可溶性糖的硅胶G 薄层层析

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生物化学实验

生物化学实验

记录。


3、取用试剂时,应仔细辨明标签,以免取错。 取完试剂后,应及时将瓶盖盖好,放回原处,切 忌乱拿乱放。 4、注意安全。对于有毒、腐蚀的试剂应避免其 直接接触人体及衣物;乙醚、丙酮等易燃试剂应 远离火源,以免发生意外。 5、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水 槽,实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他 废弃物品等均应放入指定容器,不得随意乱扔。 实验结束后应将实验台整理好,并清扫、整理实 验室。关好水、电、门、窗,方可离开实验室。
实验二、 、可溶性糖的薄层层析分离 与定量鉴定
二、原理 3、薄层层析是一种快速而微量的层析方法, 它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上, 对物质进行层析的方法。
本实验只讨论吸附薄层层析,即所有支持 物是吸附剂(如硅胶粉),层析时,主要 是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力 不同,因此个组分的移动速度不同,从而 达到分离混合物的目的。
杜绝一切抄袭和弄虚作假现象,一旦发现 后果自负。

论—五
实验记录与实验报告
2、实验报告
实验预习报告包括如下内容: ①实验项目名称; ②详细实验目的、原理;③实验操作步骤; ④注
意事项。
实验报告包括如下内容:①实验项目名称;②简
写实验目的、原理;③实验结果; ④ 分析与讨
论;⑤注意事项等。
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实验一 激活剂和抑制剂对酶活力的影响
六、实验注意事项

薄层分析

薄层分析

实验第一部分薄层板的制备及活化——硅胶板一、原理:薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细粉状物质,因支持剂的种类、制备方法和选用溶剂的不同,可按吸附、分配或二者结合的方式达到分离化合物的目的。

TLC中涂布的物质如硅胶、氧化铝、聚酰胺等。

硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。

可以通过比较斑点的Rf值,或将未知样品与对照品在同一板上展开至同样高度,对样品进行初步的鉴定。

还可通过比较可见斑点的大小进行半定量的判断。

还可以通过光密度测量法实现定量测定。

二、材料:玻璃板(5×10cm 或 2.5×7.5cm,洁净且干燥)薄层色谱用硅胶H0.8% 羧甲基纤维素钠水溶液层析缸、点样毛细管三、步骤:①把玻璃板清洗干净并烘干;②取羧甲基纤维素(CMC-Na) 0.2g,溶于25ml水中,在水浴上加热搅拌使完全溶解,③在三角烧瓶中把一份硅胶H和三份CMC-Na溶液(0.8%)混合,并用力振摇至少30秒。

(混合均匀)④将混合好的溶液倾倒在玻璃板上,轻轻振动,使涂布均匀,水平放置。

⑤铺好的板静置5分钟,然后把它们面朝上移至一个水平的平面上,阴干。

⑥把阴干后的板在105℃的烘箱中烘30分钟。

——活化。

⑦待板凉至室温后,置干燥器中保存四、注意事项:关于配制CMC-Na:先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.溶液的浓度0.3-0.8%比较合适,实际操作中0.4%~0.5%最为实用,浓度高:将来显色时如有加热过程板子容易发黑;浓度低:铺的板子不结实,易掉渣,不易保存,点样时易出洞。

实验第二部分可溶性糖的硅胶G 薄层层析一、实验目的1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。

2.掌握硅胶G 薄层层析的操作方法。

二、实验原理薄层层析(简称TLC)是一种微量而快速的层析方法,是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的,故称薄层层析。

硅胶薄层色谱原理

硅胶薄层色谱原理

硅胶薄层色谱原理硅胶薄层色谱是一种常用的分离技术,利用硅胶作为固定相,将待测物溶液在薄层硅胶基底上进行分离,然后通过显色、紫外灯或质谱等技术进行分析。

该技术具有操作简便、分离速度快、对分析物的容纳量小等特点,在分析化学、环境监测、生物医药等领域广泛应用。

硅胶薄层色谱的工作原理主要包括固相特性及样品分离两个方面。

1.固相特性:硅胶薄层色谱中的固相是指硅胶层,它具有高度多孔、高介电等特性。

硅胶层的多孔性能使其具有较大的比表面积,能够吸附样品分子,实现分离。

硅胶颗粒之间的孔隙大小不一,可根据待测物的大小选择合适的硅胶层,以实现高效的分离。

此外,硅胶层是无机物质,具有较强的化学稳定性,可以在较宽的pH范围内使用,适应各种样品的分离。

2.样品分离:样品在硅胶薄层上被分离的过程主要涉及两个相互作用:吸附作用和分配作用。

吸附作用是指样品分子与硅胶表面间的静电引力、范德华力、氢键等相互作用,使样品被吸附在硅胶上。

不同样品分子与硅胶之间的相互作用力强度不同,从而导致分离。

常见的吸附作用有静电吸附、范德华力吸附等。

分配作用是指样品分子在溶剂与硅胶层之间的分配行为。

不同样品分子在溶液中的溶解度不同,从而导致在分配中达到动态平衡的程度不同。

样品分子在固相和液相之间快速地发生相互转移,从而实现分离。

常见的分配作用有溶解度分配、离子极性分配等。

硅胶薄层色谱常见的操作步骤如下:1.样品预处理:如果样品中有杂质或干扰物,需进行预处理,如过滤、浓缩等。

2.制备色谱板:将硅胶溶液涂布到玻璃、铝箔或塑料片等基底上,制备薄层色谱板。

3.样品上样:将待测样品用吸管或毛细管点于色谱板的指定位置,形成小圆斑。

此过程要求上样均匀、量适中,避免溢出。

4.色谱板开展:将色谱板竖立在封闭容器中,并加入适量的溶剂,使溶剂务必图片全层。

5.分离:溶剂通过毛细作用或浸透作用,将上样的样品沿着色谱板的垂直方向逐渐向上移动,在硅胶层上形成溶剂前进的前沿,从而实现样品的分离。

糖的层析_实验报告

糖的层析_实验报告

一、实验目的1. 了解层析技术在糖类化合物分析中的应用。

2. 掌握糖类化合物的分离和鉴定方法。

3. 熟悉薄层层析的操作技术。

二、实验原理层析是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数差异而实现分离的技术。

薄层层析(TLC)是一种常用的层析方法,其固定相为薄层板,流动相为有机溶剂。

糖类化合物在薄层层析过程中,由于分子量、极性等差异,会在固定相和流动相之间发生不同的分配,从而实现分离。

三、实验材料1. 实验试剂:葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、硼酸、硅胶G、丙酮、正己烷、无水乙醇、氨水、浓硫酸、苯酚、莫氏试剂等。

2. 实验器材:薄层层析板、展开缸、滴管、吹风机、紫外灯、天平等。

四、实验步骤1. 准备薄层层析板:将硅胶G均匀涂布于薄层板上,晾干后备用。

2. 制备样品:将葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉分别配制成一定浓度的溶液。

3. 点样:用滴管将各样品溶液滴加于薄层板上,点样点间距约2cm。

4. 展开层析:将薄层板置于展开缸中,加入适量溶剂,使溶剂液面略高于点样点。

待溶剂展开至适当位置后,取出薄层板晾干。

5. 显色:将薄层板置于紫外灯下观察,观察各糖类化合物在紫外光下的荧光特性。

6. 鉴定:根据各糖类化合物在薄层板上的荧光颜色和位置,进行鉴定。

7. 数据处理:计算各糖类化合物在薄层板上的Rf值,分析其分离效果。

五、实验结果与分析1. 展开层析结果:葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在薄层板上分离效果良好,形成四个明显的斑点。

2. 显色结果:葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在紫外光下均呈现荧光,颜色分别为蓝色、黄色、红色、绿色。

3. 鉴定结果:根据各糖类化合物在薄层板上的荧光颜色和位置,可以鉴定出葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉。

4. 数据处理结果:计算各糖类化合物在薄层板上的Rf值,分别为0.25、0.40、0.50、0.75。

六、实验讨论1. 层析分离效果:本实验中,葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉在薄层板上分离效果良好,说明薄层层析是一种有效的糖类化合物分离方法。

硅胶G薄层层析.doc

硅胶G薄层层析.doc

实验一硅胶G薄层层析薄层层析是在吸附色谱基础上发展起来的一种快速微量操作简便的层析法。

硅胶是薄层层析中应用最广的吸附剂,由于硅胶薄层的机械性能差,一般必须加入10%~15%的煅石膏作为粘合剂,称为硅胶G。

展层剂凭借毛细管效应在薄层中移动,点在薄层上的样品随展层剂的移动而不同程度的移动。

因为被分离物质的极性有差异,因而与吸附剂和展开剂的亲和力有差别,结果在薄层板上的迁移率Rf值不同,对于某一物质,在一定的溶剂系统和一定的温度下,Rf值是该物质的特征常数,被分离物质Rf值差别越大,分离效果越好。

可选择适当的展开剂扩大被分离物质的Rf值差别,以期达到较理想的分离效果。

第一部分可溶性糖的薄层分离与鉴定一、原理糖是多羟基化合物,在硅胶G薄层上展层时,被吸附的强弱有差别,其吸附力主要与糖分子中所含有羟基数目有关。

吸附力大小顺序为:三糖>二糖>己糖>戊糖。

展层后,喷显色剂显色,不同的糖呈现不同的颜色,吸附力越大的糖Rf值越小,与已知标准糖的颜色和Rf值比较,即可鉴别样品提取液中糖的种类和含量,显色后进行拍照或扫描定量。

二、材料、仪器和试剂1.材料苹果或其他植物材料2.仪器①离心机及大离心管②涂布器③天平④烘箱⑤研钵⑥微量点样器或毛细管⑦层析缸⑧吹风机、喷雾器⑨电热水浴⑩蒸发皿、量筒(50ml)、刻度吸管、玻璃板(15×7cm)3.试剂①95%乙醇和80%乙醇②硅胶G和0.1mol∕L硼酸③氯仿④冰乙酸⑤1%标准糖溶液(10mg∕ml):木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖⑥苯胺-二苯胺-磷酸显色剂:称取2.0g二苯胺于烧杯中,加入2ml苯胺溶液溶解后、再加10ml 85%磷酸,边加边搅然后用100ml丙酮溶解混匀四.操作步骤1.硅胶G薄板的制备制板用的玻璃板应平整光滑,预先用洗液或其他洗涤剂洗净,干燥后备用。

称取硅胶G粉3.5g,加0.1mol∕L硼酸溶液9ml,于研钵中充分研磨,待硅胶由稀变稠、发出如脂肪光泽时,倾入涂布器中均匀涂布在玻璃板上,可铺7×15cm薄板1块。

可溶性糖测定.

可溶性糖测定.

引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖,是植物品质的重要构成性状之一,尤其是以果实为目的产品的植物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡,品质差。

因此,可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。

而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中,是人体热量的最最主要来源,具有较高的营养价值。

本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法,及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关。

在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。

由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。

1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计,电炉,铝锅,电子天平,20ml刻度试管,刻度吸管5ml 1支、1ml 2支,漏斗。

1.2.2实验试剂(1)蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。

(2)浓硫酸(比重1.84)。

1.2.3实验材料植物叶片。

1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表24-1加入溶液和水。

表1 各试管加溶液和水的量管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0(ml)水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。

比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。

薄层硅胶层析使用方法

薄层硅胶层析使用方法

薄層硅胶层析使用方法
薄層硅胶层析是一种常用的分离纯化技术,可用于分离化合物、检测样品纯度和组分等。

在实验室中,薄層硅胶层析技术被广泛应用于有机合成、天然产物提取、药物分析等领域。

薄層硅胶层析的使用方法如下:
1. 准备样品:将待分离的化合物溶解在适当的溶剂中,一般选用极性较小的溶剂,以便在硅胶层析板上获得更好的分离效果。

2. 准备硅胶层析板:将硅胶层析板放入烘箱中,烘干15-30分钟,然后在室温下冷却。

在硅胶层析板上使用铅笔或油性笔进行标记,方便后续的分离。

3. 采用样品滴加法:使用微量注射器或吸管,向硅胶层析板上滴加样品,一般每个化合物滴加1-2个位置,以避免相邻点之间的交叉污染。

4. 选择合适的溶剂体系:根据样品的特性选择合适的溶剂体系,以便实现最佳的分离效果。

一般常用的溶剂体系包括正己烷/乙酸乙酯、甲醇/氯仿、正丙醇/氯仿等。

5. 将硅胶层析板放入溶剂槽中:将硅胶层析板小心地放入溶剂槽中,注意不要让液面高于硅胶层析板。

6. 进行上升层析或下降层析:根据需要进行上升层析或下降层析。

对于上升层析,需要等待溶剂上升至硅胶层析板的顶部后,再取出硅胶层析板进行干燥。

对于下降层析,需要等待溶剂从硅胶层析板的底部下降至一定高度后,再取出硅胶层析板进行干燥。

7. 检测分离效果:使用紫外光谱或荧光检测器对分离后的化合物进行检测,以确定其纯度和组分。

总之,薄层硅胶层析是一种简单、快速、有效的分离纯化技术,在化学和生物学领域都有广泛的应用。

但是,在实际操作中需要注意操作规范和实验安全。

硅胶薄层层析实验报告

硅胶薄层层析实验报告

硅胶薄层层析实验报告硅胶薄层层析实验报告引言:硅胶薄层层析是一种常用的分离和纯化技术,广泛应用于化学、生物、制药等领域。

本实验旨在探究硅胶薄层层析的原理、方法和应用,并通过实验验证其分离效果。

一、实验原理硅胶薄层层析是一种基于物质在固定相(硅胶)和流动相(溶剂)之间的差异性吸附和扩散速率而实现的分离技术。

硅胶薄层层析的原理是利用硅胶固定相的特性,使样品中的化合物在流动相中以不同的速率迁移,从而实现分离。

二、实验步骤1. 准备硅胶薄层板:将硅胶薄层板剪成适当大小,用刷子均匀涂抹在玻璃板上,晾干后放入预热箱中加热。

2. 样品制备:将待分离的化合物溶解在适当的溶剂中,制备样品溶液。

3. 样品上样:用微量注射器将样品溶液均匀地滴在硅胶薄层板上,注意不要滴得太多。

4. 硅胶薄层层析:将硅胶薄层板放入层析槽中,加入足够的流动相,使硅胶薄层板底部浸没其中,然后封上层析槽,使其处于饱和湿度条件下进行层析。

5. 层析过程观察:观察硅胶薄层层析过程中的色带迁移情况,记录下各组分的迁移距离和色带的形态。

6. 色带刮取:根据观察结果,用刮色刀将各组分的色带刮取下来,放入试管中。

7. 色带回收:用适当的溶剂将色带溶解,并转移到适当的容器中,备用。

三、实验结果与分析根据实验步骤,我们成功地进行了硅胶薄层层析实验,并观察到了色带的迁移情况。

通过对色带的刮取和回收,我们可以进一步进行色带的分析和鉴定。

硅胶薄层层析实验的结果可以通过色带的迁移距离和形态来判断样品中各组分的分离效果。

迁移距离较短的组分可能是极性较高的物质,而迁移距离较长的组分可能是极性较低的物质。

色带的形态也可以反映出各组分的纯度和相对含量。

通过对实验结果的分析,我们可以得出一些结论。

首先,硅胶薄层层析可以有效地将样品中的化合物进行分离和纯化。

其次,硅胶薄层层析的分离效果受到样品的性质、硅胶固定相的性质以及流动相的选择等因素的影响。

最后,硅胶薄层层析在分析化学、天然产物提取和制药工业等领域具有广泛的应用前景。

实验三糖的硅胶G薄层层析

实验三糖的硅胶G薄层层析

实验三 糖的硅胶 G 薄层层析一. 目的糖类是自然界存在的数量最多的有机化合物,它既是植物躯体和细胞的结构成份,又是 生命活动能量的主要来源,并且与植物体内各类物质的代谢密切相关,分离鉴定植物组织中 可溶性糖的种类及其变化,对了解植物体内的组织代谢和农产品的品质,具有重要意义。

本实验采用硅胶 G 薄层层析法,分离鉴定植物组织中可溶性糖的种类,要求通过本实验, 学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法,掌握吸附薄层层析的原理,操作及其在糖类鉴定 中的作用。

二. 原理植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来,经除去杂质,即可获得较纯的可 溶性糖混合物。

薄层层析是层析法的一种,层析法是利用被分离样品混合物中各组分的物理,化学差别, 使各组分以不同程度分布在两个¡ 相¡ 中,这两个相通常使一个被固定在一定的支持物上的, 称为固定相;另一个是移动的,称为流动相;当流动相流过固定相时,在移动过程中由于各 组分在两相中的分配情况不同,或吸附性质不同,或电荷分布不同,或离子亲和力不同等, 而以不同速度前进,从而达到分离的目的。

薄层层析是一种快速而微量的层析方法,它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上,对 物质进行层析的方法,本实验只讨论吸附薄层层析,即所有支持物是吸附剂(如硅胶粉), 层析时,主要是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同,因此个组分的移动速度不同, 从而达到分离混合物的目的。

糖为多羟基化合物,具有较强的极性,在硅胶 G 薄板上展层时,糖与硅胶分子有一定的 吸附力。

硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量和羟基数目,不同的糖分子由于分 子量及羟基数的不同,因而它与硅胶分子间的吸附力不同。

造成各种糖分子在展层过程中移 动的距离不同,从而将各种糖分离出来,一般吸附力的大小为:三糖>双糖>己糖>戊糖。

其 中各种糖移动的速率可用 Rf 值表示。

通过与标准糖的 Rf 值比较。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法,具有操作简便、结果准确等优点,在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。

下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。

1.准备样品及配制溶剂:一般需要将待测物质与适当的溶剂混合,使其溶解度较大,且不产生化学反应。

根据分析目的选用不同的溶剂,以保证分离效果。

2.准备硅胶柱:硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成,直径一般为1-2.5厘米,长约10-40厘米。

硅胶柱层析的分离效果,与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。

在选择硅胶柱时,应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。

3.测试流速:测试不同流速对分离效果的影响。

测试方法为将流速调节为不同值,测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线,最终确定出最佳的流速。

4.样品处理:样品从洗脱液中洗脱出来之后,可以使用各种不同的方法进行处理。

例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法,来去除样品中的离子、颗粒等。

5.动态洗脱:先在洗脱液用水稀释3-5倍,使液面齐平。

关掉泵阀使得管路只循环搅拌。

将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中,然后打开泵阀。

保持洗脱液的温度和相对湿度稳定,然后逐渐开始动态洗脱。

6.收集洗脱液:可以采用分批收集和连续收集两种方法,最终将洗脱液图谱编制。

1.操作前,务必检查所有设备设施是否完好,液体循环是否通畅,以及所有参数(如气温、流速、洗脱液配比等)是否调整合适。

2.在操作时,不能超量进样,以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。

3.在操作中,应注意洗脱溶液的挥发和流动,以避免水分汽化,在操作过程中,应该密封管路和溶液,防止冷凝积聚。

4.硅胶柱层析法有一定的危险性,提供人员应该具备一定的化学实验经验,同时要持续关注硅胶柱的干燥程度,确定每步操作的效果,以保证精度和安全性。

5.在分析过程中,应注意各种简化重复操作,减少操作依赖,以提高生产效率。

总之,硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法,其操作相对简便,可以大量产生准确的结果,因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。

薄层层析硅胶板 说明书

薄层层析硅胶板 说明书

薄层层析硅胶板说明书
薄层层析硅胶板是一种常用的化学分析工具,主要用于分离和鉴定混合物中的组分。

以下是薄层层析硅胶板的简要使用说明:
1. 准备:确保薄层层析硅胶板干燥、无尘。

根据需要混合的物质选择合适的溶剂系统,并按照比例准备展开剂。

2. 点样:用微量注射器或微量点滴器将样品溶液点在薄层层析硅胶板的起点线上。

确保点样量适中,避免过浓或过淡。

3. 展开:将薄层层析硅胶板放入盛有展开剂的展开槽中进行展开。

确保展开槽密封良好,防止展开剂挥发。

展开时间根据物质分离的难易程度而定,通常为10\~20分钟。

4. 显色:对于无色或颜色较浅的组分,可以使用喷雾法或浸渍法进行显色。

对于有色组分,可直接观察。

5. 定位与测量:使用铅笔轻轻标记各组分的迁移位置,并使用测量工具测量各组分的Rf值(相对迁移率)。

6. 解释与结论:根据Rf值和其他观察结果,解析薄层层析硅胶板上各组分的性质和组成。

注意事项:
1. 薄层层析硅胶板对温度和湿度敏感,应存放在干燥、避光的地方,避免受潮和高温。

2. 在使用前,应检查展开剂是否含有有毒成分,并佩戴相应的防护装备。

3. 对于某些不稳定的化合物,可能需要采用其他的分离方法。

4. 在处理有毒有害物质时,应遵守相关法律法规和操作规程。

5. 不使用过期或变质的薄层层析硅胶板及试剂。

由于薄层层析硅胶板的种类和品牌可能存在差异,建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士,获取更准确的信息。

薄层层析硅胶板层析法知识点

薄层层析硅胶板层析法知识点

薄层层析硅胶板层析法知识点一. 薄层层析法基础知识:薄层层析又叫薄板色谱,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固-液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几毫克,甚至0.01毫克)的分离,另一方面再制作薄层板时,把吸附层加厚加大,又可用来精致样品,此法特别适用于发挥性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。

此外,薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。

二. 色谱条件:(1).固定相选择:柱色谱中提到的吸附剂都可以用作为薄层色谱的固定相,分离性能及使用选择同柱色谱的选择原则相同。

一般用于薄层色谱时,要求吸附剂的粒度更小。

商品吸附剂区分为色谱级(用于柱色谱)和薄层色谱级(用于薄层色谱)。

(2).展开剂选择:薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样,主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑,展开剂的极性越大,对化合物的洗脱力也越大。

选择展开剂时,除参照表列溶剂性来选择外,更多地采用实验的方法,在一块薄层板上进行实验:①.若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿,此溶剂的极性过强。

②.若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动,留在了原点上,此溶剂的极性过弱。

当一种溶剂不能很好地展开各组分时,常选择用混合溶剂作为展开剂,先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物,若展开不好,用极性较大的溶剂与前一溶剂混合,调整极性,再次试验,直到选出合适的展开剂组合。

合适的混合展开剂常需要多次仔细选择才能确定。

(3).相对移动值:从点样原点开始到展开后的溶剂前沿,是溶剂的移动距离,记为l1,混合物中个组分的移动距离分别记为l1,l2,l3……在不同的展开条件下,各化合物的移动距离不会相同,而在同一条件下,相对于展开剂的移动距离,各化合物有可比较的展开数据,称为相对移动值会比移值:Rf=l1/l0,在相同条件下测得的比移值可以作为化合物的薄层色谱特征值进行比较对照。

生物化学实验一:可溶性糖的硅胶G薄层层析

生物化学实验一:可溶性糖的硅胶G薄层层析

生物化学实验一:可溶性糖的硅胶G薄层层析指导教师:李玉芹一、目的1. 学会薄层板的制备方法和薄层层析操作。

2. 学会比移值Rf的测定方法二、原理层析法又叫色谱法,是分离、提纯和鉴定混合物各组分的一种重要方法,有极广泛的用途。

它是一种物理化学分离方法,利用混合物各组分的物理化学性质的差异在两相间的分配比不同而进行分离。

其中一相是固定相,另一相是流动相。

常用的色层分离法有薄层层析、柱层析、纸层析和气相色谱法等。

薄层层析(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,兼有柱层析和纸层析的优点,是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的分离方法。

它是将吸附剂(固定相)均匀地铺在一块玻璃板表面上形成薄层(其厚度一般为0.1mm~2mm),在此薄层上进行色谱分离。

由于混合物中的各个组分对吸附剂的吸附能力不同,当选择适当的溶剂(被称为展开剂,即流动相)流经吸附剂时,发生无数次吸附和解吸过程,吸附力弱的组分随流动相向前移动,吸附力强的组分滞留在后,由于各组分具有不同的移动速率,被流动相带到薄层板不同高度,最终得以在固定相薄层上分离。

这一过程可表示为:化合物在固定相K化合物在流动相平衡常数K的大小取决于化合物吸附能力的强弱。

一个化合物愈强烈地被固定相吸附,K值愈低,那么这个化合物随着流动相移动的距离就愈小。

薄层层析除了用于分离外,更主要的是通过与已知结构化合物相比较来鉴定少量有机物的组成。

此外,薄层层析也经常用于寻找柱层析的最佳分离条件。

试样中各组分的分离效果可用它们比移值Rf的差来衡量。

Rf值是某组分的色谱斑点中心到原点的距离与溶剂前沿至原点距离的比值,即Rf =ab,Rf值一般在0~1之间,当实验条件严格控制时,每种化合物在选定的固定相和流动相体系中有特定的Rf 值。

Rf值大表示组分的分配比大,易随溶剂流下。

混合样品中,两组分的Rf相差越大,则它们的分离效果越好。

应用薄层层析进行分离鉴定的方法是将被分离鉴定的试样用毛细管点在薄层板的一端,样点干后放入盛有少量展开剂的器皿中展开。

生物化学与分子生物学实验

生物化学与分子生物学实验

生物学实验B实验一不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳[实验目的]学习和掌握不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法和测定蛋白质相对分子质量的基本原理和实验技术。

[实验原理]SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的高级结构,强还原剂β-巯基乙醇能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数。

若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

[器材与试剂]一、器材垂直板电泳槽、电泳仪(直流稳压)、电子天平、移液器、烧杯、量筒、离心管、灭菌tip头、大培养皿、漏斗、滤纸、镊子、玻棒、电炉(微波炉)二、试剂1、30%丙烯酰胺贮存液:29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于100ml热水中,验证其pH值不大于7.0。

置棕色瓶中,4℃保存。

(由于所需药品为为神经毒性物质,注意不要经口鼻吸入,皮肤不要碰到药品,所以称量时,请戴上口罩,带好手套)2、1.5mol/L Tris(pH8.8)溶液3、10% SDS溶液4、10%过硫酸铵:新鲜配制5、TEMED溶液:4℃保存6、1.0 mol/L Tris(pH6.8)溶液7、2×样品溶解液:2%SDS,5%巯基乙醇,10%甘油,0.02%溴酚蓝,0.01mol/L Tris-HCl (pH8.0)缓冲液。

《生物化学实验手册》

《生物化学实验手册》

生物化学实验手册学时:36 学分:1.5课程属性:专业必修课开课单位:华侨大学生物医学学院先修课程:高等数学、普通物理学、无机及分析化学、有机化学一、课程的性质与任务生物化学实验课是在学习生物化学理论课的基础上进行的一个实践性环节,本课程的教学任务是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象,及综合运用已学过的理论知识设计实验或进行综合性的实验,巩固和加深对生物化学课程中基本理论知识的理解,训练学生理论知识的运用能力、实验操作技能、实验数据的处理和分析能力。

二、实验目的与基本要求本实验课配合理论教学,通过实验从实践中进一步学习,掌握和运用学过的基本理论;运用生物化学理论分析实验过程中的各种现象和问题,培养、训练学生的分析和解决问题的能力。

学生必须完成的基本要求:预习实验,准备实验;写出预习报告,拟定记录表格;测取实验数据;整理实验数据;写出实验报告。

三、实验项目一览表生物化学实验项目一览表序号实验项目名称实验类型实验要求适用专业学时1 2 3 4 5 6 7 氨基酸的分离鉴定—纸层析法紫外分光光度法测定蛋白质的含量Bradford法测定蛋白质的含量Folin-酚法测定蛋白质的含量垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质脲酶的动力学研究用正交法测定几种因素对酶活性的影响基础性基础性基础性基础性综合性基础性基础性必做必做必做必做必做必做必做生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类32226228 910111213 DNA的提取与测定琼脂糖凝胶电泳实验还原糖和总糖的测定可溶性糖的硅胶G薄层层析维生素C含量的定量测定卵磷脂的提取、纯化和鉴定综合性综合性基础性基础性基础性设计性必做必做必做必做必做必做生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类生物医学类333323四、实验考核方式及办法考核方式:考查和实验成绩。

实验考查成绩占总成绩的30%。

实验成绩占总成绩的70%。

实验成绩评分办法:实验操作占40%,实验态度占20%,实验报告占40%。

糖的薄层层析

糖的薄层层析



本实验是以硅胶G为支持物的薄层层析。在铺 有吸附剂的薄层上,样品经过连续反复的被吸附剂 吸附及展开剂解吸附的过程后,不同的糖因其分子 量不同,羟基数目及醛基、酮基性质的差异,故而 在薄层上以不同速度移动而得以分离。被吸附剂吸 附强及被展开剂解吸附弱的在薄层上移动速度慢, 展开距离短;反之则移动速度快,展开距离长,于 是混合糖液中的各种糖就被分离开来。糖在薄板上 的移动速度是戊糖>己糖>双糖>三糖。 在相同条件下,对照已知糖的Rf值可对未知糖 进行定性分析。

四、实验步骤 1、薄板制备:称取硅胶G 1.5g于烧杯中,加入0.02mol/L醋 酸钠6ml(含有CMC-Na0.铺好的硅胶 G薄板于100℃烘箱中烘干(30min),取出后即可使用。 2、点样:用毛细管分别吸取4种标准糖溶液及其混合液,在 距玻板一段1.5cm处,间距1cm分别点样,用电吹风吹干样点。 3、展开:先在层析缸中放入展开剂,液面不要超过点样线, 将硅胶板点样点朝下放入层析溶剂中,将层析缸密闭,待溶 剂到达标志线(距玻璃板上缘一厘米处)后取出电吹风吹干。 4、显色:用喷雾器向薄层均匀地喷上糖显色剂,置于80~ 100℃烘箱烘烤约3~5min,至色斑出现为止。



5、 记录各斑点的位置、颜色,绘出层析图谱。计算 各标准糖及混合糖中各组分斑点的Rf值,以鉴定混合 糖中糖的组分。 移动速率(比移值): 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离
五、注意事项

1、 制板时糊状物稀稠合适,铺板迅速,以 保证薄板薄而均匀,表面平整。 2、 样品不宜过浓或过稀。 3、 点样点直径≤3mm,样点间距离≥1cm。 4、 用0.02mol/L 醋酸钠(也可用0.02mol/L 硼酸)代替水来调制硅胶板,可使Rf值较接 近的糖得到更好的分离。

薄层层析法分离色素

薄层层析法分离色素

实验八色素的分离(层析法)一、目的要求1.掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法。

2.掌握吸附剂活度测定的原理及方法。

3. 掌握偶氮苯和苏丹红(III)的分离方法二、实验原理薄层层析是将吸附剂或者支持剂(有时加入固化剂)均匀地铺在一块玻璃上,形成薄层。

把欲分离的样品点在薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开,使混合物得以分离的方法。

由于层析在薄层上进行故而得名。

薄层层析是一种微量、快速的层析方法。

它不仅可以用于纯物质的鉴定,也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定,还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

薄层层析根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素、硅胶、硅藻土)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。

薄层层析中以吸附薄层为多用,吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶(氧化铝的活化温度为150℃-160℃,硅胶的活化温度为105℃-110℃)。

吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同,及展开剂对它们的解吸附能力的不同,使各成分达到分离。

分配薄层层析在展开过程中,各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配,由于各成分在两相间的分配系数不同,因而可以达到相互分离的目的。

薄层层析选择展开剂视被分离物的极性及支持剂的性质而定。

如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂,在同一吸附剂上,不同化合物的吸附性质有如下规律:1.饱和碳氢化合物不易被吸附;2.不饱和碳氢化合物易被吸附,分子中双键愈多,则吸附得愈紧密;3.当碳氢化合物被一个功能基取代后,吸附性增大。

吸附性较大的化合物,一般需用极性较大的溶剂才能推动它。

选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。

极性大的化合物需用极性大的展开剂,极性小的化合物需用极性小的展开剂。

一般情况下,先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等,如发现样品个组分的R f值较大,可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。

可溶性糖的硅胶G 薄层层析

可溶性糖的硅胶G 薄层层析

可溶性糖的硅胶G 薄层层析一、实验目的1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。

2.掌握硅胶G 薄层层析的操作方法。

二、实验原理薄层层析(简称TLC)是一种微量而快速的层析方法,是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的,故称薄层层析。

为了使所要分析的样品各组分得到分离,必须选择合适的吸附剂。

硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂,硅藻土和纤维素是分配层析中常用的支持剂,在吸附剂或支持剂中添加合适的粘合剂后再涂布,可使薄层紧贴在玻璃板上。

硅胶G 是一种添加了粘合剂的硅胶粉,约含12%~13%的石膏(CaS04),它可以把一些物质从溶液中吸附于自身表面。

利用它对各种物质吸附能力的不同,再用适当的溶剂系统展层,使不同的物质得以分离。

例如,糖在硅胶G 薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数有关,经过适当的溶剂展开后,糖在薄板上的移动速度是戊糖>己糖>双糖>三糖。

对已分开的斑点显色,而将与它位置相当的另一个末显色的斑点从薄层上与硅胶G 一起刮下,以适当的溶剂将糖从硅胶G 上洗脱下来,就可用糖的定量测定方法测出各组分的含糖量。

薄层层析与其他方法比有明显的优点:层析时间短、样品用量范围大(1μg~0.5g)、观察结果方便、可以分离多种化合物等,其灵敏度比纸层析高10~100倍,显色方法甚至可以用腐蚀性显色剂。

而且薄层层析法操作方便,设备简单,所以薄层层析法目前应用范围相当广泛。

三、仪器和试剂仪器烘箱、吹风机、薄层玻板(20cm×20cm)、分光光度计。

试剂1. 1%糖标准溶液:取木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖各l00mg,分别用75%的乙醇定容10mL,使其浓度均为10mg/mL。

2. 0.1mol/L 硼酸(H3BO3)溶液。

3. 层析溶剂:氯仿:甲醇=60:40(体积比)。

4. 苯胺—二苯胺—磷酸显色剂:取1g 二苯胺、1mL 苯胺和5mL85%磷酸溶于50mL 丙酮中。

5. 蒽酮试剂:称取0.2g 蒽酮和1g 硫脲于烧杯中,缓缓加入100mL 浓硫酸,边加边搅拌,溶解后呈黄色透明溶液.将其贮存于棕色瓶中,最好现配现用,置冰箱中可存放2周四、操作步骤(一)硅胶G 薄层板的制备取硅胶G 粉30g,加入75mL 0.1mol/L 硼酸溶液中,调匀后铺于洁净、平整的玻板上,将铺层后的薄板于100℃烘箱中烘干。

硅胶g薄层板的原理

硅胶g薄层板的原理

硅胶g薄层板的原理宝子们!今天咱们来唠唠硅胶G薄层板的原理,这可是个特别有趣的小玩意儿呢!硅胶G薄层板呀,它的核心材料就是硅胶。

硅胶是个啥呢?就像是一个超级微小的海绵宝宝 ,不过这个海绵宝宝有点特别哦。

它有好多好多的小孔,这些小孔就像一个个小房间。

硅胶本身是一种多孔性的物质,这些小孔隙可是有着大作用的。

咱们把要分析的样品点在硅胶G薄层板上。

这就好比是一群小伙伴要在这个特殊的“游乐场”里开始一场奇妙的旅行。

样品里的各种成分就像是不同性格的小朋友,有活泼好动的,有安安静静的。

当我们把薄层板放到合适的溶剂里的时候,溶剂就像一条缓缓流动的河流。

那些样品中的成分呢,就会跟着溶剂这个“河流”开始移动。

这时候呀,硅胶的小孔就开始发挥它的筛选功能啦。

就像在一个大迷宫里,不同的通道对不同的人开放一样。

有些成分特别容易被硅胶吸附住,就像那些调皮的小朋友被墙上的魔法胶水粘住了,它们在薄层板上移动得就比较慢。

而有些成分和硅胶的亲和力比较小,就像是滑溜溜的小泥鳅,不容易被抓住,于是就跟着溶剂跑得比较快。

硅胶G里的“G”也有特殊意义哦。

这个“G”代表着石膏。

石膏就像是把硅胶这些小海绵宝宝团结在一起的小队长。

它能让硅胶更好地固定在板子上,就像盖房子的时候,水泥把砖头紧紧粘在一起一样。

要是没有石膏,硅胶可能就乱成一团,那这个薄层板就没法好好工作啦。

随着溶剂不断地往上爬,样品中的各种成分就会在薄层板上拉开距离,形成不同的斑点。

就像一场赛跑之后,大家都分散在不同的位置。

我们就可以根据这些斑点的位置、颜色还有大小等等来判断样品里都有哪些成分啦。

你看啊,这硅胶G薄层板就像是一个微观世界里的小舞台。

样品里的成分在上面表演着它们独特的“舞蹈”。

不同的成分因为和硅胶的关系不同,跳出了不一样的舞步。

这个过程就像是一场奇妙的魔法秀,在我们的眼皮子底下,把样品里隐藏的秘密一点点展现出来。

而且呢,硅胶G薄层板还有一个很棒的地方,就是它很灵活。

我们可以根据不同的需求,改变溶剂的种类呀,改变薄层板的一些条件呀。

硅胶板层析原理

硅胶板层析原理

硅胶板层析原理1. 硅胶板层析技术概述硅胶板层析是一种色谱分离技术,通过对样品中化合物的亲水性和亲油性进行分离和纯化。

它基于硅胶的特殊性质,通过亲和力的差异将混合物中的成分分离开来。

2. 硅胶板层析的原理硅胶层析基于化合物在硅胶表面的吸附能力来实现分离。

硅胶是一种多孔材料,具有较大的比表面积,可提供较大的吸附表面。

硅胶表面的活性氢键和范德华力使其具有一定的亲水性,而有机化合物因其疏水性而在硅胶上表现出较强的亲油性。

根据样品成分的亲水性和亲油性的差异,可以通过硅胶板层析将它们分离开来。

3. 硅胶板层析的步骤硅胶板层析主要包括样品前处理、样品的加载、层析过程和分析后处理等步骤。

3.1 样品前处理样品前处理是为了减小样品中杂质的影响,提高分离效果。

常见的样品前处理方法包括萃取、净化、酸碱调节等。

3.2 样品的加载样品是通过溶解在合适的溶剂中,然后在硅胶板上均匀地加载。

样品的加载方式有点状、线状和区状等。

3.3 层析过程层析过程是整个硅胶板层析的核心步骤,样品在层析过程中会因为化合物间的亲附、竞争和迁移而分离开来。

层析过程中需要控制流动相的流速、温度和pH值等因素。

3.4 分析后处理分析后处理是为了从样品中得到目标化合物。

常见的分析后处理方法包括扫描、定标、拍照等。

4. 硅胶板层析的应用领域硅胶板层析广泛应用于天然产物分离纯化、化学合成中间体纯化、药物分析检测等领域。

在药物研究中,硅胶板层析可用于新药筛选、分离和纯化药物。

在食品分析中,硅胶板层析可用于食品中有害物质的检测和剔除。

在环境监测中,硅胶板层析可用于水体和土壤中有机物的检测分离。

5. 硅胶板层析技术的优缺点硅胶板层析技术具有以下优点: - 分离效果好,能提供高分离纯度的样品。

- 操作简单快速,不需要高深的仪器设备。

- 成本低廉,硅胶是一种常见的材料,价格较低。

- 可适用于多种化合物的分离和纯化。

然而,硅胶板层析技术也存在一些缺点: - 分离时间较长,特别是对于复杂的混合物。

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三、仪器和试剂
仪器
烘箱、吹风机、薄层玻板(20cm×20cm)、分光光度计。
试剂
1. 1%糖标准溶液:取木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖各l00mg,分别用75%的乙醇定容10mL,使其浓度均为10mg/mL。
2. 0.1mol/L 硼酸(H3BO3)溶液。
3. 层析溶剂:氯仿:甲醇=60:40(体积比)。
4. 苯胺—二苯胺—磷酸显色剂:
取1g 二苯胺、1mL 苯胺和5mL85%磷酸溶于50mL 丙酮中。
5. 蒽酮试剂:
称取0.2g 蒽酮和1g 硫脲于烧杯中,缓缓加入100mL 浓硫酸,边加边搅拌,溶解后呈黄色透明溶液.将其贮存于棕色瓶中,最好现配现用,置冰箱中可存放2周
四、操作步骤
(一)硅胶G 薄层板的制备
(四)结果分析
1.记下各斑点的位置、颜色,计算Rf 值,绘出层析图谱
(三)糖的定量测定
分别取5块干硅胶G 板,在每块板上间隔均匀地点上同样的5个样,即每块薄板上分别点上1μL、2μL、3μL、4μL、5μL 的糖标准液5点,操作方法同上,待溶液前沿到达薄板顶端lcm 处时取出,挥发尽溶剂后,将每块板中间3个样品层析部位用玻璃盖住,左右面边层折部位用显色剂进行定位。根据已显色斑点的位置,用刀片刮下中间3个相应部位的硅胶G 并放入试管中。在上述各试管中加1mL蒸馏水,于室温下浸提1小时,取1mL 滤液加2mL 蒽酮试剂,于沸水浴中加热10min,冷却后用空白试样调零,在波长620nm 处测出各糖的消光值A620。
取硅胶G 粉30g,加入75mL 0.1mol/L 硼酸溶液中,调匀后铺于洁净、平整的玻板上,将铺层后的薄板于100℃烘箱中烘干。取出后即可使用,亦可贮于干燥器中备用。薄层表面要求平整,厚薄均匀。
(二)糖在硅胶G 薄层上的分离
选取制备好的薄板一块,在距底边1.5cm 的直线上选4个点,各点间距2cm。用毛细管分别点上不同的糖样品于4个点,样品量控制在5~10μg,斑点直径不超过2mm,待薄层上样品自然干操后,将薄板置于盛有层析溶剂的层折缸中,自下向上展层,当展层溶剂到达离薄板顶端约1cm 处时取出薄板,前沿作一记号,于60℃下烘干2~3h(或在空气中晾干),除尽溶剂后均匀地喷上一层苯胺—二苯胺—磷酸显色剂,于85℃下烘干10min,则各种糖分别显出不同的颜色。
硅胶G 是一种添加了粘合剂的硅胶粉,约含12%~13%的石膏(CaS04),它可以把一些物质从溶液中吸附于自身表面。利用它对各种物质吸附能力的不同,再用适当的溶剂系统展层,使不同的物质得以分离。例如,糖在硅胶G 薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数有关,经过适当的溶剂展开后,糖在薄板上的移动速度是戊糖>己糖>双糖>三糖。对已分开的斑点显色,而将与它位置相当的另一个末显色的斑点从薄层上与硅胶G 一起刮下,以适当的溶剂将糖从硅胶G 上洗脱下来,就可用糖的定量测定方法测出各组分的含糖量。薄层层析与其他方法比有明显的优点:层析时间短、样品用量范围大(1μg~0.5g)、观察结果方便、可以分离多种化合物等,其灵敏度比纸层析高10~100倍,显色方法甚至可以用腐蚀性显色剂。而且薄层层析法操作方便,设备简单,所以薄层层析法目前应用范围相当广泛。
可溶性糖的硅胶G 薄层层析
一、实验目的
1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。
2.掌握C)是一种微量而快速的层析方法,是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的,故称薄层层析。为了使所要分析的样品各组分得到分离,必须选择合适的吸附剂。硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂,硅藻土和纤维素是分配层析中常用的支持剂,在吸附剂或支持剂中添加合适的粘合剂后再涂布,可使薄层紧贴在玻璃板上。
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