组培复习资料

1、植物组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞或原生质体等进行培养，使其生长、分化并再生成完整植株的技术
2、组培苗：根据植物细胞具有全能性的理论，利用外植体在无菌和适应的人工条件下培育的完整植株。

3、外植体：凡是用于离体培养的植物组织器官、组织、细胞或原生质体统称为外植体。

4、细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。

全能性的条件：①体细胞与完整植株分离，脱离完整植株的控制；②创造理想的适于细胞生长和分化的环境，包括营养、激素、光、温、气、湿等因子。

5、植株再生过程即为植物细胞全能性表达的过程，一般经过脱分化和再分化两个阶段。

6、脱分化: 指植物组织培养中构成离体植物器官和组织的成熟细胞或已分化的细胞转变成为分生状态的过程，即诱导成为愈伤组织的过程。

7、愈伤组织: 指在人工培养基上经诱导后外植体表面上长出来的一团无序生长的薄壁细胞。

脱分化的难易程度与植物的种类、组织和细胞的状态有关。

8、再分化:指由脱分化的组织或细胞转变为各种不同的细胞类型，由无结构和特定功能的细胞团转变为有结构和特定功能的组织和器官，最终再生成完整植株的过程。

9、一般而言，诱导外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历3个时期：启动期、分裂期和分化期。

（1）启动期：又称诱导期，是指细胞准备进行分裂的时期。

启动期的长短，因植物种类、外植体的生理状态和外部因素而异。

诱导启动的因素主要有外源激素，最常用的有2,4-D、NAA、IAA和细胞分裂素等。

其中，2,4-D 在诱导细胞分裂过程中，效果最明显。

（2）分裂期：是指外植体细胞经过诱导后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。

分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，颜色浅或呈透明状。

愈伤组织常呈不规则的馒头状。

(3)分化期：是指停止分裂的细胞发生生理代谢变化而形成不同形态和功能的细胞过程。

生长旺盛的愈伤组织一般呈奶黄色或白色，有光泽，也有淡绿色或绿色的；老化的愈伤组织多转变黄色甚至褐色，活力大减。

10、根芽激素理论：根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比值所决定，二者比值高时促进生根；比值低时促进茎芽的分化；比值适中则组织倾向于以一种无结构的方式生长。

11、植株的再生途径一般可划分为无菌短枝型、器官发生型、丛生芽增殖型、胚状体发生型、原球茎型5种类型。

所形成的植株称为再生植株。

按培养阶段划分：初代、继代、生根培养
12、植物组织培养的特点：1、培养材料经济，来源广泛2、培养条件可人为控制，便于周年生产3、生长周期短，繁殖速度快4、管理方便，可实现工厂化生产
13、植物组织培养的应用：1、植物离体培养快速繁殖2、植物脱毒苗培育3、植物新品种选育4、植物次生代谢产物生产5、植物种质资源离体保存6、人工种子生产
14、培养基的成分：水、无机营养、有机成分、植物生长调节剂、培养物的支持材料
15、植物所需浓度大于0.5m mol/L的矿质元素称为大量元素。

大量元素主要有N、P、K、Ga、Mg、S等。

植物所需浓度小于0.5m mol/L的矿质元素称为微量元素。

微量元素主要有Fe、Mn、Cu、Mo、Zn、Co、B等。

16、若要配制GaCl2·2H2O的母液，其规定量浓度为440mg/L，要求扩大10倍，母液体积为250ml，求所需GaCl2·2H2O的称取量。

解答：称取量/250ml=440mg/1000ml*10
答：称取量为1100mg。

17、配制1L培养基，从10倍 GaCl2·2H2O 母液中吸取多少毫升？
解答: 母液吸取量（ml）=1000ml/10=100ml
答：需要吸取100ml母液
18、配制0.1mg/ml NAA母液，扩大100倍。

公式：体积=扩大倍数
所求质量/100ml = 0.1mg/ml
所求质量= 0.1mg/ml × 100ml=10mg
19、MS培养基特点：无机盐浓度高，具有高含量的氮、钾。

20、母液配制和保存：计算→药品称量→溶解→定容→分装→贴标签→冰箱保存
21、配制1L培养基，需GaCl2·2H2O的10倍母液中吸取多少毫升？
母液吸取量（ml）= 1000ml/10 =100ml
答：需要吸取100ml母液
22、激素母液：0.1mg/ml NAA，求激素母液吸取量？
吸取量=（配方浓度/母液浓度）×培养基体积
= （0.1mg/L/ 0.1mg/ml ）×1L=1ml
23、若将配方激素NAA浓度改为1mg/L，激素母液为0.1mg/ml NAA，求激素母液吸取量？吸取量=（配方浓度/母液浓度）×培养基体积
= （1mg/L/ 0.1mg/ml ）×1L=10ml
24、3%蔗糖=1L×3%=1000ml×0.03=30g 0.5%琼脂= 1L×0.5%=1000ml×0.005=5g
25、外植体的选择原则：（1）再生能力强的健壮植株（2）最佳时期（3）优良种质，遗传稳定性好（4）适宜部位，容易消毒（5）大小适宜
26、外植体的预处理：先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。

27、外植体消毒过程：
28、外植体消毒的步骤如下:取材→预处理与整理→流水冲洗→70%-75%的酒精表面消毒5s →用0.1%升汞消毒剂处理5-8min→无菌水充分洗净3次，每次1min→备用。

29、试管苗培养条件：主要有温度(20-30℃)、光照(1000-50000lx、10-16h/日)、湿度（70-80%）和通气（植物呼吸需要氧气）等。

30、培养程序分为1、初代培养2、继代培养3、壮苗与生根
31、初代培养：指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段，即无菌接种完成后，外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝、不定芽、胚状体或原球茎的过程。

32、继代培养：将初代培养诱导产生的愈伤组织、芽、苗、胚状体或原球茎等重新分割，接种到新配制的培养基上，进一步增殖扩繁的培养过程称为继代培养。

33、中间繁殖体：通过初代培养多获得的不定芽、无菌短枝、胚状体或原球茎等无菌材料。

例如2株苗为基础，每棵苗的繁殖系数为3（即一株苗剪成3段接种，培养一段时间后每段又形成3株苗），那么经过10代繁殖，将生成2×310=118096株苗。

34、造成组培污染的原因：①外植体灭菌不彻底②操作时人为带入③培养基及接种工具灭菌不彻底④环境不清洁。

35、试管苗的特点：①试管苗生长细弱，茎、叶表面角质层不发达；②试管苗茎、叶虽呈绿色，但叶绿素的光合作用较差③试管苗的叶片气孔数目少，活性差④试管苗根的吸收功能弱。

36、驯化的目的：人为创造一种由试管苗生境逐渐向自然环境过渡的条件，促进试管苗在形态、结构、生理方面向正常苗转化，使之更能适应外界环境，从而提高试管苗移栽的成活率。

37、驯化原则：应从光、温、气、湿及有无杂菌等环境要素考虑。

38、驯化方法：将装有试管苗的培养容器移到温室或大棚，先不要打开瓶盖或封口膜，并不能立即接受太阳光的直接照射，可以先进行适当遮蔽，再逐渐撤除保护，让试管苗接受自然散射光照射，并逐步适应自然的昼夜温差变化。

3-5d 后打开瓶盖或封口膜，使试管甚至更接近外界环境条件，再炼苗2-3d 后即可移栽。

39、试管苗驯化成功的标准是茎长粗、叶绿素、根系延长并由白色变为黄褐色。

40、组培快繁类型：无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型
41、微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm 。

目的是获得无病毒植株。

42、普通茎尖：指取几mm 到几十mm 长的顶芽尖及侧芽尖。

特点：技术简单，操作方便，易成活和分化，成苗时间短。

目的是快速繁殖。

苗的
类型
生境
光照 温度 相对湿度 养分 气体 菌态 试管苗
弱，
易调控 适宜 且稳定 高 丰富 光下CO2低， 有害气体量高
无菌 野生苗
强，
波动大 波动性大 较低， 波度大 较贫瘠 各种气体成分较稳定
有菌 苗的类型 叶片及其功能 根系及其功能
试管苗 角质层薄，水孔多， 气孔的生理活性差，保水能力差； 此外叶绿体的光合性能也差 根系不发达， 吸水能力差 野生苗 角质层较厚，水孔少， 气孔的生理活性强； 叶绿体的光合性能好
根系发达，
吸水能力强
43、植物离体快繁程序：初代培养物的建立-繁殖体增殖-芽的生根-再生植株驯化和移栽-再生植株的鉴定
44、脱毒苗培育的意义: 提高产量；提高品质；抗性增强。

45、植物脱毒处理方法：茎尖培养脱毒、热处理脱毒、茎尖微体嫁接脱毒、化学药剂材料脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、花药培养脱毒等方法。

在这里主要讲解茎尖培养脱毒法。

46、微茎尖培养脱毒操作程序：母体植株选择、材料预处理、微茎尖剥离与接种、培养。

47、一个培养瓶中有无菌母株苗数5株，每年增殖8次，每次增殖4倍，则全年理论生产为多少？y＝m*X的N次方=5 ×4的8次方=32 7180（株）
48、某商业生产玫瑰组培苗，平均30天为一个增殖周期，一名工人每天转苗1000株，全年280个工作日，损耗率为10%，30%苗量增殖培养，70%苗量生根培养。

解答：全年生产量=1000 ×280=280 000（株）
全年出苗量=280 000 ×70% ×（1-10%）=176 400（株）。