常用的HIV诊断方法

HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。

一．初筛试验方法

1．酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。

1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1）

2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）

3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3）

4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有 HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）

2．凝集试验：

凝集试验是一种快速的HIV血清抗体初筛检测方法。将HIV抗原吸附在乳胶颗粒、凝胶颗粒或其他载体颗粒上，标本中的HIV抗体将与载体的HIV抗原结合，即出现肉眼可见的颗粒凝集现象。另一种方法是红细胞凝集试验，在待测的全血标本中加入结合有HIV抗原的红细胞抗体，如标本中存在HIV抗体，红细胞上的抗原和HIV抗体结合，出现肉眼可见的红细胞凝集现象。

3．斑点印迹（或免疫层析/或渗滤）试验：

斑点印迹（或免疫层析/或渗滤）试验是一种快速的HIV血清抗体初筛检测方法。一般采用硝酸纤维素膜作固相载体，在载体下面有吸水衬垫可吸收加入的液体。将重组或多肽抗原包被在载体内，加入待检血清，包被抗原和被检血清中抗体结合，用胶体金（或胶体硒）代替底物连接在葡萄球菌蛋白A上，金标记蛋白A具有与人免疫球蛋白结合的能力，因而可与HIV抗体结合。出现红色的斑点或条带。

HIV抗体初筛试验呈阳性反应的标本，由于存在假阳性的可能，必须做确认试验。以免疫印迹试验、条带免疫试验和免疫荧光试验为确认试验方法，目前以免疫印迹试验最为常用。

二．确认试验方法：

1．免疫印迹试验（WB）

将纯化了的HIV抗原于聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，并转移吸附于硝化纤维薄膜上，然后检测标本中是否含有针对不同抗原组分的抗体。清洗后再加酶标记的抗人免疫球蛋白，显示出有色的区带。

2．条带免疫试验（LIA）

条带免疫试验的原理和操作方法与免疫印迹试验十分相似，区别仅在于条带免疫试验条膜上的抗原是重组或化学合成的多肽的抗原，而且是人工固定在条膜上的。

3．免疫荧光试验（IFA）

将HIV感染的淋巴细胞固定在玻片上作为抗原，与待检血清反应后，加入荧光素标记的抗人免疫球蛋白，洗去未结合的荧光抗体，在荧光显微镜下观察结果，如阳性标本会在细胞浆内出现特异性荧光。

HIV抗体检测必须按照《全国艾滋病检测技术规范（试行）》的要求，要经过HIV抗体初筛试验，所有初筛试验呈阳性反应的标本不能出阳性报告，需经艾滋病确认实验室确认HIV抗体阳性后，方可出具HIV抗体阳性确认报告，并按相关规定做好咨询、保密和报告工作。

作者蔡枫

上海市传染病医院