PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA

PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA

1、加入0.25g 土壤样品到一个PowerBead Tubes中。

2、轻轻涡旋混匀。

3、检测Solution C1。若出现沉淀，60℃水浴至全溶解。

4、加入60μl Solution C1，上下颠倒数次混匀。

5、把PowerBead Tubes固定在涡旋仪适配器上，最大转速（3200rpm，若涡旋仪达不到此速度，可适当延长5~10min）涡旋连续振荡10min。

6、室温10000g离心30s。

7、转移上清至一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。

8、加入250μl Solution C2到上清中，涡旋混匀5s。4℃孵育5min。

9、室温10000g离心1min。

10、避开沉淀小珠，转移上清≤600μl 到一个新的收集管（2ml Collection Tube）中。

11、加入200μl Solution C3到上清中，涡旋混匀。4℃孵育5min。

12、室温10000g离心1min。

13、避开沉淀小珠，转移上清≤750μl到一个新的收集管中。

14、Solution C4 使用前先摇匀。加入1200μl Solution C4到上清中，涡旋混匀5s。

15、加载约675μl 上清到Spin Filter 中，室温10000g离心1min。弃去滤液，继续加载675μl 上清，室温10000g离心1min。重复直至过滤完所有上清。（每个样品共需加载3 次。）

16、加500μl Solution C5到Spin Filter 中，室温10000g离心30s。

17、弃去上清

18、室温10000g 离心1min。

19、小心转移Spin filter 到2ml Collection Tube 中，尽量避免Solution C5 污染。

20、加入100μl Solution C6到白色滤膜中心。

21、室温10000g 离心30s。

22、弃去Spin Filter。此时收集管中的DNA 可直接用于下游实验，无需进一步纯化。DNA 冷冻保存（-20℃~-80℃）。

【疑点难点】

1.加样量

此试剂盒的设计加样量是0.25g，不同土样类型加样量请参照下表：

2.DNA 浓缩

最终DNA 体积为100μl。要浓缩DNA 可加入4μl 5M NaCl，上下颠倒3-5 次混匀。然后加入200μl 100%冷乙醇，上下颠倒3-5 次混匀。室温10000g 离心5s。弃去所有上清。用真空离心蒸发器、干燥器或冷干机除去残余乙醇。用去离子水或灭菌10mM Tirs 重悬DNA。

3.DNA 保存

洗脱到C6 溶液（10mM Tris）的DNA 必须保存在-20℃~-80℃防止降解。为了延长保存时间，建议把DNA 等分后-80℃保存。你也可以用TE 缓冲液洗脱DNA，而EDTA 会抑制下游PCR 等酶反应，不建议采用。