HLA基因检测 ppt课件
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SLA、RLA、GpLA、B等）
1940年代，Snell和Gorer 小鼠间的肿瘤及皮肤移植试验发现：
决定小鼠间移植排斥与否（即组织相容性） 的基因位于17号染色体短臂 命名为组织相容性-2（H-2）
H-2是一个由许多紧密连锁的基因位点构成 的复杂系统
1950年代Dausset 经产妇血清进行个体之间抗体与白细胞 凝集和细胞毒试验
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G A C
3’
A
C
dNTP T
G
ACG
T
C G
A T
G
C
ddNTP-
A
Dyes
T
• Sanger 测序原理
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
HLA-B*2708 HLA-B*2709 HLA-B*2710 HLA-B*2711 . . . HLA-B*2723
Loci Considered to be Matched
Father’s Mother’s
4 M bp
DP DQDR BC A
HLA: 无血源相关 同胞兄妹 父母亲
10/10 单倍型全相合，半相合 半相合
HLA抗原和等位基因命名:
用血清学及细胞学方法检测抗原特异性:
HLA-B27, HLA-DR4（血清学方法） HLA-DPw2（细胞学方法）
用分子生物学方法检测等位基因：
HLA-DRB1*04 05
位点名 主型
等位基因序号
HLA-B*27 07
例如HLA-B27
HLA-B*2701 HLA-B*2702 HLA-B*2703 HLA-B*2704 HLA-B*27051 HLA-B*27052 HLA-B*2706 HLA-B*2707
脐血干细胞移植 外周血干细胞移植
骨髓干细胞移植
17
HLA-A、B、DR抗原配型与移植肾存活率 （加州大学资料）
十年存活 70 率（%） 60
50 40 30 6抗原 5抗原 4抗原 3抗原 不匹配
抗原匹配数
常见HLA与疾病关联
疾病
HLA抗原 相对风险
—————————————————————————
发现人的MHC，命名为HLA 基因位于第6号染色体短臂
1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠对一些抗原的免疫应答 能力比较发现：
控制机体对不同抗原的免疫应答能力的 基因（Ir基因）位于MHC基因复合体内。
Benacerraf、Dausset和Snell三位科学家
分别从不同角度对MHC的免疫遗传学进 行的开拓性研究，
5’ T A T C G A C T
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G A
荣膺1980年的诺贝尔医学和生理奖。
HLA分型
HLA共分为4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，广泛存在与 各种组织细胞中； II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B细胞、巨噬细胞 和活化T细胞中； III型分子为补体系统，包括C2和C4位点，存在于血清中； IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴细胞、某些细胞毒性T 细胞和白细胞中。
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
HLA 基因分型
低分辨: SSP
rSSO Luminex bead for class I & class II 中等分辨HLA分型
Next generation sequencing
HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数 正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个，共2 320个等位基因。 图中所 示为常见基因座位的等位基因数。
HLA分型的基本检测方法： 细胞学方法测抗原特异性（型） 血清学方法测抗原特异性（型） （微量淋巴细胞毒试验） 分子生物学方法测等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代测序 PCR/流式细胞仪
5’ T A T C G A C T
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
➢ 什么是HLA分型
I型，II型，III型，IV型
➢ HLA分型与疾病检测
骨髓与器官移植，免疫性疾病，代谢性疾病，神经内科 疾病，骨科疾病等
人类白细胞抗原 human leukocyte antigen , HLA
主要组织相容性复合体 Major histocompatibility complex， MHC （包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、
强直性脊椎炎
B27
89.8
Behcet综合征
B51
10-15
多发性硬化症
DR2
4.8
乳糜泻
DR3
10.8
Grave’s病 系统性红斑狼疮
DR3 DR3
3.7 5.8
类风关
DR4
4.2
胰岛素依赖型糖尿病 DR3/DR4
25.0
重症肌无力
DR3
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2.5
小结
HLA的三个特性使其成为热点：
决定组织相容性 高度多态性 与疾病关联
高分辨高通量HLA分型
24
MiSeq
Pacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing
Sequencing based typing (SBT)
高等分辨HLA分型
27
• Sanger 测序原理
• Sanger 测序原理
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
HLA 基因检测
长沙能润医学检验所
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
基本概念
➢ 什么是HLA
MHC、HLA、亚型、关联
1940年代，Snell和Gorer 小鼠间的肿瘤及皮肤移植试验发现：
决定小鼠间移植排斥与否（即组织相容性） 的基因位于17号染色体短臂 命名为组织相容性-2（H-2）
H-2是一个由许多紧密连锁的基因位点构成 的复杂系统
1950年代Dausset 经产妇血清进行个体之间抗体与白细胞 凝集和细胞毒试验
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G A C
3’
A
C
dNTP T
G
ACG
T
C G
A T
G
C
ddNTP-
A
Dyes
T
• Sanger 测序原理
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
HLA-B*2708 HLA-B*2709 HLA-B*2710 HLA-B*2711 . . . HLA-B*2723
Loci Considered to be Matched
Father’s Mother’s
4 M bp
DP DQDR BC A
HLA: 无血源相关 同胞兄妹 父母亲
10/10 单倍型全相合，半相合 半相合
HLA抗原和等位基因命名:
用血清学及细胞学方法检测抗原特异性:
HLA-B27, HLA-DR4（血清学方法） HLA-DPw2（细胞学方法）
用分子生物学方法检测等位基因：
HLA-DRB1*04 05
位点名 主型
等位基因序号
HLA-B*27 07
例如HLA-B27
HLA-B*2701 HLA-B*2702 HLA-B*2703 HLA-B*2704 HLA-B*27051 HLA-B*27052 HLA-B*2706 HLA-B*2707
脐血干细胞移植 外周血干细胞移植
骨髓干细胞移植
17
HLA-A、B、DR抗原配型与移植肾存活率 （加州大学资料）
十年存活 70 率（%） 60
50 40 30 6抗原 5抗原 4抗原 3抗原 不匹配
抗原匹配数
常见HLA与疾病关联
疾病
HLA抗原 相对风险
—————————————————————————
发现人的MHC，命名为HLA 基因位于第6号染色体短臂
1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠对一些抗原的免疫应答 能力比较发现：
控制机体对不同抗原的免疫应答能力的 基因（Ir基因）位于MHC基因复合体内。
Benacerraf、Dausset和Snell三位科学家
分别从不同角度对MHC的免疫遗传学进 行的开拓性研究，
5’ T A T C G A C T
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G A
荣膺1980年的诺贝尔医学和生理奖。
HLA分型
HLA共分为4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，广泛存在与 各种组织细胞中； II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B细胞、巨噬细胞 和活化T细胞中； III型分子为补体系统，包括C2和C4位点，存在于血清中； IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴细胞、某些细胞毒性T 细胞和白细胞中。
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
HLA 基因分型
低分辨: SSP
rSSO Luminex bead for class I & class II 中等分辨HLA分型
Next generation sequencing
HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数 正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个，共2 320个等位基因。 图中所 示为常见基因座位的等位基因数。
HLA分型的基本检测方法： 细胞学方法测抗原特异性（型） 血清学方法测抗原特异性（型） （微量淋巴细胞毒试验） 分子生物学方法测等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代测序 PCR/流式细胞仪
5’ T A T C G A C T
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
5’ T A T C G A C T G
3’
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
➢ 什么是HLA分型
I型，II型，III型，IV型
➢ HLA分型与疾病检测
骨髓与器官移植，免疫性疾病，代谢性疾病，神经内科 疾病，骨科疾病等
人类白细胞抗原 human leukocyte antigen , HLA
主要组织相容性复合体 Major histocompatibility complex， MHC （包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、
强直性脊椎炎
B27
89.8
Behcet综合征
B51
10-15
多发性硬化症
DR2
4.8
乳糜泻
DR3
10.8
Grave’s病 系统性红斑狼疮
DR3 DR3
3.7 5.8
类风关
DR4
4.2
胰岛素依赖型糖尿病 DR3/DR4
25.0
重症肌无力
DR3
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2.5
小结
HLA的三个特性使其成为热点：
决定组织相容性 高度多态性 与疾病关联
高分辨高通量HLA分型
24
MiSeq
Pacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing
Sequencing based typing (SBT)
高等分辨HLA分型
27
• Sanger 测序原理
• Sanger 测序原理
3’ A T A G C T G A C T G C A G A T G A T 5’
HLA 基因检测
长沙能润医学检验所
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
Table of Contents
1. HLA 和HLA分型检测 2. HLA 分型方法比较 3. 强直柱脊椎炎
基本概念
➢ 什么是HLA
MHC、HLA、亚型、关联