微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色36页PPT
2实验二显微镜油镜的使用、细胞形态的观察及革兰氏染色
（三）显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当
目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器， 以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿， 更不可倾斜拿。 5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的 香柏油；第二遍擦镜纸蘸上乙醇再擦镜头；第三遍再用干净 的擦镜纸擦去多余的乙醇。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的 蓝紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复 合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
然后再用乙醇脱色处理。
（四）、革兰氏染色原理
由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状 结构、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩， 结晶紫—碘不易被洗脱而保留在细胞内，复染时 仍保持蓝紫色。
⑷ 初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌膜为 宜）初染1--2分钟min，水洗。
⑸ 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
初染
媒染
脱色
复染
（三）革兰氏染色的操作方法
⑹ 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾 斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色 时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
?而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄类脂含量高所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解细胞壁透性增大结晶紫由于细胞壁的肽聚糖层较薄类脂含量高所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解细胞壁透性增大结晶紫碘复合物被洗脱复染时细胞被染上复染剂的颜色碘复合物被洗脱复染时细胞被染上复染剂的颜色红色
实验三显微镜油镜使用和细菌革兰氏染色共18页
实验三显微镜油镜使用和细菌革兰氏染色
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
微生物学3 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
（6） 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片 倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色 时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
倒立的虚像
图1-1-2 光学显微镜的成像原理
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2、用无菌的接种环挑少量大肠杆菌与右边水滴充 分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量大肠杆 菌菌液延伸至玻片中央，与金黄色葡萄球菌混合 成含有两种细菌的混合区。
（四）、革兰氏染色的操作方法
涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检
无菌操作
葡萄球菌
大肠杆菌
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平
三.显微镜油镜观察操作方法
在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后 将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏 油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到 最合适的观察点。
油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭 去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏 油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净 的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样? 2.分析影响革兰氏染色结果的因素。
实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察共25页
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色共38页
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使染色观察与显微镜油镜的
使用;细菌的革兰氏染色
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一， 也是成 功的利 器之一 。没有 它，天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ，徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿．丘吉 尔。 30、我奋斗，所以我快乐。--格林斯 潘。
实验一 显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色
实验一显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色陈宝莲2010级生态学040212010002一、实验目的1 学习显微镜油镜的使用方法2 学习微生物的无菌操作技术3 学习细菌的革兰氏染色法二、实验原理1 显微镜及油镜物镜的使用原理1) 油镜头的标志油镜头上常刻有OI（oil immersion）或HI（homogeous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记。
在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numerical aperture）最大，而工作距离最短。
2 ) 显微镜的分辨率显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数，更重要的是看它的分辨率的大小。
分瓣率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。
D值愈小表明分辨率愈高。
D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比：D=λ/2NA从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。
数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积：NA=n×Sinα/2影响数值孔径大小的因素－是镜口角，二倍介质的折射率。
当物镜与玻片之间的介质为空气时，由于空气（n=1.0）与玻璃（n=1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。
当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃的相近，光线经过玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。
2 细菌的革兰氏染色原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。
作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G－）两大类.G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色剖析共38页
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观
察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏
染色剖析
11、用道德的示范来造就一个人，显然比用法律来约束他更有价值。—— 希腊
12、法律是无私的，对谁都一视同仁。在每件事上，她都不徇私情。—— 托马斯
13、公正的法律限制不了好的自由，因为好人不会去做法律不允许的事 情。——弗劳德
14、法律是为了保护无辜而制定的。——爱略特 15、像房子一样，法律和法律都是相互依存的。——伯克
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色
蒸馏水； 草酸铵结晶紫染液 ；卢戈氏碘液
95%乙醇； 番红复染液；香柏油；二甲苯 光学显微镜
实验方法
滴水 取菌 涂片 自然干燥 火焰固定
结晶紫染色1分钟 乙醇脱色 （20~30秒） 水洗 碘液1分钟
水洗
水洗
番红1分钟
水洗
干燥
镜检 （油镜）
革兰氏染色操作步骤
E.coli
混合菌
S. aureus
涂片方法示意图
n=1.515 a 空气n=1
λ 分辨率 D= —— 2NA a 数值孔径 NA＝n×sin— 2
电源
电源
显微镜油镜的使用与保护
1.
2.
3.
开显微镜电源开关。 调节显微镜光源。 先用低倍镜、高倍镜查找标本视野，下降载物台约2cm ， 加香柏油一滴于标本的待检部位，换用油镜观察。 换用油镜后，眼睛从侧面注视油镜头，缓慢上升载物台至 油圈不再扩大为止，此时镜头几乎与装片接触，但不可压 及装片。 观察标本时，双眼同时挣开，左眼观察，右眼画图。 油镜用毕，转动粗调将载物台下降，取下标本，用擦镜纸 沾少许二甲苯将镜头擦净，然后再用擦镜纸擦去二甲苯。 使各部分还原，物镜镜头呈八字形，光源强度调至最暗， 关闭电源，罩上防尘罩，收拾干净台面。
实验目的
实验原理
微生物学实验-1
实验材料
实验方法 实验结果 注意事项 实验报告
实验一 细菌的革兰氏染色
思考题
实验目的
1. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌 分类鉴定中的重要性。 2. 学习并掌握革兰氏染色技术，进一步 熟练光学显微镜油镜的使用技术。
实验原理
革兰氏染色法（Gram staining） 是微生物学中常用的一种染 色方法，该染色法由丹麦医 生（Christian Gram）于1884 年创立，故名。
微生物的实验
微生物的实验实验一油镜的使用方法与革兰氏染色实验目的:掌握油镜的使用方法与革兰氏染色的方法实验原理: 革兰染色法⑴革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，脂质含量多，乙醇易透入。
⑵革兰阳性菌等电点（pI 2~3）比革兰阴性菌（pI 4~5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
⑶革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；革兰阴性菌含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色。
实验步骤: 1.涂片取洁净载玻片1张，用接种环取1～2环生理盐水放于载玻片上，用灭菌的接种环在固体培养基上挑取少许细菌与盐水混合，涂布成直径１cm左右的菌膜（可视挑取菌落的多少涂片范围相应变化）。
若采用液体培养物，可直接取1～2环菌液涂布。
接种环须经火焰灭菌方可放回原处，以免造成污染。
2.干燥涂片最好在室温中自然干燥，或将标本接种面向上，置酒精灯火焰高处慢慢烘干，切勿在火焰上烤。
3.固定干燥后的标本面向上迅速通过火焰3次，这样既可杀菌，又能将细菌固定在玻片上，以免玻片上细菌在染色过程中被水冲洗掉。
2.染色(1)初染：滴加结晶紫染液2～3滴于涂布细菌处，覆盖菌膜，1min后以细水漫过轻洗，将积水甩干。
(2)媒染：滴加卢戈碘液同上，1min后水洗，并将标本片上的积水甩净。
(3)脱色：加95%乙醇数滴于标本片上，轻轻摇晃数秒，斜持玻片使乙醇流掉，再滴加乙醇直至无紫色脱下为止（约30s，灵活掌握时间），细水冲洗，甩干。
(4)复染：滴加石炭酸复红染液，30s～1min后水洗，用吸水纸吸去积水。
3. 镜检用油镜观察，并判断细菌的染色性。
记录实验结果。
4.实验后处理擦干油镜镜头，整理、清洁显微镜，把显微镜放回原处，把标本片放入消毒缸中。
注意事项: 1.标本片涂的太薄或太厚，菌体分散布不均匀，都可影响染色结果。
实验一_显微镜油镜的使用和革兰氏染色法
实验一显微镜油镜的使用和革兰氏染色法A.显微镜油镜的使用实验目的和内容目的：复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。
内容：1．学习油浸系物镜的使用方法。
2．用油镜观察大肠杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。
操作步骤(一)观察前的准备1．将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为4cm。
坐正，练习用左眼观察。
2．调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。
转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。
观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。
(二)低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。
(三)高倍镜观察眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。
再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。
不要移动装片位置，准备用油镜观察。
(四)油镜观察1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。
在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。
2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。
3．将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。
如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。
仔细观察并绘图。
微生物实验报告---普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色
普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色郑小煜201100140069生命科学学院生科3班同组者:赵莉、高瑞、刘梦迪2012年10月10日一、实验目的和要求1、学习显微镜的使用方法。
微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌单染色。
2、学习3、初步认识细菌的显微形态特征。
4、学习并掌握细菌革兰氏染色，了解革兰氏染色在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理1、细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对他们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而更能清楚的观察到其形态和结构。
2、油镜:油镜的放大倍数可达100倍，焦距很短，直径很小，但所需的光照度却很大。
为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃折射率相仿的镜油(通常用香柏油)。
且油镜分辨率很高，可达0.2微米左右。
3、通常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色;当细胞处于碱性条件下所带正电荷增加时，可采用碱性染料染色。
4、革兰氏染色革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性(G?)和革兰氏阴性(G?)两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异所决定的。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色。
实验一 显微镜油镜的使用、细胞形态的观察及革兰氏染色
赣南医学院 病原生物学教研室
第一次实验
细菌的形态结构的观察 细菌涂片标本的制作及革
兰染色
实验目的
掌握油镜的使用方法及保养的基本知识 掌握细菌的三种基本形态和三种特殊结 构 掌握细菌学标本的制作和革兰染色法
实验内容
实验室规则 油镜的使用与保护 细菌的基本形态与特殊结构的观察 革兰染色法
油镜观察
复红 30s
3. G染色结果
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
作业
实验报告册P1-3。 绘图注意事项：
– 用红蓝蜡笔绘图。 – 注意菌体大小比例合适 – 标出菌体颜色，显示典型排列方式 – 特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置
The end,thank you!
二、油镜的使用与保护
普 通 光 学 显 微 镜 基 本 构 造
油镜头的识别： 物镜头的下缘， 一般刻有一白色 圈，标有油 100、 HI、oil等字样
二、油镜的使用与保护
油 镜 使 用 的 原 理
透镜
油n=1.515
空气n=1.0 玻璃n=1.52
二、油镜的使用与保护
放置好显微镜 调节光源 低倍镜观察 油镜观察 清洁和还原显微镜
球菌
杆菌——大肠杆菌
螺形菌——霍乱弧菌
芽孢
破伤风杆菌 示：芽孢
炭疽芽孢杆菌 示：芽孢
鞭毛
伤寒杆菌 示：鞭毛
荚膜
肺炎链球菌 示：荚膜
四、革兰染色法
1. 细菌涂片制作
涂片（均匀） 干燥 固定
2. 革兰染色
实验一油镜的使用细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察
实验一油镜的使用细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察实验目的：本实验旨在通过油镜的使用，观察细菌的革兰氏染色和形态，以掌握细菌鉴定的基础方法。
实验原理：革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，用于分辨细菌的结构和形态。
该染色方法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌在革兰氏染色中染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色。
实验步骤：1.准备培养细菌的平皿和无菌的玻璃，使用酒精灯对玻璃杯进行灭菌处理。
2.取一根无菌的铂丝，沾取扩展细菌后在培养基平皿上划线接种。
3.将接种的培养基平皿在37°C恒温箱中培养12小时。
4.取出培养基平皿，使用吹泡沫取一点接种，放到滴眼瓶中，加入适量的生理盐水。
使用吹泡沫轻轻吹散细菌。
5.取一个无菌玻璃片，将油镜放在玻璃片上，使其与玻璃片连接。
6.使用无菌的锡夹夹取一小滴被吹散细菌的生理盐水，滴在油镜上。
7.将另一个无菌玻璃片放在油镜上，用力按压，使细菌均匀散布在油镜上。
8.将油镜取下，并将其放在培养基平皿上。
将油镜根据标记分为两部分，每部分放置一个培养基平皿。
9.将培养基平皿放入37°C恒温箱中，培养12小时。
10.将培养基平皿取出，观察细菌在油镜上的生长情况。
11.取一个干净的玻璃片，将油镜放在玻璃片上。
12.使用吸水纸轻轻将油镜上的细菌液吸干，并用培养基液洗净。
13.将玻璃片放在烘箱中烤干。
14.使用革兰氏染色方法对油镜上的细菌进行染色处理。
15.将革兰氏染色后的油镜进行形态观察，使用显微镜进行放大观察细菌结构。
实验结果分析：观察油镜后，革兰氏染色能够将细菌染成紫色或红色。
紫色堆状或链状的细菌属于革兰氏阳性菌，红色的细菌属于革兰氏阴性菌。
通过观察细菌形态，可以判断细菌的形状、大小、胞内结构等特征。
实验注意事项：1.实验过程中无菌操作非常重要，要使用无菌工具，注意无菌条件。
2.实验后要及时消毒处理，避免细菌污染。
3.实验中需要按照实验室的安全操作规范进行操作，避免危险发生。
实验一、油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色
油镜的使用方法和注意事项
1、用低倍镜对光。最大光圈 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后- 上升镜筒-油镜转至正下方，在
载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗 螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使 物象清晰-观察记录。最大光圈 5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。 用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲 苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦 去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。
– 画图 – 文字描述
• 分析和讨论 • 思考题
实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、 细菌的革兰氏染色
教学目标或要求：
※巩固和掌握显微镜油镜的正确使用； ※学习细菌制片和单染色技术； ※对 人 体 微 生 物 染 色 检 查 ， 初 步 建 立 无 菌 操
作的概念。 ※学习细菌的革兰氏染色方法
细菌的制片与染色
单染色 复染色
染料
多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为 以下类型：
①碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子部
分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫 沙黄, 甲基蓝,碱性复红等。
②酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子部
分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、 酸性复红 等。
涂片——干燥——固定
结晶紫1min——水洗
95%乙醇脱色约10~20s——水洗
I-KI 1min——水洗
沙黄或石炭酸复红 1min——水洗
干燥——镜检
革兰氏染色注意事项
实验三 显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色
一、实验目的 了解并掌握油镜的原理和使用方法； 掌握细菌革兰氏染色的原理和方法，学会在 油镜下观察细胞和识别细菌的形态特征。
二、实验材料
1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌 2、仪器：显微镜 3、染色液：草酸铵结晶紫染色液、Lugol碘 液、95％乙醇、0.5%沙黄染色液 4、材料：载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜 纸
直接用高倍镜或油镜观察？ 4、革兰氏染色中哪一步是关键，为什么？你如
何控制这一步？
葡萄球菌
大肠杆菌
（1）涂片：：载玻片要洁净无油迹；滴生理 盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可 过于浓厚
（2）固定： 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用加热固定
法。固定时尽量维持细胞原有的形态。
注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜， 温度过高会改变甚至破坏细胞形态。
（3）染色（先阅读p.31的注意事项）
革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色 是整个操作的关键环节，脱色不足，阴性 菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被 误染成阴性菌。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲 洗后，应摔去细胞上的残水，以免染色液 被稀释。
（4）镜检(p.24，用低倍、高倍、油镜 分别观察细菌)
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
（二）油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过 于密集的细菌，常常呈假阳性。
实验三显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色共19页
61、辍学如磨刀之石，不见其损，日 有所亏 。 62、奇文共欣赞，疑义相与析。
63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠 深巷中 ，鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几，倏如流电惊。 65、少无适俗韵，性本爱丘山。
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成8、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色
微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色细菌的染色一、实验目的1、掌握细菌涂片标本的制备方法2、掌握细菌革兰染色发和抗酸染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰氏染色结果3、巩固显微镜油镜的使用和保护法4、学习无菌操作技术二、实验仪器和试剂仪器：显微镜、镜油、擦镜纸、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯试剂：结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌液体培养液、牙垢、石炭酸复红、3％盐酸酒精、碱性美蓝染液、枯草芽孢杆菌、擦镜液三、实验原理：革兰染色法：萋－纳氏抗酸染色法：枯草芽孢杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，它包围在肽聚糖的外面，所以枯草芽孢杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
萋－纳氏抗酸染色法是在加热条件下使枯草芽孢杆菌与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美蓝复染后，枯草芽孢杆菌芽孢仍然为红色，而细菌为蓝色。
四、实验步骤：革兰染色：1、涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧，冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片一端做一涂膜；取一牙签在牙齿上轻轻划动取少量牙垢，在该洁净载玻片的另一端做一涂膜。
2、干燥在空气中自然干燥。
3、固定用镊子夹住涂片一端，将两涂膜出分别在火焰上连续通过三次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜。
4、染色结紫初染：滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上，染色1分钟，水洗；卢戈氏碘液媒染：用卢戈氏碘液覆盖涂片1分钟，水洗；95%的乙醇脱色：滴加95%的乙醇，轻轻摇动玻片进行脱色，直至流出的乙醇无紫色时，水洗；蕃红复染：滴加蕃红染液复染2分钟以上，水洗，吸干镜检。
5、镜检载玻片上滴加一滴香柏油，放油镜下镜检;注意标本中细菌的形态、大小，排列和颜色。
萋－纳氏抗酸染色法：1、涂片、固定用接种环挑取一环枯草芽孢杆菌菌液，涂于玻片上做成薄膜，自然干燥后经火焰固定。
2、染色滴加石炭酸复红液于涂片上，用玻片夹住涂片微火加热，保持染液冒蒸汽约5分钟，切勿蒸发至干或使染液沸腾；冷后，水冲洗；以3％盐酸酒精脱色，至片上红色全部脱去为止；水冲洗后，以碱性美蓝液复染1分钟，水洗，待干，镜检。