痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程

.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程

1 观察标本合格后操作。一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。

平板划线分离培养：

（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

5 做药敏试验-------报告结果。

便培养标准操作流程

1.收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。

2.点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3.接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。

平板划线分离培养：

（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养。

4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

5 做药敏试验-------报告结果。

尿培养标准操作流程

1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—

接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。(抗菌素治疗患者应增加一个10ul接种。)

4 平板单区划线法：用灭菌接种环在血平板与中国兰（或麦康凯）平板的中间位置

单区划线（这种方法适合菌落计数，假如细菌多不容易分出单个菌落。）

5划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

6观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

7 做药敏试验------报告结果。

注：接种1ul尿量者，菌落数乘以10，接种10ul尿量者，菌落数乘以100.即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）,如菌落数生长过多无法计数则报告大于100000 CFU/ml.

分泌物培养标准操作流程

1 在无菌环境下用一次性拭子快速取分泌物或脓液标本。

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

平板划线分离培养：

（1）用拭子将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。3观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

4 做药敏试验——报告结果。

穿刺液培养标准操作流程

1 收取合格的穿刺液标本。（咨询下是否按要求取的标本）

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 将穿刺液接种到增菌培养液进行培养。（穿刺液含细菌数量较少，因此，必须做增

菌培养）

4 培养18-24小时候后，用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0.5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）

接种环灭菌—待冷却后。

平板划线分离培养：

（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。5观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

6 做药敏试验-------报告结果。

注：标本经增菌转种平板后，经35°C24-48小时孵育后，如无细菌生长，平板还应继续孵育至第3天.如怀疑有奴卡菌，平板应持续孵育7天证实无菌生长，才能报告阴性.

血培养标准操作流程

1 用严格无菌技术静脉采血法采集2套外周血，作培养标本。

2 检查培养瓶确保它们被安全放臵，检查瓶子上的标签确认与申请单上的患者资料是否一致。

3 保证获得适量的血液.小孩最少3ML,大人最少5ML,正常应该是10ML。

4 放入35°c孵育7天。

5 孵育至3天后和5天后分别用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0.5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）

接种环灭菌—待冷却后。

平板划线分离培养：

（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒臵（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时6 培养瓶继续孵育至第七天，每日早晨取出检查有无生长，并摇均培养液续孵。

下列几种情况提示细菌生长。