叶绿素含量的测定

海洋生物学实验浮游植物叶绿素含量的测定

一、实验目的：

１、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。

２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。

二、原理：见《海洋生态学》P192-194

生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。

海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。

三、仪器与设备：

１、分光光度计3、采水瓶4、抽滤器5、微孔滤膜

6、冰箱

7、离心机

四、药品与试剂：

丙硐、甲醛、MgCO3等。

五、实验步骤：

1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。

2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a 总量）、2μm核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2-20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。

3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a 含量及占叶绿素a总量比例等数据填入测定数据表中。

附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：

A．检测限：0.02mg/m3。

B．方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90％丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。

C．仪器和设备：

１、分光光度计２、抽滤器３、电动吸引器４、采水瓶５、微孔滤膜６、离心沉淀器７、冰箱８、离心管

D．取样方法和贮存：

将0.5-10升海水经0.45μm微孔滤膜过滤。开始过滤海水时，加几滴碳酸镁悬浮液于海水中，以防止滤膜变酸性。滤膜经风干、转移、折叠放在干燥器中。如果不能马上进行分析，在－20℃下至少

可保存30天。滤膜应对半析．用一张普通滤纸垫着，用另一张滤纸紧固以便保存。

E．试剂：

1．90％丙酮

量取100ml蒸馏水于1升的烧瓶中，并用分析纯的丙酮加到1000ml。该试剂装于盖密的瓶中，保存在暗处。

2．碳酸镁

将约1g细粉末状的MgCO3加到100ml蒸馏水中，装于100ml 洗瓶中，使用前用力振摇，加几滴即可。

F．实验步骤

1．海水样品倒入带有过滤膜的过滤器中，在1/2大气压真空度下过滤样品。

2．在海水过滤时，加几滴（3-5滴）碳酸镁溶液到海水中。

3．抽气使过滤膜完全干燥，保存（D）。如果需要也可萃取。

4．将滤膜转移到10 ml离心管中，加10mL90％丙酮到管中，充分振摇。置于暗处过夜（最好冷冻）。

5．室温下将各离心管离心5-10分钟。离心时间长短取决于离心机的型号和要求得到溶液的清澈程度（10cm光程时在750nm处的消光值应低于0.05）。

6．倾倒上清液到10cm光程的分光光度计的液池中，并在以下波长下连续测量消光值（样品应为室温，以避免湿气蒙在光电管上）。

波长：750，664，647，630，510和480nm（如果仅需要测

定叶绿素，那么，510和480 nm就不必测定）。

7．从664，647和630 nm的消光值减去750 nm的消光值，以校正微粒浊度空白的消光值（510 nm的消光值以减去2×750nm 消光值校正，480 nm吸光值以减去3×750nm消光值校正）。

8．用下面各式计算原海水样品中色素的含量。

（Ca）Chl.a = 11.85 E664-1.54 E647-0.08E630

（Cb）Chl.b = 21.03 E647- 5.43 E664- 2.66E630

（Cc）Chl.C = 24.52 E630-l.67 E664-7.60E647

叶绿素含量（mg/m3）= C×Va / Vw

式中，E是上述不同波长下所测的消光值（以750 nm读数校正）。Ca、Cb和Cc为叶绿素的含量（如果用1cm光程液池，以μg／ml表示），

mg Chl./m3 = 式中，Va为丙酮体积（毫升/ml），Vw是过滤海水体积（升/L），C分别代表上述Ca，Cb和Cc三种叶绿素（注；μg／L = mg／m3）。

六，实验记录表：

学生自己动手设计并记录实验结果。

七，思考题：

1，叶绿素含量测定的原理是什么？

2，叶绿素含量值有什么意义？