《细胞工程》第4章：动物细胞培养工程
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的概念动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的操作，以获得人们所需要的生物产品或细胞本身。
它是现代生物技术的重要组成部分，涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植等多个方面。
二、动物细胞培养（一）基本原理细胞培养的基本原理是细胞的增殖。
细胞在适宜的环境中，能够吸收营养物质，进行新陈代谢，并通过分裂增加数量。
（二）培养条件1、无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还会添加一定量的抗生素，以防止培养过程中的污染。
2、营养物质：包括糖、氨基酸、无机盐、维生素等，这些物质要按照细胞所需的种类和量进行精确配置。
3、适宜的温度和 pH：哺乳动物细胞的培养温度一般在 365℃左右，pH 则在 72 74 之间。
4、气体环境：细胞培养所需的气体主要有氧气和二氧化碳，氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则用于维持培养液的 pH。
（三）培养过程1、取材：通常从动物的组织或器官中获取细胞，如从胚胎或幼龄动物的器官组织中获取细胞，其分裂能力更强。
2、原代培养：将取得的组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶中培养。
3、传代培养：当细胞贴满瓶壁时，需要用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱落下来，然后分瓶继续培养。
三、动物细胞融合（一）概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
（二）诱导融合的方法1、物理法：如电激融合法。
2、化学法：常用的诱导剂是聚乙二醇（PEG）。
3、生物法：如灭活的病毒。
（三）应用1、制备单克隆抗体：这是动物细胞融合技术最突出的应用。
2、用于基因定位和染色体转移等研究。
四、单克隆抗体（一）概念单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
（二）制备过程1、给小鼠注射特定的抗原，使其发生免疫反应，产生能分泌特定抗体的 B 淋巴细胞。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的定义和范围动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的遗传操作以及细胞和组织培养技术，以改造细胞、创造新的生物品种或生产生物产品的一门综合性科学技术。
其范围涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植、细胞重组、转基因动物等多个方面。
二、动物细胞培养技术（一）基本原理细胞培养是动物细胞工程的基础，其原理是细胞具有分裂和生长的能力。
在适宜的条件下，细胞可以不断增殖并保持一定的生理特性。
（二）培养条件1、无菌环境：防止微生物污染是细胞培养成功的关键。
2、合适的培养基：包含细胞生长所需的营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐等。
3、适宜的温度和 pH：一般来说，培养温度在 37℃左右，pH 在 72 74 之间。
4、气体环境：通常需要 95%的空气和 5%的二氧化碳，二氧化碳用于维持培养基的 pH 稳定。
（三）培养过程1、取材：从动物体内取出组织或器官，进行处理以获得单细胞。
2、原代培养：将获得的细胞直接培养，这是细胞培养的第一代。
3、传代培养：当原代培养的细胞生长到一定密度时，进行分瓶培养。
（四）应用1、生物制品的生产，如疫苗、抗体等。
2、细胞生物学和分子生物学的研究。
3、药物筛选和毒性测试。
三、细胞融合技术（一）原理细胞融合是指两个或多个细胞通过物理、化学或生物方法融合成一个杂种细胞的过程。
其原理基于细胞膜的流动性。
（二）方法1、病毒诱导融合：使用某些病毒，如仙台病毒，促使细胞膜融合。
2、化学诱导融合：常用的化学试剂有聚乙二醇（PEG）。
3、电融合：通过电场作用使细胞排列紧密接触，进而融合。
（三）应用1、单克隆抗体的制备：将免疫小鼠的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体。
2、细胞遗传和细胞免疫的研究。
四、细胞核移植技术（一）原理细胞核移植是将一个细胞的细胞核移植到另一个去核的细胞中，使其发育成一个新的个体。
这基于细胞核的全能性，即细胞核包含了生物体发育所需的全部遗传信息。
动物细胞工程(课件ppt课件
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5
动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动
胰蛋白酶
加培养液
单个细胞
细胞
物的组织、器官 剪碎
制成 悬浮
液
细胞部系分细胞“癌变”，细胞株
遗传物质改变，无 限传代
养原 代 培
壁细 胞 贴
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
动物细胞培养不能
传代培养
最终培养成动物体 ppt课件完整
6
动物细胞生长特性
• 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞 悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养， 称为传代培养。
• 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞， 大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这 种传代细胞为细胞株。
• 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状 态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养 条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
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4
阅读课本P44，简述动物细胞培养的基
本过程
1、动物细胞培养的原理是什么？ 细胞增殖
2、从动物机体中要取出哪些相关组织？并 解释 原因。
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化 程度低，容易培养。
3、组织分散成单个细胞的方法是什么？其理论依 据是什么？ 4、动物细胞体外培养需要满足哪些条件？
么成份？
胰蛋白酶水解蛋白质 蛋白质
③.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
蛋白质和磷脂
能
④.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个 细胞要注意什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？ 为什么？
注意时间的控制
生物制药工程：第四章-动物细胞工程制药
③ 保证有适量的氧气供应； ④ 需要随时清除细胞代谢中产生的有害产物； ⑤ 有良好的适于生存的外界环境； ⑥ 及时分种，保持合适的细胞密度；
一、动物细胞的培养条件
1. 器材的清洗和消毒
Sterilization, disinfection: • Spraying Alcohol • UV light • Autoclave • Irradiation • Dry heating • Bleaching?
该细胞是成纤维细胞，能产生胶原，培养基用 BME （Eagle’s basal medium）加小牛血清，pH控 制 在7.2。细胞的倍增时间为24h，有限寿命为50 代， 上世纪60年代被广泛用于制备疫苗。
（2）BHK-21：
1961年从5只生长1天的地鼠幼鼠的肾脏中分离的。 现在广泛采用的是1963年用单细胞分离的方法经 13次的克隆的细胞。
2.基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选
DNA导入动物细胞的常用方法
融合法
化学法
物理法
病毒法
细胞融合法 DNA-磷酸钙沉淀法 电穿孔法
脂质体介导法 DEAE-葡聚糖法 显微注射法
原生质融合法 染色体介导法
基因枪法
微细胞介导法
鬼影红细胞介导法
细胞融合法: cell fusion 脂质体介导法: liposome mediated gene transfer 原生质融合法: protoplast fusion 微细胞介导法: microcell mediated method 鬼影红细胞介导法: ghost mediated method
成纤维细胞,通常用的培养基 为DMEM培养基，添加7%胎 牛血清。过去多用于增殖病毒， 包括多瘤病毒、口蹄疫病毒和 狂犬病疫苗，现在已被用于构 建工程细胞。
043动物细胞工程-第四章第三节 细胞的基本培养技术
4．重新加入TdR培养基(浓度同上)进行第2次阻断，作用16 h。
5．再弃掉TdR培养基，Hanks液洗2—3次后换上普通培养基。第2次 TdR释放0 h时取样则细胞处于G1/S期交界处；如2-7 h取样则为不同 阶段的S期细胞。 注意：具体TdR作用和释放的时间应参考每一种待 同步化细胞的细胞周期各时相测定的参考值，也可根据经验确定。
有的只有永生性和无异体接种致癌性，有些则相反（恶性）。
第四节 细胞系和细胞株的建立 一、细胞系和细胞株的种类 1．初代培养 初代培养又称原代培养，即直接从体内 取出的细胞、组织和器官进行的第一次的 培养物。
2．细胞系 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞 系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系(finite cell line)；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞 系或无限细胞系(infinite cell line)。
位是否准确、组织是否保持活性、材料处理是否恰当，直接
1.鸡胚组织的取材：用于病毒与疫苗的研究
受精鲜蛋--孵化箱37℃孵育9-12d--从气室处
破壳--挑取鸡胚--按需取材。
2.鼠胚组织的取材：常用材料，易于培养。
杀死小鼠---75%酒精溶液整体消毒2--3s---固
定---剪开皮肤解剖取材。
2.取鼠胚：常用 材料，易于培养。
一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然 的生长阶段。
完成了从体内环境到体外环境的过渡和适
应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力
取材——分离细胞——接种
一、原代培养
优点：组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很 大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反映体内生 长特性，很适合作药物测试、细胞分化等实验研究。 （一）．组织取材 决定实验的成败。 取材是原代培养的最初环节，取材的部
动物细胞工程复习
学习指导案
间
[问题]细胞胞核移植技术的意义是什么？
①可以快速繁殖动物；②属于无性繁殖，可保持优良性状。
3.、动物细胞融合
3.1诱导融合的方法：
灭活的病毒，如：灭活的仙台病毒。
化学物质，如：聚乙二醇物理方法，电激等3.2动物细胞融合的原理
3.3动物细胞融合最重要的用途是：制备单克隆抗体
4、单克隆抗体
4.1 单克隆抗体的制备绘制流程图
理解应用
绘制流程图
边提问
边展示
创设情境
激发兴趣
提问
分析流程
图
5种细胞
2次筛选
2种培养
2种应用
10
15
4.2单克隆抗体的优点：
与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。
4.3应用主要有：
（1）作为诊断试剂
（2）用于治疗疾病和运载药物：作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤。
高三生物一轮复习动物细胞工程(4)
领域发挥大作用。
5.诱导多能干细胞（iPS细胞） （1）胚胎干细胞的局限性： 胚胎干细胞必须从_胚__胎__中获取 ，涉及_伦_理__问__题__,因而限制了在医学上的应用。
（2）诱导多能干细胞概念： 通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，称为诱导
细胞株 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质
没有发生变化。
细胞系 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，具有癌细胞的特点，失去
接触抑制，可能在培养条件下无限制的传代下去。
区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
三、干细胞培养及其应用
动物细胞培养
动物细胞 动物细胞融合技术与单克隆抗体
工程
动物细胞核移植技术
克隆动物
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养概念：指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适 宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。2.动物细胞培
养的原理：细胞增殖（有丝分裂）。3.动物细胞培养的地位：动物细胞工程的基础。
上皮细胞
肌细胞
神经细胞
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
神经干细胞：治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕 金森病、阿尔茨海默病等）
多能干细胞，简称iPS细胞。
诱导方法：①将特定基因或特定蛋白导入细胞（成纤维细胞以及已分化的T细胞、 B细胞均可）；
动物细胞工程
D．果胶酶
身 【3】动物细胞培养的特点 （ A ） ①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞分化
④接触抑制 ⑤减数分裂
⑥原代培养一般传1－10代
手 A、①②④⑥ C、①③④⑥
B、②③④⑤ D、③④⑤⑥ຫໍສະໝຸດ 单个细胞培养液稀释
细胞悬液
细胞贴壁
培养瓶培养
接触抑制
胰蛋白酶处理分瓶培养
10代细胞
细胞株
50代细胞
细胞系
不死细胞
胰蛋白酶会不会把细胞 消化掉？为什么?
胰蛋白酶除了消化细胞间的 蛋白质，长时间作用也会消 化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好消 化时间。
4、动物细胞培养条件
1)无菌、无毒的环境
细 分瓶培养 细
胞
胞
传 代
原代培养
传代培养
结4 培养条件 无菌无毒，营养，温度、PH，气体环境
大 【1】动物细胞工程技术的基础是 （ D ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
展 【2】下列属于动物细胞工程中的工具是（ C ） A．限制性内切酶 B．DNA连接酶
C．胰蛋白酶
如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体
2.应用于基因工程
主要用于作为受体细胞
3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性
4.细胞的生理、药理、病理研究
如用于筛选抗癌药物
课
动物细胞培养（记忆）
1 概念：
2 原理 细胞增
堂 3 过程 殖
动 剪碎 单 加培养液 细
物
个
胞
10
50
无
代
代
限
小组 织
胰蛋白酶
细 胞
悬 液
适宜条件
细胞工程(动物部分)
绪论1.细胞培养与组织培养：属于体外培养，是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增值。
细胞的离体培养称为细胞培养，组织的离体培养称为组织培养。
2.细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。
3.细胞核移植：是利用显微镜操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞的过程。
4.干细胞：是动物体内具有分化潜能、并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。
5.转基因动物：是通过基因工程技术将外源的目的基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
第一章1.细胞工程实验室与其他一般实验室的区别：要求保持严格无菌环境、避免微生物及其他有害因素的影响。
2.细胞工程能进行的六方面工作：无菌操作、培养、制作、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
3.植物细胞工程实验室特殊的设置：光照条件的培养箱、试管苗需要温室和移植驯化室。
4.细胞工程实验室通用的仪器设备：超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、电热干燥箱、水纯化装置、低温装置、高压蒸汽消毒器。
5.实验室的生物安全分为p1，p2 ，p3 和p4四个生物安全等级，其中P4生物安全实验室等级最高。
第二章1.清洗的主要目的是清除培养器皿中的杂质和微生物等影响细胞生长的成分。
2.细胞培养过程中主要使用两类消毒方法:物理灭菌法法和化学消毒法。
物理法灭菌法：a.紫外线法适用于无菌室或超净工作台的台面等大面积消毒。
紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5cm,照射时间以30min左右为宜。
（注意：紫外灯关闭5min后方可进入使用）b. 湿热消毒:适用于含有不耐热成分的培养基和试剂的消毒，为121.3℃，20min .（注意点：加足水、排尽气、气压降到0时才能打开盖）c.干热消毒法:适用于消毒玻璃仪器，160℃以上，并保持90~120min，以杀死细菌和芽孢 d.过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤,薄膜0.22~0.45um直径。
细胞工程-原代及传代细胞培养
因此采用原代培养细胞做实验，如药物 测试、基因表达测试等有其独特优点， 是组织培养工作者应熟知和掌握的技术。 原代细胞培养主要有离散细胞原代培养 和组织块原代培养两种方法。
一、离散细胞原代培养
动物细胞在体内有严密的组织结构，群 体细胞之间以固有的分化方式相互联系、 相互依存。离体之后仍保持原有的组织 结构特性，多数组织的形态是固体结构， 细胞与细胞或细胞与细胞间质之间联系 紧密，要得到大量的离散细胞，必须采 取必要的措施进行人工分离（消化培 养）。
在普通恒温箱中培养细胞，培养容器需
要密闭，以免CO2逸出而造成培养液pH 上升。一但发现这种情况（溶液变红）
要及时调整pH。在CO2或三气培养箱中 进行培养，瓶盖一定要松开，以便换气。
培养过程中每天要检查细胞贴壁情况、
生长与增殖情况，并每隔3～5天更换一
次培养液。细胞铺满瓶壁时要及时进行
传代。
二、组织块原代培养
贴壁细胞传代的基本方法是：吸出培养 瓶内营养液，注入消化液（如0.02％ EDTA和0.25％胰蛋白酶混合液），置 37℃温箱或室温中作用一定时间。在消 化过程中，要在镜下随时监视细胞状态， 当见到细胞胞质回缩，胞体变圆，细胞 间缝隙变大时，便立即终止消化。
吸出消化液，注入适量平衡盐溶液洗 1～2次。吸出平衡盐溶液，加入适量培 养液后，用吸管吹吸营养液，反复轻轻 吹打瓶壁上细胞，使之脱落入培养液中 形成细胞悬液。 细胞悬液经细胞计数后 稀释到适当浓度，或按原培养液体积稀 释2～4倍，分装到2～4个培养瓶中继续 培养（图4-21）。
第四章 动物细胞培养
第四章 动物细胞培养 第一节 细胞培养需要具备的基本条件 第二节 培养基的种类、成分及其作用 第三节 原代及传代细胞培养 第四节 培养细胞的常规检测 第五节 无限细胞系的建立 第六节 动物细胞培养技术的应用
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4．2 生产用动物细胞系
4．2．1 生产用动物细胞发展： 生产用动物细胞——是指按生产条件
选择、驯化，适于大量培养，用于生产制备生 物制品的动物细胞。它经历了原代细胞、二倍 体细胞、连续细胞系、融合细胞和重组细胞的 历史演化。
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．2．2 生产用动物细胞的来源
中国，实验室规模
美国，产业 化规模生产 蛋白质公司
流加工艺：产量高易放大、操作简单， 如Genentech、IDEC、 MedImmune、 Merk公司，
连续灌注工艺：适合不稳定产品、 培养利用低、操作复杂、 产品回收大，如：Genzyme、 Genetic Institute、 Bayer公司
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．1．2 发展历程：
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．1．3 动物细胞培养的特点与方法：
A、动物细胞培养的主要特点 动物细胞对营养要求高 ——血清来源受限，质量不稳，研发无
血清培养液； 动物细胞对培养环境适应性差 —— 生长慢，时间长，生长用动物细胞
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．1 概述
4．1．1 定义：
动物细胞培养工程：是指以工业化为目的，应用动 物细胞培养的基本原理，研究生物活细胞为主体的生 物反应过程，解决动物细胞培养过程中带有共性和特 性的工程技术问题的一门应用性科学技术。它依托三 部分技术，细胞培养技术（基础）、生化工程技术 （过渡）和生物反应器设计（生产技术）。它是大规 模生产基因工程药物，单抗和疫苗等生物工程产品的 关键技术。
细 胞 工 Cell Engineering 程
Chapter 4、动物细胞培养工程
4．1 概述 4．2 生产用动物细胞系 4．3 培养液和培养环境 4．4 动物细胞培养工艺 4．5 动物细胞培养过程的放大与优化 4．6 动物细胞代谢工程 4．7 动物细胞工程产品制备及质控 4．8 动物细胞工程表达产品的应用
D、动物细胞培养工程技术是当今生物制药领域最重要 的关键技术之一；（10000L规模、g/L级）
E、大规模动物细胞培养生产中还存在问题需要解决： 去除培养环境中外源因子的污染 在线检测与工艺控制，如O2限定与溶解CO2尝试累 积的控制新细胞生物反应器系统的开发利用
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
胞株，实现无血清无蛋白培养；（血清 是基本添加物，但含未确定成分，如有 毒的多胺氧化酶，成本高，来源少，易 污染）
A、70%生物技术产品使用动物细胞生产；
B、生产技术、工艺条件改变明显：
培养方式：从固着贴壁式变为悬浮式、从间歇式变 为悬浮连续式；
培养介质：用动物血清变为无血清无蛋白培养液； 生物反应器控制：从黑箱式到计算机到人工智能。
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
C、中国与美国动物细胞工程技术比较（见表）
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
bu
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．2．5 生产用动物细胞代谢工程优化改造
A、原因：与原核细胞、酵母细胞、昆虫细 胞相比，动物细胞表达的外源蛋白质最接近 天然构想，是生物自身的生长代谢特性并非 最佳，为提高培养细胞活性和单位细胞的产 率，延长培养周期，必须采用代谢工程方法 优化改选宿主细胞，对细胞自身的遗传特性 进行功利性修饰。
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
B、动物细胞培养工程的方法
悬浮培养：螺旋桨或平桨搅拌通用发酵罐
——适应淋巴细胞、骨髓瘤细胞等
方
法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ单层培养
——滚瓶法：间歇接触培养液和空气
固定化培养
微珠
微载体培养
比表面积大
中空纤维
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．1．4 动物细胞培养工程技术现状与展望
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．2．3 常用生产用动物细胞的特性（参见下表）
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
4．2．4 生产用动物细胞库 生产用动物细胞库:是指为保证生产用动
物细胞有稳定和高水平的质量和生物安全性， 能够长期、稳定地生产出符合要求的高质量 生物制品的储蓄系统。目前，已经制定有三 级细胞库系统相应保存管理措施（档案和技术 标准）。
附、植物细胞特性与细胞培养 与微生物比较，植物细胞大； 悬浮培养时，植物细胞易结团，2mm，浓度高、粘度大， 分泌粘多糖（硅油降低粘度），产生泡沫，需消泡； 细胞有壁，易受剪切力高的装置损伤； 与微生物细胞相比，生长慢，周期长，分批2-3周，半连 续与连续2-3周； 与微生物细胞比较，需光、好气，CO2/O2比要控制； 单细胞3-5天分裂，1周小细胞团成愈伤组织，可转移至分 化培养基上； 植物悬浮细胞生长与增殖可分为： 延迟、对数生长、直线生长、减缓、静止、衰亡期；
批式培养 （batch）
流加培养 （fed batch）
灌注培养 （perfusion）
中国
2-100L 中试规模 5-500L 中试规模
5-30L 中试规模
美国
产业化手段； 12000L工业反应器
产业化手段； 12000L工业反应器
产业化手段； 12000L工业反应器
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
需驯化；
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
动物细胞培养对环境条件要求严格 ——pH，混合气体（O2、CO2、N2）；
动物细胞培养过程易产生污染 —— 要求苛刻；
各种细胞长期培养易变异 ——需监测其形态、生长、表达过程；
绝大多数的哺乳类动物细胞具贴壁依赖性生 长特征——需载体。
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
B、代谢工程（metabolic engineering）： 是通过DNA重组技术和分子生物学手
段改变酶系功能或物质转动功能，以改 进细胞某些方面的代谢活性，进行精确 目标的遗传操作。
《细胞工程》第4章：动物细胞培 养工程
C、具体优化改选措施： ● 构建在无血清、无蛋白条件下增殖的细