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限制性内切酶的特点有哪些
限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列,并在每条链中特定部位
的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶,简称限制酶。下面是小编
给大家整理的限制性内切酶的特点,希望能帮到大家!
限制性内切酶的特点
1、识别位点的DNA序列呈二重旋转对称(即具有迥文结构);
2、切割DNA均产生含5’-磷酸和3’-羟基的末端;
3、错位切割产生具有5’-或3’-突出的粘性末端;而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端,也称钝性末端。
4、少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点,这些酶称为同切酶,如MboI Ⅰ和 Sau3A。
限制性内切酶的分类性质
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子,限制性内切酶可分为
两大类,即I类酶和Ⅱ酶。最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。其分子量较大;反应过程中除需Mg2+外,还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP;在DNA分子上没有特异性的酶解片断,这是I、Ⅱ类酶之间最明显的差异。因此,
I类酶作为DNA的分析工具价值不大。Ⅱ类酶有EcoR I、BamH I、Hind Ⅱ、Hind Ⅲ等。其分子量小于105道尔顿;反应只需Mg2+;最重要的是在所识别的
特定碱基顺序上有特异性的切点,因而DNA分子经过Ⅱ类酶作用后,可产生特
异性的酶解片断,这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。
限制性内切酶识别DNA序列中的回文序列。有些酶的切割位点在回文的一
侧(如EcoR I、BamH I、Hind等),因而可形成粘性末端,另一些Ⅱ类酶如Alu I、BsuR I、Bal I、Hal Ⅲ、HPa I、Sma I等,切割位点在回文序列中间,形
成平整末端。Alu I的切割位点如下:
5'-A G^C T-3'
3'-T C^G A-5'