第五章各类中药分析

•(BH+)4[Si(W3O10)4] (淡黄色或 灰白色)
•3BHPO4·12WO32H2O（白色至褐 色）
•3BH3PO412MoO3·2H2O （ 白 色 至黄褐色,加氨水转变为兰色）
§1 生物碱类成分分析
呈色反应 •+ 酸性染料
•一定pH值
•有色配合物
碱性
生物碱碱性强弱是中药制剂分析时供 试品溶液制备、某些分析方法建立及条件选 择的依据。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定 2.4.1 总黄酮类成分的测定
黄酮类化合物具有特定的紫外吸收Ⅰ带在300～ 400nm,Ⅱ带在240 ～ 285nm，提纯后可直接测定总黄 酮时常用芦丁作对照品。
复杂体系中与金属盐类试剂生成配合物，常用的是 氯盐反应，试剂为三氯化铝和硝酸铝。
§2 黄酮类成分分析
§3 三萜皂甙类成分分析
•3.4.1 总皂苷的含量测定 •比色法
• 常利用皂甙能与某些试剂反应后产生颜色，然 后于可见光区进行比色测定.
§4 醌类成分分析
4.1 概述
•大黄 素
4.2 理化性质
n 物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性） n 溶解性 •游离—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等
•醌甙—可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇
n 物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）
n 溶解性 •皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等
•皂甙—可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等
n 紫外光谱特征
大多无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸 收
§3 三萜皂甙类成分分析
3.3 皂甙类成分的定性分析
3.3.1 泡沫反应
取中药材粉末约1g,加水10ml,煮沸10分钟后过滤,将 滤液于试管内强烈振摇,如产生持久性泡沫(15分钟以 上)即为阳性反应.所产生的泡沫多少与pH有关,取2支 试管,一管加入0.1mol/L盐酸液5ml，另一管加入0.1 mol/L氢氧化钠液5ml，再各加入中药水溶液，使酸 管的pH为1，碱管pH为13，强烈振摇，如两管所形 成的泡沫高度相同，则中药中含三萜皂甙，如碱管泡 沫较酸管泡沫高数倍，则中药中含甾体皂甙。
2、高效液相色谱
• 生物碱类成分进行高效液相色谱分析时， 可采用正相、反相和离子对色谱，其中以反相高 效液相色谱应用较多。 • 需要克服游离硅醇基的影响。
2、高效液相色谱
•流动相方面的改进： • a.加入硅醇基抑制剂，最常用的硅醇基抑制剂 是三乙胺; • b.在流动相中加入离子对试剂; • c.在流动相中加入季铵盐试剂，例如在水-甲醇 流动相中加入0.01mol／L的溴化四甲基胺。 •固定相方面的改进： •封尾技术： • 键和反应结束后，用三甲基硅氯烷等进行后续 处理，尽量减少参与羟基，增加单体覆盖度。
第五章各类中药分析
2020/12/11
第五章各类中药分析
第一节 生物碱类成分分析
生物碱是来源于生物界的一类含氮有机化合物(氨 基酸、多肽、蛋白质和B族维生素等除外)，大多具 有显著的生物活性。
1.2 结构特性和理化性质
结构特性 大多含有C，H，N，O组成 结构复杂，结构类型较多 氮原子有多种形式 有羧基,酚羟基等酸性官能团及酯键取代
高效液相色谱法 黄酮类成分的HPLC：
c.含有2个以上羟基的黄酮类成分可选用-NH2键合相， 流动相可选用二氧六环-二氯甲烷(1∶9)。
黄酮类成分的Rp-HPLC： 大多用C18键合相，流动相常用甲醇-水-乙酸(或磷酸缓 冲液)及乙腈-水。
§3 三萜皂甙类成分分析
3.1 概述
•甘草酸
3.2 理化性质
§3 三萜皂甙类成分分析
•3.4 皂甙类成分的定量分析
• 皂甙类成分的定量分析可分为 • 总皂苷测定 • 皂苷元测定 • 单体皂苷测定
§3 三萜皂甙类成分分析
总皂甙的含量测定
一般需用适当的溶剂提取，如甲醇(80％～95 ％)、乙醇等，提取后经分离（如水饱和的正丁醇 萃取，大孔吸附树脂经处理后溶剂洗脱）得到总 皂甙成分，再根据皂甙类化合物的各自特征来选 择含量测定方法。最常用的方法是比色法。
高效液相色谱法
黄酮类成分的HPLC：
a.无羟基的黄酮类化合物或乙酰化黄酮类化合物，固定 相为硅胶，流动相可套用薄层色谱条件，但极性要相对 小一点。
b.乙酰化黄酮、有一个羟基的黄酮类成分，采用-CN键 合相色谱，流动相为乙烷-氯仿。
§2 黄酮类成分分析
2.4 含量测定
2.4.2 单体黄酮成分的含量测定
成分含量 薄层色谱法、高效液相色谱法常用于测定单体成
分含量
第五章各类中药分析
§4 醌类成分分析
牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定 对照品溶液测定：
游离的蒽醌及其他醌类衍生物多具有升华性。中 药制剂中如含有这类成分量较大，可采用升华法得到 升华物，可见光下观察或加碱性试液显色定性。
§4 醌类成分分析
4.3 定性鉴别 4.3.3 薄层鉴别
w吸附剂：硅胶 w展开剂： 含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙和甙元 不含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙元 w显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏
优点：计算简便，不用换算因数，不必考虑
生物碱的分子量。
• 缺点：挥发性生物碱，蒸发提取溶剂或加热、 干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可 发生水解的生物碱不可用此法。取样量大，操 作时易乳化，费时。
•（1）酸性染料比色法
•本法测定的关键在于： • 介质的pH值，氢键。
（2）雷氏盐比色法
• 生物碱与雷氏盐生成沉淀后，将沉淀分 离，溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定 吸收度，换算生物碱的含量。
• 生物碱的雷氏盐沉淀的丙酮溶液所呈现 的吸收特征，是由于分子结构中的硫代氰酸铬 铵部分，而不是结合的生物碱部分，其吸收值 与样品或溶剂无关。
（2）雷氏盐比色法
硫代氰酸铬铵在丙酮中的克分子吸收系数为 106.5(单盐)或213.0(双盐)。故可根据其吸收值 A按下式直接测得样品重：
W =（A/ε）×M×V/1000
§4 醌类成分分析
4.4 含量测定
n 游离蒽醌的测定 弱极性溶剂提取后，加碱比色
n 结合蒽醌的测定 极性溶剂提取，水解测甙元 先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定
n 醌类单体成分含量测定 w薄层色谱法 w高效液相色谱
• §4 醌类成分分析
4.4.2 萘醌，菲醌类成分含量测定
萘醌类见于紫草，地下明珠等制剂 菲醌类成分多见于以丹参为主药的各类制剂中 重量法、分光光度法常用于测定萘醌、菲醌类总
化学分析法
分光光度法
§1 生物碱类成分分析
• 酸碱滴定法：
a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于 过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴
b.生物碱盐在水或乙醇介质中，用强酸溶液 滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中，可用标 准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。
重量分析法
将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方 法使其生成沉淀，干燥后直接称重。
本方法可不需要标准对照品，但需注意生物 碱生成单盐或双盐，并要注意样品的净化。
• （二）单体生物碱含量测定
1、薄层色谱法 薄层色谱技术在生物碱类成分分离和测定须结
合生物碱的通性选择合适的提取溶剂制成供试品溶 液，需要采用化学方法提取和纯化，常用液-液萃 取或液-固萃取，或结合生物碱的特性进行纯化。 常使用碱性展开剂或在碱性气氛中展开。
•硅胶薄层色谱 硅胶分离黄酮成分遵循正相色谱层析规律，化合物极性
越强，所需溶剂的极性越大。
其Rf值顺序如下：RCH3>RH>ROCH3>R-O-糖 >ROH
§2 黄酮类成分分析
聚酰胺薄层色谱
聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的黄酮甙与 甙元较好。由于各种黄酮类成分取代基团的性质、多少 和位置的不同，与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得 到分离。
§3 三萜皂甙类成分分析
3.3.2 薄层色谱鉴别
w吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土 w展开剂：
n 三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯水等极性较大的体系
n 三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等为主要组分 w显色剂
n 三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷钼酸、 浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等
•样品：1-2．生晒参；3-5．红参；6-9．朝鲜红参；10-12．西洋 参(进口)；13-14．西洋参(国产)；15．三七；16．人参皂甙对照 品Rb1(S1)，Rb2(S2)，Rc(S3)，Re(S4)，Rd(S5), Rg1(S6)， Rf(S7)，Fll(S8)。
§1 生物碱类成分分析
高效液相色谱
端基封口基
团
键合相(配体)
：C18
残留硅羟
基
硅胶
基质
§2 黄酮类成分分析
• 黄酮类化合
物为自然界广泛存
在的一大部分与糖
•金丝桃
•黄芩
结合成甙，一部份
以游离形式存在。
§2 黄酮类成分分析
§2 黄酮类成分分析
理化性质
n 物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性） n 溶解性 •游离甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、
（二）色谱法
• 如用硅胶为吸附剂时,一般应用碱性系统 展开剂较多,或使生物碱的薄层分离在碱性环境 下进行。
2、高效液相
• 在恒定的高效液相色谱条件下，各种 生物碱都具有一定的保留时间，可作为定性 鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统的 保留时间，或应用二级管阵列检测器作出鉴 定。
四、含量测定
（一）总生物碱含量测定
1.2 结构特性和理化性质
物理性质 多为结晶型固体，少数为液体。 一般生物碱为白色或无色，但结构中具有 较长共轭体系，并有助色团的可显不同颜色。 旋光性与生理活性相关，左旋体比右旋体 生理活性强。
1.2 结构特性和理化性质