临床分子生物学检验临床应用43页PPT
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分子诊断的临床应用课件
分子诊断的临床应用
结 果 95例患者的尿沉渣形态学检查，35例患者的尿沉
尿液中BK病毒核酸定量检测14例尿液中检测到BKV DNA，病毒载量为4×103～2×109/ml，平均为5.6×105/ml。发生病毒尿的中位时间为移植术后14个月。
分子诊断的临床应用
尿液中BK病毒核酸定量检测分子诊断的临床应用42
分子诊断的临床应用
decoy细胞分子诊断的临床应用36
巴氏染色的decoy细胞
未经染色的decoy 细胞
分子诊断的临床应用
巴氏染色的decoy细胞未经染色的decoy 细胞分子诊断的
BK病毒感染的检测
BK病毒的检测血、尿中BK病毒核酸定量检测尿液中decoy细胞检查尿沉渣涂片原位杂交组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
分子诊断的种高危型HPV。分子诊断的临
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。
分子诊断的临床应用
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能
分子诊断的临床应用
DNA重组技术(DNA recombination)
分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊 断，也能确定个体对疾病的易感性，判别 致病基因携带者并对疾病的分期、分型、 疗效监测和预后作出判断。分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组 成部分，成为一门新的学科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。
结 果 95例患者的尿沉渣形态学检查，35例患者的尿沉
尿液中BK病毒核酸定量检测14例尿液中检测到BKV DNA，病毒载量为4×103～2×109/ml，平均为5.6×105/ml。发生病毒尿的中位时间为移植术后14个月。
分子诊断的临床应用
尿液中BK病毒核酸定量检测分子诊断的临床应用42
分子诊断的临床应用
decoy细胞分子诊断的临床应用36
巴氏染色的decoy细胞
未经染色的decoy 细胞
分子诊断的临床应用
巴氏染色的decoy细胞未经染色的decoy 细胞分子诊断的
BK病毒感染的检测
BK病毒的检测血、尿中BK病毒核酸定量检测尿液中decoy细胞检查尿沉渣涂片原位杂交组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
分子诊断的种高危型HPV。分子诊断的临
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。
分子诊断的临床应用
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能
分子诊断的临床应用
DNA重组技术(DNA recombination)
分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊 断，也能确定个体对疾病的易感性，判别 致病基因携带者并对疾病的分期、分型、 疗效监测和预后作出判断。分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组 成部分，成为一门新的学科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。
分子生物学在微生物检验中的应用优秀PPT资料
性
•增加定量的精确性
全程监控,准确的算法进行定量
•结果分析更加快捷方便,无需跑胶
基因和蛋白质芯片
原理
基因芯片(gene chip)也称为DNA微距阵(DNA
microarray)、DNA芯片(DNA chip)等。它是指
将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地高密度地
排列固定于玻片、硅片等固相载体上，然后与
因芯片，蛋白质芯片，组织芯片等。
荧光定量 PCR（real-time PCR)
此外，该试剂盒还具有检测特异
HCG)，人生长激素(HGH)含量进行定量分析, 测定9种肿瘤(如
荧光定量PCR标记方法
可以快速分类和定量分析
National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)圈定的最致
长因子（VEGF）和人促黄体生成激素（hLH）等也都有了诊断基
因芯片。在肿瘤方面,蛋白质芯片已成功地应用于诊断白血病、
乳腺癌、心力衰竭等疾病的诊断,诊断用的抗体芯片有霍乱毒素、
待测的标记样品的基因按碱基互补配对原理进
行杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯
片进行扫描，再经计算机软件处理，从而获取
大量的信息。
基因微阵列技术优势
基因微阵列技术作为一种高通量的检测
新技术,可以同时检测数以万计的生物分
子，现在已经广泛应用于各个方面，其
中包括病原生物的监控和诊断。
发现未知病原体。例如确定SARS-CoV应
性的P53芯片，能诊断药物代谢缺乏症的细胞色素P450芯片. 在
病原体的检测方面, 成功的例子有HBV、丙型肝炎病毒HCV、甲型
肝炎病毒（HAV）、庚型肝炎病毒（HGV）、巨细胞病毒（CMV）、
分子生物学技术及其应用(共36张PPT)
3’
ATGCGGTACCAT
5’ 测序模板
5’
TA
5’
TACGCCA
第一套反应
5’
TACGCCATGGTA
TA C TACGC
第二套反应
TACGCC
TACG TACGCCATG
第三套反应
TACGCCATGG
T TACGCCAT TACGCCATGGT
第四套反应
A CGT
A
TACGCCATGGTA
T
②促进 突变基因对Bip基因表达的促进作用降低，进而影响了感光细胞中
的蛋白质折叠
11.（1）mRNA 核糖体 （见右图）
干扰人类其他基因的表达
（2）CO2（1分） 选择透过（1分） 种的肠癌细胞没有排斥反应
无胸腺，失去特异性免疫，对接
（3）反义脱氧核苷酸链 瘤体重量 （更加）接近100%
1. 5对 1、2、4
2.AD
3.⑴正常启动子P左侧序列未知 BglII和DNA连接
MscI C和B
⑷卡那霉素
X-Gluc 正常启动子P驱动gus基因仅在幼根及根毛中
特异性表达，而缺失体中gus基因在根、叶和花粉均表达
M、Q
4.（1）1、2、3 第3和第2枝段的PbmRNA 依次出现
由第1枝段依次向2、3枝段运输
（2）逆转录 mRNA
TACGCCATGGT
G TACGCCATGG
G
TACGCCATG
T
TACGCCAT
A
TACGCCA
C TACGCC
C TACGC G TACG
C TAC A TA TT
2.自动化测序 双脱氧链终止法荧光标记原理
ddATP-绿色荧光 ddTTP-红色荧光 ddCTP-蓝色荧光 ddGTP-橙色荧光
分子生物学的有关应用医学PPT
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27
1. 2. 3.
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28
目前，随着基因克隆技术趋向成熟和基因测 序工作逐步完善，后基因时代已经到来。20世 纪末数理科学在生物学领域广泛渗透，在结构 基因组学，功能基因组学和环境基因组学蓬勃 发展的形势下，分子诊断学技术将会取得突破 性进展，也使检验医学进入了崭新的领域，为 学科发展提供新的机遇。
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17
简介：生物芯片是指将大量探针分子固定于 支持物上( 通常支持物上的一个点代表一种 分子探针) , 并与标记的样品杂交或反应, 通 过自动化仪器检测杂交或反应信号的强度而 判断样品中靶分子的数量。
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原理：在检测病原菌方面, 由于大部分细菌、病 毒的基因组测序已完成, 将许多代表每种微生物 的特殊基因制成1 张芯片, 通过反转录可检测标 本中的有无病原体基因的表达及表达的情况, 以
分子生物学技术
在医学检验中的应用
编辑版ppt
1
分子生物学技术
在医学检验中的应用
一、引语
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2
定义：分子生物技术也称之为生物工程, 是现代生 物技术的主要标志, 它是以基因重组技术和细胞融 合技术为基础, 利用生物体( 或者生物组织、细胞 及其组分) 的特性和功能, 设计构建具有预期性状 的新物种或新品系, 以及与工程原理相结合进行生 产加工, 为社会提供商品和服务的一个综合性技术 体系。
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21
应用:
1.生产基因 工程药物：
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23
应用:
2.生产发酵 工程药物：
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24
应用:
分子诊断技术的临床应用ppt课件
二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的 目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至 十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细 胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴 定。
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人 在
测 优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB） 其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
的平衡点。
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化，使应用领
域迅速扩大，PCR技术成为了分子生
物学中的一项突破性技术。
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
二 肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因
医学分子生物学实验ppt课件
3）在电泳中形成肉眼可见的指示带，可判断DNA电泳的速度
和位置
精选编辑ppt
50
荧光染料 (如SYBR Green I)
荧光染料SYBR Green I嵌入DNA的碱基平 面后，本身无荧光的DNA在紫外光激发下 发出荧光，且荧光强度与DNA含量呈正比。
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SYBR Green I
51
DNA 分子标准物 (DNA Marker)
用大量程的移液器移取小体积的液体 装配吸头时气密性不好，吸头不匹配 吸液速度和放液速度太快
自我检测漏气：吸取液体，垂直静置5秒，
观察是否有液滴流出；
规范操作，损坏赔偿！
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21
实验报告要求
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22
实验报告按下列要求书写
❖ 1. 实验题目——当次实验
❖ 2. 实验原理——简明扼要，有针对性
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5
6
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44
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琼 脂 糖 凝 胶 电 精选编辑ppt 泳 系 统
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紫外投射分析仪：
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47
凝胶成像系统
精选编辑ppt
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琼脂糖凝胶电泳操作步骤
❖ 样品：PCR产物 10 µl ❖ 加上样缓冲液2 µl，加荧光染料如Sybr Green I
注意点：缓慢转动，记录时间
❖ 停止（转速按钮回零，时间按钮回零，完全停止后 轻轻取出离心管）
精选编辑ppt
6
使用注意事项
❖ 1. 样品需对称放置； ❖ 2. 先调节离心时间，离心开始缓慢提高转速
至设定值； ❖ 3. 离心结束需等转子完全停止后才能打开离
分子生物学技术
第16页，本讲稿共43页
降温复性。）核酸探针是指带有标记物的已知 序列的核酸片段，它能和与其互补的核酸序列 杂交，形成双链，所以可用于待测核酸样品中 特定基因序列的检测。每一种病原体都具有独 特的核酸片段，通过分离和标记这些片段就可 制备出探针，用于疾病的诊断等研究。
第17页，本讲稿共43页
(一) 核酸探针的种类
1. 中心法则（central dogma）：既遗传信息是 从DNA流向RNA，再由RNA流向蛋白质 而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递，只是
一种理论上的可能性，迄今尚未得到证实。
第6页，本讲稿共43页
2. 密码子：每3个碱基编码一种氨基酸，就会 编码出64种（43=64）不同的氨基酸。蛋白质 分子是由20种不同的氨基酸构成的，因此，1种 氨基酸可有几个不同的密码子，既3个碱基甚
等。 (3) Northern印迹(Northern blot)Northern印迹是指
将RNA片段变性及电泳分离后，转移到固相 支持物上的过程。RNA样品经
第25页，本讲稿共43页
近年来液相杂交技术有所发展。液相杂交与 固相杂交的主要区别是不用纯化或固定的靶 分子，探针与靶序列直接在溶液里作用。液 相杂交步骤有所简化，杂交速度有所提高， 增加了特异性和敏感性，但与临床诊断所要 求的特异性和敏感性还有一定的距离。 各种杂交技术中，膜上印迹杂交技术应用最 为广泛，它由以下三个基本过程组成。 1.核 酸印迹技术 (1) 斑点印迹(Dot-blot) 将待测核酸样品变性 后直接点样在膜上，称之为斑点印迹。
码两种甚至数种的基因产物。
第9页，本讲稿共43页
（四）基因的表达与调控
结构基因(structural gene)：编码细胞成份，如代 谢酶类、转运蛋白质和细胞骨架成份等的基因。 调节基因（regulatory gene)：编码控制其他基
降温复性。）核酸探针是指带有标记物的已知 序列的核酸片段，它能和与其互补的核酸序列 杂交，形成双链，所以可用于待测核酸样品中 特定基因序列的检测。每一种病原体都具有独 特的核酸片段，通过分离和标记这些片段就可 制备出探针，用于疾病的诊断等研究。
第17页，本讲稿共43页
(一) 核酸探针的种类
1. 中心法则（central dogma）：既遗传信息是 从DNA流向RNA，再由RNA流向蛋白质 而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递，只是
一种理论上的可能性，迄今尚未得到证实。
第6页，本讲稿共43页
2. 密码子：每3个碱基编码一种氨基酸，就会 编码出64种（43=64）不同的氨基酸。蛋白质 分子是由20种不同的氨基酸构成的，因此，1种 氨基酸可有几个不同的密码子，既3个碱基甚
等。 (3) Northern印迹(Northern blot)Northern印迹是指
将RNA片段变性及电泳分离后，转移到固相 支持物上的过程。RNA样品经
第25页，本讲稿共43页
近年来液相杂交技术有所发展。液相杂交与 固相杂交的主要区别是不用纯化或固定的靶 分子，探针与靶序列直接在溶液里作用。液 相杂交步骤有所简化，杂交速度有所提高， 增加了特异性和敏感性，但与临床诊断所要 求的特异性和敏感性还有一定的距离。 各种杂交技术中，膜上印迹杂交技术应用最 为广泛，它由以下三个基本过程组成。 1.核 酸印迹技术 (1) 斑点印迹(Dot-blot) 将待测核酸样品变性 后直接点样在膜上，称之为斑点印迹。
码两种甚至数种的基因产物。
第9页，本讲稿共43页
（四）基因的表达与调控
结构基因(structural gene)：编码细胞成份，如代 谢酶类、转运蛋白质和细胞骨架成份等的基因。 调节基因（regulatory gene)：编码控制其他基
分子生物学技术的临床应用PPT精品课程课件讲义
DNA
RNA
核酸的一般理化性质
多元酸，具较强的酸性。 DNA是线状高分子，粘度很大，碱性条件下稳定；RNA分子较 小，粘度也小，对酸稳定。 核酸分子在机械力的作用下易发生断裂。
碱基有共轭双键，具紫外吸收特性，最大吸收峰在260nm。
可对核酸进行检测和定量，也可分析纯度。 核酸变性 ——加热、极端的pH、有机溶剂如甲醇、乙醇、尿素及甲 酰胺等。
核苷酸链（一级结构）
5末端 (游离磷酸基)
3'，5'–磷 酸二酯键 3末端 (游离羟基)
DNA的双螺旋结构
特征：
①两条链以反向平行的方式围绕同一中心轴向右盘绕
②主链处于螺旋的外侧（核糖+磷酸） 亲水核糖平面与螺旋轴平行
碱基处于螺旋的内侧，与中轴垂直
③螺距：10bp—3.4nm—3600 đ=2nm ④大沟与小沟：
蛋白质与蛋白质相互作用
酵母双杂交；蛋白质免疫共沉淀；
The Nobel Prize in Physiology or Medicine：
1978年 Arber等
限制性核酸内切酶的发现
2006年 Fire，Mello 2007年 Smith等
RNA干扰 基因打靶
The Nobel Prize in Chemistry ：
基因病
病因学诊断
分子诊断-第四代实验室诊断技术
诊断指标的选择； 诊断结果的判定；
限制性酶谱分析
分子生物学技术的临床应用
原位杂交技术 －筛选21三体 （间期）
13号染色体（绿）和21号染色体（红）探针与羊水间期细胞 杂交，可见两个绿色信号和三个红色信号，说明是21三体。
医学分子生物学ppt完整版
通过蛋白质组学技术可以筛选疾病相关的生物标志物，为疾病的早期诊
断和治疗提供新的思路和方法。
06
基因诊断与治疗
基因诊断的原理与方法
原理
基因诊断是基于DNA或RNA水平上的检测，通过检测特定基因序列的存在、缺失或变异，来判 断个体是否携带某种疾病相关的基因。
方法
包括聚合酶链式反应（PCR）、基因测序、基因芯片技术等。这些方法可以检测基因突变、基 因多态性、基因表达水平等，为疾病的早期诊断和预后评估提供依据。
基因编辑技术的发展与挑战
发展
基因编辑技术是一种能够在DNA水平上对基因进行精确编辑的技术，包括CRISPRCas9系统、TALENs和ZFNs等。这些技术的发展为基因治疗提供了新的手段和思路。
挑战
基因编辑技术虽然具有巨大的潜力，但也面临着许多挑战，如安全性问题、伦理问 题等。此外，基因编辑技术的效率和准确性也需要进一步提高和完善。
基因表达的调控
研究基因表达在时间和空间上的调控机制， 包括转录因子、表观遗传学修饰等。
分子生物学与医学的关系
疾病发生的分子基础
分子生物学可以揭示疾病发生的分子 机制，为疾病的预防、诊断和治疗提
供理论依据。
药物设计与研发
分子生物学的发展促进了药物设计与 研发领域的进步，使得药物更加具有
针对性和有效性。
基因治疗的策略与应用
策略
基因治疗是通过向患者体内导入正常的基因或修复患者体内有缺陷的基因，以 达到治疗疾病的目的。根据导入基因的方式不同，基因治疗可分为体外基因治 疗和体内基因治疗。
应用
目前基因治疗已经在多种疾病中进行了尝试，如遗传性疾病、感染性疾病、恶 性肿瘤等。虽然取得了一些成果，但仍存在许多挑战和问题需要解决。
【PPT】分子生物学技术在临床检验中的应用.
细胞遗传学（Cytogenetics）
分子遗传学（Molecular Genetics）
细胞遗传学（Cytogenetics）
• 是遗传学的一个分支 • 主要研究染色体和细胞分裂( Chromosomes and cell division) • 常用的分析技术包括G带染色(G-banded)等和分 子细胞遗传学技术(Molecular Cyrogenetics) 如 FISH (Fluorescent in situ hybridization) 和 CGH(Comparative genomic hybridization)
分子遗传学技术
（ Techniques of molecular biology）
• • • • • •
Forward genetics Reverse genetics Gene Therapy Techniques in molecular genetics Amplification: PCR and cloning DNA in bacteria Separation and detection: cell culture, DNA Isolation, mRNA isolation • The molecular genetics project • 基因表达定量
什么是分子生物学技术？
What are techniques of molecular biology?
• • • • • • • • • • • Expression cloning Polymerase chain reaction (PCR) Gel electrophoresis Southern blotting Northern blotting Western blotting Sequencing Linkage anlysis Arrays Allele specific oligonucleotide Abandoned technology
分子遗传学（Molecular Genetics）
细胞遗传学（Cytogenetics）
• 是遗传学的一个分支 • 主要研究染色体和细胞分裂( Chromosomes and cell division) • 常用的分析技术包括G带染色(G-banded)等和分 子细胞遗传学技术(Molecular Cyrogenetics) 如 FISH (Fluorescent in situ hybridization) 和 CGH(Comparative genomic hybridization)
分子遗传学技术
（ Techniques of molecular biology）
• • • • • •
Forward genetics Reverse genetics Gene Therapy Techniques in molecular genetics Amplification: PCR and cloning DNA in bacteria Separation and detection: cell culture, DNA Isolation, mRNA isolation • The molecular genetics project • 基因表达定量
什么是分子生物学技术？
What are techniques of molecular biology?
• • • • • • • • • • • Expression cloning Polymerase chain reaction (PCR) Gel electrophoresis Southern blotting Northern blotting Western blotting Sequencing Linkage anlysis Arrays Allele specific oligonucleotide Abandoned technology
分子生物学与临床课件
分子生物学与临床课件
25
遗传病检测
¨ 遗传病是由基因在性细胞的突变引起的
¨ 一。PCR结合等位基因特异性寡核苷酸探针法
¨ 对已知突变热点基因检测：PCR-目的基因-膜
分子生物学与临床课件
9
三.标本的运送
¨ 标本采集后必须尽快送至实验室。经过适当稳定化处理的 标本可在常温下通过邮寄运送。如用于DNA扩增检测的 EDTA抗凝全血标本及用于RNA扩增检测的经GITC稳定化 处理的标本，通常在运送时，应采用不易破碎的容器装载 标本。用于RNA检测的标本，如果未经稳定化处理，则必 须速冻后，放在干冰中运送。
分子生物学与临床课件
17
沙眼衣原体Chlamydea trachomatis Ct
¨ 病原学：
¨ 三个生物变种： ¨ 沙眼生物变种—A-K12个血清型 ¨ 性病淋巴肉牙肿变种LGV—3个血清型，人是天然
宿主 ¨ 鼠生物变种—鼠是天然宿主，不侵犯人，与鼠肺
炎有关 ¨ 病原学检验：涂片、抗原抗体检测、核酸检测
¨ 根据沙眼衣原体内源性质粒序列设计合成的一
¨ 对引物:
¨ 1:GGACAAATCGTATCTCGG;2:GAAACCAACTCTAC GCTG.
¨ 扩增片段517,可扩增15个已知血清型的沙眼衣原体.实验 证明,此引物不扩增其他眼部常见微生物和正常人核酸,而 对临床49例诊断为沙眼的标本阳性率为63%,敏感性和特 异性均超过细胞培养法和免疫荧光法与酶免疫法等常规 方法,灵敏度达到能检出1个衣原体DNA分子.
本，并对运送者给以详细的指导。对于后者，建议使用高质量的 商品核酸提取试剂。
分子生物学与临床课件
12
一.内源性物质(影响因子）
¨ 1.类风湿因子 ¨ 2. 补体 ¨ 3.嗜异性抗体 ¨ 4.嗜靶抗原的自身抗体 ¨ 5.医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体 ¨ 6.交叉反应物质 ¨ 7.标本中其它成分的影响
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1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好ห้องสมุดไป่ตู้。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
临床分子生物学检验临 床应用
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现在必须完全保持党的纪律， 否则一 切都会 陷入污 泥中。 ——马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思