPa(50bar，725psi)2.5粘度：0.35–5cP2.6具备恒压调速功能，自动根据压力调节流速输出，使压力保持稳定3样品泵3.1精确的全自动微量柱塞泵，单泵两泵头，每个泵头都有独立除气阀。
3.2流速：0.01–150ml/min3.3压力范围：0–5MPa(50bar，725psi)3.4粘度：0.7–10cP3.5样品泵有压力控制模式，确保压力不变的情况，自动调节流速4紫外可见检测器4.1使用氙灯光源，紫外/可见光切换时无需换灯，无需预热。
4.2波长范围：全波长检测器，190-700nm4.3检测范围：-6到+6AU，线性：2%，在0–2AU之间4.4检测波长：通过单色器可以连续选择、同时检测波长范围内任意3个波长4.5压力：0-2Mpa4.6光纤同时传导光源及采集数据，具有较高稳定性。
4.7光源和流动池分开设计，避免光源过热对样品的影响，测定准确度高。
4.8流通池：0.5mm光径，1ul流通池；2mm光径，2ul流通池；10mm光径，8ul流通池5电导检测器5.1检测范围：0.01-999.99ms/cm，宽广的电导范围，易于做疏水和离子交换层析。
5.2电导精确度：在0.3-300ms/cm范围内±0.01mS/cm或±2％之中大者。
实时自动检测，电脑利用校正因子做自动校正。
5.6压力：0-5Mpa5.7流通池：22ul6温度检测器6.1温度范围：0-99C6.2温度准确度：± 1.5C在4C–45C之间9pH检测器9.1检测范围:0-149.2精度:使用范围2-12精度为±0.1pH单位，温度补偿9.3稳定性:0.1pH单位/10小时9.4流通池：76ul10标配多个阀门：缓冲液选择阀≥2个，四元阀≥1个，样品选择阀≥1个，自动进样阀≥1个，柱位选择和方向阀≥1个，收集阀≥1个，pH计阀≥1个11在线自动配制缓冲液12内置组分收集器，盘架：适合3，8，15，50ml试管或24，48，96孔板，卡锁避免试管滑落；兼容250ml收集瓶13其它部件：混合器≥1个，内置压力感应器≥4个，内置气泡感应器≥3个，反压阀，多种柱架可选14控制软件14.1可追踪层析柱使用历史14.2可直接调用模板，删除、添加实验步骤，可自行修改每一步骤的参数。
AKTA_avant蛋白纯化系统参数
AKTAavant25全自动工艺开发蛋白纯化系统1.工作条件1)电力供应：单相220V±10%，50Hz（±1）2)工作温度：4°C-35°C3)相对湿度：20-95%，没有冷凝水4)仪器运行的持久性：仪器可连续正常运行。
5)工作条件及安全性要求符合中国及国际有关标准或规定。
2.设备用途及功能快速纯化多种生物分子，如蛋白质、多糖、肽类、寡核苷酸、核苷酸疫苗及病毒等，适合分离纯化活性物质。
其自动化的配置尤其适合方法优化和工艺开发。
1)简单迅速启动：预编应用工艺，编程模板，自动缓冲液制备。
2)全自动操作：从进样、编程、分离、峰收集、准确结果比较、数据处理以至打印报告皆自动化。
3)标配多种自动化配置：自动选择缓冲液、自动选择样品、自动选择柱位、自动选择收集位置和收集方式，便于方法优化和工艺开发。
4)人工智能：多种缓冲液配方（内置26种配方，可自行添加），一百多根层析柱数据库，多种纯化方案，内置层析专家。
5)整合专业的Design of Experiment实验设计理念，推荐实验方案，进行数据分析，模型建立，为条件优化提供系统的建议。
6)高效率功能：蛋白纯化量微克级以至百毫克级。
3.技术规格I.系统泵及样品泵1.1系统泵1.1.1精确的全自动微量柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀。
*1.1.2流速：0.001–25ml/min1.1.3压力范围：0–20MPa(200bar，2900psi)*1.1.4流速重复性：条件：0.25–25ml/min,<3MPa,0.8–2cP流速准确度：±1.2%，流速精度：RSD<0.5%1.1.5增量：1ul/min1.1.6粘度：0.35–10cP*1.1.7具备恒压调速功能，自动根据压力调节流速输出，使压力保持稳定。
1.2样品泵1.2.1精确的全自动微量柱塞泵，单泵两泵头，每个泵头都有独立除气阀。
参考技术参数第一包蛋白层析纯化系统设备名称数量技术参数
参考技术参数第一包蛋白层析纯化系统一、层析纯化系统（一）工作条件1.主电源：100-240 V，50-60 Hz2.工作温度：4︒C-35︒C3.其他：工作条件及安全性符合中国有关标准和规定；配置符合中国有关标准要求的插头，如没有，则需提供适当的转换插座；防尘，抗震动。
（二）设备用途仪器能快速纯化多种生物活性物质，如蛋白质、多糖、肽类、基因疫苗、病毒及天然小分子等物质，且具备国家计量局颁发的《计量器具型式批准证书》。
（三）性能指标3.1系统泵3.1.1全自动微量柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀3.1.2流速：0.001-25ml/min（单泵），装柱可以双泵模式运行，双泵流速：0.1–50ml/min3.1.3压力范围：0–20 MPa (200bar，2900 psi)3.1.4 流速重复性：0.25–25 ml/min，流速准确度：±1.2%，流速精度：RSD<0.5%3.1.5梯度准确度: ±0.6%（5~95%B，梯度流速范围：0.5-25ml/min，压力：0.2~2MPa，黏度：0.8~2cP）3.2 检测器3.2.1 紫外可见检测器3.2.1.1 LED单一紫外光源（280nm）检测，冷光源、无热辐射，不会使样品升温，无需预热3.2.1.2检测范围：-6 到+6 AU，线性：2%（在0–2 AU之间）3.2.1.3 光源和流动池分开设计，避免光源过热对样品的影响，测定准确度高3.2.1.4 标准流通池：2mm光径，2ul 流通池体积，30ul总体积。
第二包全自动细胞成像系统第三包生物安全柜等进口设备。
蛋白质的分离纯化--有机溶剂分离纯化法
蛋白质的分离纯化--有机溶剂分离纯化法蛋白质的分离纯化--有机溶剂分离纯化法蛋白质的分离纯化--有机溶剂分离纯化法文章出处：朱敏蛋白质的分离纯化--有机溶剂分离纯化法有机溶剂能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度降低。
有机溶剂与水作用能破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质在一定浓度的有机溶剂中沉淀析出。
常用的有机溶剂是乙醇和丙酮，由于有机溶剂的加入易引起变性失活，尤其乙醇和水混合释放热量，操作一般宜在低温下进行，且在加入有机溶剂时注意搅拌均匀以免局部浓度过大。
用此法所析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降。
分离后的蛋白质沉淀应立即用水或缓冲液溶解，以降低有机溶剂的浓度。
操作时的pH 值大多数控制在待沉淀蛋白质等电点附近。
有机溶剂在中性盐存在时能增加蛋白质的溶解度，减少变性和提高分离的效果。
一般在有机溶剂沉淀时添加中性盐的浓度在0.05mol 左右, 过多不仅耗费有机溶剂, 而且可能导致沉淀不好. 沉淀的条件一经确定, 就必须严格控制, 才能得到重复性结果. 有机溶剂浓度通常以有机溶剂和水容积比或用百分浓度素示. 故操作条件比盐析法严格。
许多有机溶剂，如碳链较长的醇，它溶于水，但有限度。
其量大到一定程度后则分成两相，一相以水为主，一相以有机溶剂为主。
某些第3组分的存在可以改变两相的比例和组成。
有许多蛋白质在两相中均能溶解，形成分配。
在同一个两相的溶剂系统中，不同的蛋白质有不同的分配系数。
根据这一原理，操作全部机械化的有逆流分溶。
因要求实验室温度恒定且操作也繁杂，虽一直有人在用但很不普遍。
分配层析也是应用这一原理，但在分离纯化蛋白质工作中用得不多，主要是因为多数蛋白质在有机溶剂中，特别是在易与水分相的溶剂中溶解度小且易变性。
疏水层析是近年发展的新方法。
它利用蛋白质表面有一部分疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。
洗脱时将盐浓度逐渐降低，蛋白质因疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化。
蛋白纯化因子和得率
蛋白纯化因子和得率
蛋白纯化因子是指蛋白质纯化过程中所采用的分离或纯化步
骤对目标蛋白质的富集程度。
它可以用来评估纯化步骤的效果，以及不同步骤之间的相互影响。
蛋白纯化因子可以通过比较纯
化前后的蛋白质浓度或活性来计算，常用的计算方法包括比值、百分比等。
得率是指目标蛋白质在纯化过程中的损失率，也称为回收率。
得率是评估蛋白质纯化过程中目标蛋白质回收情况的指标。
通
常用目标蛋白质的纯化后浓度与纯化前浓度或原始混合物中目
标蛋白质浓度的比值来计算。
得率的高低反映了纯化过程中目
标蛋白质的损失情况，高得率表示蛋白质纯化过程的效果好，
目标蛋白质回收率高。
项目四十九蛋白质层析系统技术参数教学用
*参数6
电导检测范围：≥1uS/cm –999.99mS/cm
2.3.7
参数7
收集器试管载量：18mm试管架：95根
2.3.8
参数8
自动收集软件：具备可通过电脑在线监测峰型，电导，PH值，紫外吸收等参数并通过电脑直接控制及存储图形及数据
2.3.9
参数9
自动压力传感器：具备系统一旦超压（如层析柱堵塞），压力传感器能防止柱损坏
2.3.10
参数10
自动收集器带三通阀,模式:体积收集，峰收集
2.3.11
参数11
上样环类型：3种类型包括100ul；2000ul；5000ul可选
2.3.12
参数12
可在一个层析柱上自动顺序纯化两个样品
3
售后服务
3.1
保修年限
≥2年
3.2
出现故障响应时间
维修到达现场时间≤ 6小时（本地）
维修到达现场时间≤24小时（外地）
项目四十九蛋白质层析系统技术参数
（教学用）
序号
技术和性能参数名称
招标参数和性能要求
备注
1
适用范围及用途
1.1
适用范围
（广义描述该设备适用范围）
蛋白纯化
1.2
工作用途
（具体到科室的应用场所）
简单快速纯化病原体蛋白质类毒力生物分子
2
功能配置
2.1
主要功能
（一行只写一个功能）
2.1.1
功能1
纯化蛋白
2.2
3.3
维修支持
配件供应时间≥10年
3.4
耗材及零配件
提供耗材及主要零配件目录（含报价）
3.5
维修资料
提供维修手册（Service Manual）或光盘≥1套
蛋白质浓缩与纯化技术
宁馨阁
前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质 上亲和层析是把具有识别能力的配体 L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以 共价键的方式固化到含有活化基团的基质 M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂 M－L， 或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人 小层析柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体 有亲和力的物质 S 就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相 载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰。 然后，恰当地改变起始缓冲 液的 PH 值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把 物质 S 从固相载体上解离下来，并形成了第 M 个层析峰（见图 6－2）。显然，通过这一操 作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体 具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过 的固相载体经再生处理后，可以重复使用。
精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。
分离方法的选择
根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法：
蛋白质的性质
方法
电荷（等电点）
离子交换（IEX）
分子量
凝胶过滤（GF）
疏水性
疏水（HIC）反相（RPC）
特异性结合
亲和（AC）
每一种方法都有分辨率、处理量、速度和回收率之间的平衡。 分辨率：由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现。总的来说，当杂质和目标蛋 白性质相似时，在纯化的最后阶段分辨率是重要因素。 处理量：一般指在纯化过程中目标蛋白的上样量。如上样体积、浓度等。 速度：在初纯化中是重要因素，此时杂质如蛋白酶必须尽快除去。 回收率：随着纯化的进行渐趋重要，因为纯化产物的价值在增加。
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技术标部分
仪器名称：蛋白纯化系统
数量：1套原装进口设备
用途：适用于实验室从分析、小规模制备，到中试规模的工艺摸索和制备，可通过凝胶过滤、离子交换、亲和层析、羟基磷灰石、疏水层析等层析谱技术，进行蛋白质、肽类、多糖、核酸等生物大分子和中草药与天然产物活性成分的分离、纯化和制备。
技术指标：
1.原装进口产品
2. 系统泵
*全自动柱塞泵，双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀
*单泵流速：0.001-10 ml/min
最大流速：20 ml/min
流速准确度：±2%，流速精度：RSD＜0.5%
梯度精度: ±＜0.8%，流速范围：0. 25-10 ml/min
具备恒压调速功能
3. 紫外检测器
*检测范围：0 - 3AU
*线性：±2%
光源和流动池分开设计，避免光源过热对样品的影响
4. 电导检测
*检测范围：0.01 mS/cm－999 mS/cm
电导精确度：±0.01 mS/cm，实时自动检测
5. 温度检测
*温度范围：0 - 99 C
温度准确度：±1.5°C
6. 阀门
自动进样阀：1个，自动切换上样、进样和冲洗三个状态
出口阀组件：1个
自动柱位选择阀：1个，无需改变管路连接即可实现旁路及正反向洗脱功能
7. 组分收集器
收集方式：可根据体积、峰或时间自动收集
收集数目：≥100个
收集范围：0.1ml-50ml
具有滴感应器，防滴漏功能
流路：PEEK惰性材料（以保持蛋白活性）耐受有机溶剂
8. 软件
流路实时在现，实时监控和控制
内置层析柱和凝胶信息
具有自动积分、一键积分功能，操作简单，可打印结果报告
9. 配件
上样环：500um，1ml，5ml各一个
预装柱，包含His标签亲和介质等
PH计
10. 配套电脑参数
4核处理器、内存8 GB，独立显卡4G显存、硬盘1 TB，可刻录光驱，24寸的高清显示器
11. 技术支持
技术人员和甲方人员一起设计教学实验，并定期参与相关实验课程。