玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌PPT课件
玻璃器皿的清洗包扎和高压蒸汽灭菌(2)课件
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约 1.5厘米的棉花，以拉直的 曲别针一端放在棉花的中 心，轻轻捅入管口，松紧 必须适中，松紧程度以吹 气时通气顺畅而不致下滑 为准，管口外露的棉花纤 维统一通过火焰烧去。然 后，将吸管尖端放在4-5厘 米宽的长条纸的一端约与 纸条成45°角，折叠纸条， 包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余 纸条折叠打结，待灭菌。
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（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞 ，以保证玻璃器皿于 灭菌后不被外界杂菌 所污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微 生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌 的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤， 即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速 彻底。对于接种环，接种针或其它金属用 具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行 灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角 瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的 。
常用玻璃器皿的洗涤、包装及灭菌
须高压蒸气灭菌后，倒去内容物，用热肥皂水刷去污 物，然后用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干或 烘干。
（5）对污染有病原微生物的吸管
用后投入盛有消毒液（2％～3％来苏儿或5％石炭酸 ）的玻璃筒内（筒底必须垫有棉花，消毒液要淹没吸管） ，经1～2d后取出，浸入2％肥皂粉液中1～2h（或煮沸） 取出，再用一根橡皮管，使一端接于自来水龙头，另一端 与吸管口相接，用自来水反复冲洗 ，最后用蒸馏水冲洗。 （6）如遇玻璃器皿用上述方法不能洗净者，可用下列清 洗液浸泡后洗刷。重铬酸钾（工业用）80g，粗硫酸100ml ，水1000ml。
3．玻璃器皿的灭菌
常用干热灭菌法
将包装的玻璃器皿放入干燥箱内，为使空气流 通，堆放不宜太挤，也不能紧贴箱壁，以免烧焦
。一般160℃，维持2h。
也可用高压蒸汽灭菌，即121.3℃ ，103.42千帕 经30分钟。
练习（每人）：
1. 包装一包平皿（5套） 2. 包装一支吸管 3. 制作两个棉塞（试管2个）
dhanyavaad
达尼阿瓦德
接种工具
• 接种环 • 接种针 • 接种钩
• 接种铲
常用器具
微量吸管
常用器具
试管
• 大试管
18mm×180mm
• 中试管
13~15mm×100~180mm
• 小试管
10~12mm×100mm
常用器具
ห้องสมุดไป่ตู้
烧杯
常用器具
空玻璃器皿的包装
培养皿的包装
吸管的包装
试管的包装
三角瓶的包装
棉塞的制作
棉塞的制作
2．玻璃器皿的包装
• 试管 • 三角烧瓶 • 培养皿 • 吸管 • 注射器 • 载玻片与盖玻片 • 接种工具
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
清洗消毒及灭菌技术操作规范 ppt课件
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4.3清洗、消毒、灭菌效果的监测应符合WS 310. 3的规定
条款规定根据WS 310. 3的规定 建立无菌物品质量追溯和召回制度 设专人负责质量监测工作 实施全过程监测包括： • 清洗监测 • 消毒效果监测 • 灭菌效果监测 • 外来手术器械和植入物手术器械的专项监测 • 设备安装和使用中的监测
• 防止湿包发生 • 有效地去除空气和冷凝水，以达到灭菌效果
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灭菌物品的装载（ 5.8.1.4.2 ）
• 为有效的蒸汽穿透和防止湿包的发生，以及防止灭 菌“小装量效应”，严格规定了灭菌物品的装载量
• 下排气压力蒸汽灭菌器的装载量不应超过柜室容积 80%。
• 预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器的装载量不应超 过柜室容积的90%
油等非水溶性的产品作为润滑剂。
应使用医用器械润滑剂 光学电子器材密封圈不能用，软化密封圈
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• 5.7 包装 • 5.7.1 包括装配、包装、封包、注明
标识等步骤。器械与敷料应分室包装。
• 5.7.2 包装前应依据器械装配的技术规程或图示，核对器械 的种类、规格和数量，拆卸的器械应进行组装。
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常用灭菌方法
高温灭菌
低温灭菌
• 压力蒸汽灭菌 • 快速压力灭菌 • 干热灭菌
• 环氧乙烷灭菌 • 过氧化氢等离子体灭菌 • 低温甲醛灭菌
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灭菌方法选择
• 根据物品的性质和类别选择合适的灭菌方 法
• 应遵循以下原则： • 保护被消毒灭菌物品不受损坏 • 确保消毒灭菌的可靠性
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3－6倍放大镜
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清洗-消毒-干燥流程
常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术
实验五常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术一、实验目的1.熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2.掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3.了解干热灭菌、蒸汽灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌及高压蒸汽灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表2-1。
表2-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称常用规格及配套使用物品烧杯50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号三角瓶100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号容量瓶无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL量筒5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL移液管1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm 酒精灯150mL配套：火柴漏斗60mL，80mL配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm滴定管酸式滴定管：50mL碱式滴定管：50mL 配套滴定台、蝴蝶夹滴瓶（小口瓶）无色：30mL，60mL，120mL 棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL试管10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm 配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm盖玻片18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm温度计0-100℃，0-200℃，0-300℃坩埚30mL，50mL配套坩埚钳研钵80mm，100mm，120mm，150mm（二）常用玻璃器皿用途：1.烧杯：用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌 18页PPT文档
基本原理
（一）实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一 定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高 温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否 则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的 要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也 会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿 （如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃 器皿仍是重要的实验室用具。
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
培养基的成分和pH
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、 氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求 不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的 （嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时， 都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适 的范围。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线 灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％ 的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘 埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室 内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再 开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目 的。
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
（3） 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
3、 带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3～5%来苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净。
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
五、思考题
1、干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何?
2、电热烘箱和高压锅如何操作? 各有哪些使用注意事项?
（3） 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
（2） 吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一条宽约4~5cm的纸条，以30~50℃的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，抽出试管。
高压蒸汽灭菌法
1、 关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容易造成事故。
2、 将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。
（四）、玻璃器材的灭菌
灭菌:干热灭菌:160～165℃烘箱中灭菌2h；或湿热灭菌:121 ℃ 20～30min
u 干热灭菌法
玻璃器皿的清洗和灭菌
.1、玻璃器皿的清洗和灭菌答：(一) 新购的玻璃器皿1、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。
2、再浸泡于１～２％的盐酸中数小时，最后用流水冲净。
(二) 用过的玻璃器皿1、含油脂器材的清洗（1）单独高压灭菌；（2）趁热倒去污物；（3）倒放在铺有吸水纸的篮子上，置100 ℃烘箱中烤0.5h;（4）再用5%的碳酸氢钠水煮两次，再用肥皂水刷洗干净。
2、含菌试管的清洗高压灭菌后，肥皂水刷洗干净，烘干或晾干备用3、含菌平皿的灭菌（1）底盖分开放，放入桶中，高压灭菌；（2）趁热倒去污物；（3）肥皂水刷洗干净，烘干或晾干备用。
4、含菌吸管的清洗（1）把含菌吸管投入3%的来苏尔液内浸泡30min以上杀菌；（2）用肥皂水洗涤一次；（3）最后用清水冲洗干净即可。
5、载玻片及盖玻片的清洗（1）将载玻片及盖玻片分别浸入5 %的来苏尔液内浸泡过夜，取出水洗干净；（2）盖片用软布擦干即可；（3）染色用的载玻片要放入肥皂水中煮沸10min，再用肥皂水刷洗干净，最后用95%的酒精浸泡片刻，晾干备用。
2、大型高压蒸汽杀菌锅的基本操作方法答：（1）放干消毒锅内的剩余水，加入纯净水至最高水位；（2）放入物品，关上消毒锅门；冷凝阀开1圈；消毒钮顺时针拨至“关”；（3）选择所需的杀菌压力0.07、0.11或0.14Mpa后；开启电源；（4）当温度达到100℃左右时就可将消毒钮顺时针拨至“消毒”及冷凝阀关至刚好有冷凝水和蒸气冒出为止；（5）当消毒室温度达到所需温度时开始计时，到时间后关闸。
3、手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法（1）关好排水阀门放入清水至标度为止。
（2）将要灭菌的物品用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖。
（3）通电加温，同时打开排气活门，排尽锅内的空气，再关闭活门。
（4）当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间（5）稍微打开一点排气阀门，使锅内蒸气缓慢排除。
（6）当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，立即打开锅盖取出物品。
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌培训课件
8注．长意无，事菌即项检可：查待使用将用。已灭灭菌菌锅培应养严基格于按3照7℃操培作养程2序4进h，行无，杂避菌免生发 生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
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斜面划线法（a） 不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
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穿刺接种 （a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
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四、实验报告
列表比较各种接种方法及注意事项。
五、问题和讨论
1、斜面接种取菌前为什么要将灼烧过的接种针在 无菌培养基上沾一下？
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
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一、实验目的：
了解各种微生物接种方法。
二、实验材料和用具：
已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、 移液管、记号笔
实验一玻璃仪器的清洗和包扎干热灭菌
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三、实验步骤：
1、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量
菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法 。具体操作如下： (1)贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、
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(3)操作步骤：
1）称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后 倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛 肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故 称量时要迅速。
2）加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并 用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配 制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加 热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后 补足所失的水分。
器皿的洗涤包扎灭菌
玻璃器皿的洗涤、 玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌
指导教师： 指导教师：袁勇军 张捷 管峰
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法； 2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实 为确保实验顺利地进行， 验所用的玻璃器皿清洗干净。 验所用的玻璃器皿清洗干净。 为保持灭菌后和无菌状态，需要对 为保持灭菌后和无菌状态， 培养皿、吸管等进行包扎， 培养皿、吸管等进行包扎，
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
（二）玻璃器皿的包扎
培养皿的包扎 1、培养皿的包扎 一般以5 一般以5-8套培养皿做一包 吸管的包扎 2、吸管的包扎 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 0.5cm 塞一小段1.5cm长的棉花， 1.5cm长的棉花 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜放 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角， 30度角 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将左 端多余的一段纸覆折在吸管上， 端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷 入报纸，右端多余的报纸打一小结。 入报纸，右端多余的报纸打一小结。
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
）、玻璃器皿的洗涤方法 （一）、玻璃器皿的洗涤方法 1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 2%的盐酸溶液中浸泡数小时 的盐酸溶液中浸泡数小时， 本次实验不要求） 净（本次实验不要求）
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。
2、为下一次的课做好器材的准备工作。
二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容（一）玻璃器皿的清洗：l 新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
l 常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
对实验结果的个人见解和展望
见解1
本实验中，玻璃器皿的清洗、包扎和培养基的制备及灭菌是微生物培养的关键步骤，任 何一个环节的失误都可能导致实验失败。因此，每个步骤都需要认真对待。
见解2
通过本实验，我深刻认识到实验操作的规范性和细节的重要性。在未来的实验中，我会 更加注重操作的规范性和细节的处理。
展望
技巧
掌握正确的清洗和包扎技 巧，确保玻璃器皿干净、 干燥、无菌。
学会制备培养基
了解培养基的成分
根据实验需要，了解培养 基所需的成分，如营养物 质、水、pH调节剂等。
配置培养基
按照规定的比例和顺序， 将各成分加入到容器中， 搅拌均匀。
灭菌
将配置好的培养基进行高 温灭菌，以杀死其中的微 生物。
了解灭菌的重要性及操作方法
包扎不严密。
• 解决方法
使用足够的纱布和胶带，确保玻璃 器皿的封口严密，防止培养基泄漏 。
对实验过程的改进建议
建议1
在清洗玻璃器皿时，可以先用清水冲洗一遍，再用清洗剂清洗，最 后用清水冲洗干净。这样可以确保器皿清洗得更彻底。
建议2
在制备培养基时，可以加入适量的抗凝剂，以防止培养基凝固。
建议3
在灭菌过程中，可以增加灭菌次数或延长灭菌时间，以确保培养基完 全灭菌。
培养基的制备
准备原料
01
根据实验需要，准备好所需的原料，如牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠等。
配置培养基
02
按照配方比例将原料加入到水中，加热搅拌至溶解，调节pH值
至备好的培养基进行高温灭菌，以杀死其中的微生物。
灭菌操作
灭菌前准备
确保灭菌锅已经清洗干净，并按照要求摆放好待 灭菌的物品。
培养皿
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌一、实验目的1、熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3、了解干热灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表1-1。
表1-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称烧杯常用规格及配套使用物品50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），移液管10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm150mL配套：火柴60mL，80mL漏斗配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm三角瓶容量瓶量筒酒精灯接上表1-1称号酸式滴定管：50mL滴定管碱式滴定管：50mL配套滴定台、胡蝶夹滴瓶无色：30mL，60mL，120mL常用规格及配套使用物品（小口瓶）棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm试管配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片盖玻片温度计坩埚研钵25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm0-100℃，0-200℃，0-300℃30mL，50mL配套坩埚钳80mm，100mm，120mm，150mm常用玻璃器皿用途：1、烧杯用于盛装、转移、配制、加热造就基及试剂。
压力蒸汽灭菌 ppt课件
（2）灭菌器预热：减少、清楚灭菌器内冷凝水。 （3）B-D试验：预真空压力蒸汽灭菌器每日开始运行前空 载进行B-D试验，验证灭菌器内室真空度。冷空气是造成预 真空式（或脉动真空式）压力蒸汽灭菌器灭菌失败的主要因 素之一，残存空气与蒸汽混合，降低蒸汽的压力，影响灭菌 柜在原定压力下所能达到的温度；同时残存空气影响热力的 穿透，影响微生物的灭杀效果。
灭菌物品从灭菌器中取出后自然冷却，待温度降至室温时方 可卸载。冷却时避开空调冷风口，冷却时间应≥30分钟。
（2）每批次卸载前应确认灭菌过程是否合格，检查标准测 试包的包内、包外化学指示物变色情况。检查包装有无破损 、松散，有无湿包现象等。
（3）卸载物品时要注意轻拿轻放、平稳放置、避免摞放挤 压。
（4）卸载过程中防止无菌物品损坏和污染，无菌包掉落到 地上或误放到不洁处应视为被污染
4卸载过程中防止无菌物品损坏和污染无菌包掉落到地上或误放到不洁处应视为被污染安徽医科大学附属巢湖医院消毒供应中心压力蒸汽灭菌?5灭菌效果监测按规范要求做好灭菌记录及灭菌质量监测安徽医科大学附属巢湖医院消毒供应中心预真空压力蒸汽灭菌器操作流程清洁灭菌器内外检查水电汽灭菌器安全性能等打开总电源及灭菌器开关打开排气阀排除管道内冷凝水后关排气阀并打开进气阀bd试验
灭菌过程观察：设备运行是否正常，参数是否达标 灭菌程序结束：取出灭菌车架，冷却30分钟后卸载，
标准包灭菌质量确认 工作结束，关灭菌器开关和总电源，关闭进气阀
灭菌记录
压力蒸汽灭菌器操作流程
安徽医科大学附属巢湖医院消毒供应中心
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌课件
准备工具
准备清洗工具，如刷子、 洗涤剂、水桶等。
手工清洗步骤
01
02
03
04
浸泡
将玻璃器皿放入装满洗涤剂和 水的混合液中浸泡一段时间，
以松解残留物。
刷洗
使用刷子轻轻刷洗玻璃器皿表 面，注意不要划伤器皿。
冲洗
用清水彻底冲洗玻璃器皿，确 保洗涤剂和残留物被完全冲走
。
晾干
将玻璃器皿放置在干净的地方 晾干，避免直接阳光照射。
情况应及时处理。
灭菌完成后，应先关闭灭菌器 ，再打开排气阀，避免蒸汽喷
出烫伤操作人员。
灭菌过程中的防护措施
操作人员应穿戴防护服、手套 、口罩等个人防护用品。
在灭菌过程中，应保持室内通 风良好，避免室内温度过高。
对于易燃、易爆、易腐蚀的物 品，应单独存放并采取相应的 安全措施。
意外情况的应急处理
如发生意外情况，如灭菌器故障、泄漏等，应立即停止使用，并采取相应的应急措 施。
根据物品的形状、大 小和重量选择合适的 包扎材料和方法。
03
高压蒸汽灭菌原理
微生物的耐热性
微生物的耐热性
不同微生物对热的敏感程度不同，有些微生物在高温下容 易死亡，而有些则具有较高的耐热性。了解微生物的耐热 性对于确定高压蒸汽灭菌的条件非常重要。
微生物的致死温度
在一定的时间内，高于某个温度微生物会死亡。致死温度 是杀灭90%微生物所需达到的温度。
包扎玻璃器皿
为了避免在灭菌过程中破裂和污染，需要对玻璃器皿进行适当的包 扎。
装载物品
将清洗干净的玻璃器皿放入灭菌器内 ，尽量将大小不同的器皿分开摆放， 以免小的器皿被大的器皿遮挡而影响 灭菌效果。
将装有玻璃器皿的灭菌篮或灭菌盘放 入灭菌器内，并确保其放置稳定。
器皿的包扎与灭菌
实验八器皿的包扎与灭菌一、目的要求1．掌握高压蒸汽和干热灭菌方法和原理。
2．掌握器皿的包扎方法。
二、基本原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表Ⅵ-2），二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。
这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表Ⅵ-4。
一般培养基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分钟可达到彻底灭菌的目的。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
例如含糖培养基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃灭菌15分钟，但为了保证效果，可将其他成分先行121．3℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。
器皿的包扎与灭菌
实验八器皿的包扎与灭菌一、目的要求1．掌握高压蒸汽和干热灭菌方法和原理。
2．掌握器皿的包扎方法。
二、基本原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表Ⅵ-2），二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。
这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表Ⅵ-4。
一般培养基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分钟可达到彻底灭菌的目的。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
例如含糖培养基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃灭菌15分钟，但为了保证效果，可将其他成分先行121．3℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。
器皿的包扎与灭菌
实验八器皿的包扎与灭菌一、目的要求1．掌握高压蒸汽和干热灭菌方法和原理。
2．掌握器皿的包扎方法。
二、基本原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表Ⅵ-2），二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。
这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表Ⅵ-4。
一般培养基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分钟可达到彻底灭菌的目的。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
例如含糖培养基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃灭菌15分钟，但为了保证效果，可将其他成分先行121．3℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。
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曲别针一端放在棉花的中
心，轻轻捅入管口，松紧
必须适中，松紧程度以吹
气时通气顺畅而不致下滑
为准，管口外露的棉花纤
维统一通过火焰烧去。然
后，将吸管尖端放在4-5
厘米宽的长条纸的一端约
与纸条成45°角，折叠纸
条，包住吸管尖端，然后
将吸管卷入纸条内，末端
剩余纸条折叠打结，待灭
菌。 2019/10/31
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（2）高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广 ，效率高，是微生物学实验中最常用的灭 菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随 着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。 当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的 温度升高到121℃，经15～30min，可全部 杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢 子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传 染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
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包扎试管
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包扎完成
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• 3、三角瓶在棉塞与瓶 口外再包以厚纸，用 棉绳以活结扎紧，以 防灭菌后瓶口被外部 杂菌所污染；
• 4、试管塞上棉花塞， 多支扎成一捆外用牛 皮纸或两层旧报纸与 细线包。
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高压蒸汽灭菌锅
• 升压、保压和降压 ：当锅内冷空气排净时，即可关闭排 气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电 压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（ 一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止 加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能 过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内 慢而造成瓶内液体冲出容器之外。
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三、实验器材
• 器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组）， 试管18×180（10支/组），试管（15×150）（ 12/组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶 500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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（二）、干热灭菌
• 将包扎好的试管、平皿、三角锥瓶放入干燥烘箱 内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不 得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的 温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温 度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花 会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度 为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时 方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤 冷而爆裂。
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌
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组员： 孙中涛17 孙洋20
19 戚望平21
徐州18 刘彩云
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一、实验目的
1.掌握玻璃器皿的清洗与包扎技术。 2.学习并掌握高压蒸汽灭菌、干热灭菌的基
本原理和操作方法。
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二、实验原理
（1）灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生 物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实 验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌 体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白 质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高， 其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的 杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下菌体吸收水 分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可 增加灭菌效力。
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17ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
答：冷空气未排尽，压力虽然升高而温度达不到要求，
无法达到灭菌要求，影响灭菌效果。
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谢谢观赏
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五、思考题
（1）吸管在灭菌前应如何处理？
答：吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许长
约1.5厘米 的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心 ，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气 顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰 烧去。然后，将吸管尖端放在4-5厘米宽的长条纸的一端 约与纸条成45°角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭 微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭 菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤 ，即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅 速彻底。对于接种环，接种针或其它金属 用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进 行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三 角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目 的。
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（三）、高压蒸汽灭菌
• 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅 最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意 水要加够，防止灭菌过程中干锅。
• 装料、加盖 ：将待灭菌物品放好后，关闭灭菌器盖，采 用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏 气。
• 排气：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸 后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出 时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞， 以保证玻璃器皿于灭 菌后不被外界杂菌所 污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约
1.5厘米的棉花，以拉直的