DNARNA蛋白质等各种生物物质的保存

各种生物活性物质的保存

Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号：大中小订阅

DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法：

（网上搜索，仅供参考^_^）

1.DNA

短期保存，两年之内吧，无菌水和TE缓冲液是ok的。如果是长期保存，比如10年20年的话，我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°，放10年没问题。需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。

长期保存用TE，DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存容易降解。保存两年应该会降解的！还是不要超过两年，再一年内都有降解的可能，所以还是要尽快的利用了。做成干粉不太可能，哪里有那么多的量！还是在－80度以下保存吧，也要避免反复冻融。

如果DNA很纯的话，应该影响不是很大啊，有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度，你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊，跑个电泳看看啊，如果出现smear，就不要用了啊！

提纯的DNA放在4度一段时间（数周-数月）都没问题。但是长期保存建议-20度，并且浓度不要稀释的太低，否则容易降解。

2.RNA

RNA若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。

保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA 时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M，12,000×g 离心5分钟。

RNA即使是放在-80度下也会降解，所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。

提取的RNA保存在DEPC处理的水中，加入RNAse抑止剂，在-80度保存2个月，应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。

一旦生物样品被收集采摘，离体组织的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于样品采集过程中的应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。

对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR 等实验来说，采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表

达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。记得以前学植物遗传的同学常常要带着液氮罐，骑着单车到田里采样——那个液氮罐的盖子有点问题，一颠就冒白烟，吓得一路上行人、车辆纷纷躲避，很是招摇，据说有一次觉得液氮不够了，赶着坐出租回来，那可是连哄带骗才上了的士，到学校时司机已经紧张得面无人色了——这真令贪玩的我们非常羡慕，只恨这等趣事怎么就落不到我们头上。对当事人来说，每周一次带着液氮罐到处跑实在不算一种有趣的经历。没有办法，为了保持样品的RNA完整真实，要么当场提RNA，要么液氮保存，一直如此。不过自从有了RNAlater，这种有趣的场面就会越来越少了。

RNAlater是特殊的样品储存液，只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂，RNlater可以迅速渗透到组织或其他生物样本中，稳定并保护RNA完整而不被降解，确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。样品储存液中保存的新鲜样品可以在不超过37度的高温天气下保存一天，或者在25度室温下保存一周；或者4度冰箱存放一个月；或者负20度长期保存而使RNA保持完整免受降解。这种技术为在不同温度和不同地点下的采样、运输和保存样品提供了极大的方便，同样适合手术/解剖过程中部分样品的保存。

RNAlater的用法非常简单，只要在采样后立即将样品完全浸入适量（10ul/1mg组织或者5倍体积）的RNAlater中即可。取样的动

作要尽量快速利索，组织样品的大小以厚度不超过0.5公分为宜。对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中，较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块，以确保RNAlater 能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液，避免组织块挤在一起，同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。

保存在RNAlater中的样品RNA可以:

· 37℃下稳定保存1天

· 18-25℃保存7天

· 2-8℃稳定4周

· -20℃永久保存

3.蛋白质

辛辛苦苦纯化得到的那么一点蛋白，可千万不能因为不懂得怎么保存而白白浪费了！选择什么样的贮存方法取决于该蛋白的稳定性和你打算保存多长时间以及下一步你打算如何利用。一般来说，蛋白溶液应避免极端的pH（强酸or强碱），同时也不能接近其等电点的pH。另外，还应该避免其他物质的掺入。

如果保存时间在24h以内，大多数蛋白可以放置到4℃。

如果保存时间在24h以上，应该考虑避免蛋白溶液长菌，可以事先过滤一下（through a 0.22 μm filter）或者加入抑菌的物质（如叠氮化钠）。

如果保存时间超过一周，则应该将蛋白溶液冷冻起来。通过液

氮或干冰冷冻的方法使蛋白溶液迅速冷冻，可以有效避免蛋白的变性。为避免多次冻溶致使蛋白活性降低或变性，应该将蛋白溶液分装保存，一次用多少就取多少。除此之外，还可以加入一些甘油(5-50% (w/v))或者血清(10 mg/ml)帮助目的蛋白保持稳定。

如果打算保存数月之久，则需要将其放置于－20℃，此时要加入一定量甘油，避免“冻伤”。

另外，还可以用硫酸铵将蛋白沉淀置于4℃保存（损失较多，

不建议采用）；也可以将蛋白以干粉状态保存（保存时间最久）。

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新提取的蛋白可以分装存在-80度冰箱，保存（保险系数）1年，如果加入buffer煮过的蛋白在-20保存。最好提取的蛋白，一

部分保存，一部分立刻加Buffer煮，做实验。

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蛋白的稳定性及保存方法——PIERCE公司技术资料

Proteins comprise an extremely heterogeneous class of biological macromolecules. They are often unstable when not in their native environments, which can vary considerably among cell compartments and extracellular fluids. If certain buffer conditions are not maintained, extracted proteins may not function properly or remain soluble.

Proteins can lose activity as a result of proteolysis, aggregation and suboptimal buffer conditions. Purified