细菌对抗菌药物敏感性的检验

细菌对抗菌药物敏感性的检验

1、扩散法：

琼脂加上细菌所需要的各种养料，将培养基融化后，倒入无菌培养

皿中，冷却，凝成一个平面或叫平板（平皿）。

这时将含有少数细菌的菌液涂到平板上，培养后细菌就

会分别在平皿上繁殖，如果在平皿的培养基内事先加入抗生素纸片，由于药物在培养基中扩散，起了抑（杀）

菌

作用，形成了不长菌落的抑制圈。

抑制圈的大小，反映某一抗生素对该菌抑菌的程度。

K-B 法：

最常用的药敏试验是WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法

（K-B 法）。

该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度

敏感、中介度、耐药。

由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、

中度敏感或耐药。

【临床意义】

1.敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。

2.中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如B -内酰胺类药物。

3.中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的缓冲域”以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。抑菌环落入中介度范围，意义不明确，如果没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。

4.耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的

抗生素所抑制。

5.最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。

6.最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。

联合药敏试验：

【临床意义】常用于严重感染时对两种或两种以上抗生素

的选择。常用K-B法和方阵棋盘稀释法。结果以部分抑菌浓度FIC的指数报告。

1.FIC指数v 0. 5,为协同作用。即两种抗菌药物联合后的药效大

于同样浓度的两种药物抗菌作用的总和。

2.FIC指数0. 5〜1,为相加作用，即两种药物联合后其活性等于两

种药物抗菌作用的总和。

3.FIC指数1〜2,为无关作用，即联合药物的活性与

单独的抗菌作用相同。

4.FIC指数〉2,为拮抗作用，即两种药物联合后的抗菌活性小于单

独一种药物的抗菌作用。

K-B纸片琼脂扩散法

(1)原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散，形成递减的浓度梯度。

在纸片周围可抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从

而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反

映测试菌对测定药物的敏感性。

(2)制备抗菌药物纸片

专用药敏纸片：用加样或浸泡的方法使每片的药量达到一定的规定

量，冷冻干燥后密圭寸，-20 ° C保存备用。

(3)配制培养基

水解酪蛋白(Mueller-Hinton , MH )琼脂是对生长较快的需氧和兼性厌氧菌进行药敏试验的标准培养基，

PH7.2-7.4，琼脂厚度为4mm。

对营养要求较高的细菌进行药敏试验时，应在MH琼脂

中加入相应的营养添加剂。

(4)细菌接种

接种物的准备可采用生长法或直接菌落悬液法。

为使药敏试验的接种浓度标准化，应使用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度，制备好的菌液应在15min内接种完

毕。

置35 C孵育16-18h后读取结果，厌氧菌应孵育在含CO2的环境中，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h，以检

测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。

(5)结果解释和报告

用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径，参照NCCLS标准判断结果。常分为以下三级：敏感、中度敏感、低度敏

感

（6）纸片法药敏结果的影响因素

培养基的质量对结果的准确性有直接影响，如pH、硬

度、湿度和深度等；

药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素；

接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一；

试验操作质量；培养条件和温度、时间；

抑菌圈测量工具的精确度；

质控菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异。

（7）质量控制

采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。

常用的临床药敏质控标准菌株有：金黄色葡萄球菌

ATCC25923，大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌

ATCC27853 等。

2、稀释法

(1)液体稀释法

先将测试抗菌药物作一系列倍比稀释，然后各试管加入

适当稀释的试验菌液，摇匀，经培养后观察，以抗菌药物最小抑菌浓度(MIC)管，即为试验菌株的敏感度。

(2)琼脂稀释法：

将不同剂量的抗菌药物，分别加于融化并冷至45 °C 的定量琼脂培养基中，混匀，倾注成无菌平板，即为含有药物浓度递减的培养基；

接种测试菌于该培养基上，经培养后观察，被检菌生长

情况，最低药物抑制细菌生长者，即最小抑菌浓度

(MIC)。

3、自动分析法

国内采用AUTOBAC 仪器作细菌药敏测定，仪器由测定环药物纸片，

培养振荡机及光度计主机等来检定数据，按耐药、中等耐药、敏感，并把最小抑菌浓度都打印出来。

该仪器仅适用于测定需氧菌及兼性厌氧菌，不适于专性厌氧菌及结核分枝杆菌的测试。