检测器a紫外
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光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测 特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。
• 二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD)以光电 二极管阵列作为检测元件的紫外检测器它可构成多通 道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式 接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快 速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三 维谱图。 • DAD与UV检测器的区别 • 普通UV检测器是先用单色器分光，然后让特定波 长的光进入流通池。DAD检测器是先让所有波长的光 都通过流通池，然后通过一系列分光技术，使所有波 长的光在接受器上被检测。
流动相有毒，费用较高
运行和操作比GC难一些 仪器制造难度大
液相色谱仪
结构流程
注射器 进样器 高压泵 混合室 预柱 接头 色谱柱 溶剂 检测器
数据系统
HPLC仪器结构图
高效液相色谱分析过程
分析前，选择适当的色谱柱和流动相。开泵， 冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用 微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带 入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测 器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集 器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分 浓度转变成电信号，经过放大输入计算机，经过 工作站数据处理，就得到色谱图。色谱图是定性、 定量和评价柱效高低的依据。
⑷缺点 ①只能检测有紫外吸收的样品； ②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑸波长选择 ①选择λ max作检测波长，以得到较高的灵敏度； ②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑹紫外检测器的类型 ①固定波长型(已淘汰)； ②可变波长型(最常用)； ③二极管阵列检测器(最新型)。
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
二、主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相 (<10μm) ，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、
高速是高效液相色谱的特点之一。
应具有压力平稳，脉Байду номын сангаас小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
(2) 进样装置
高效液相色谱与气相色谱比较
气相色谱 只能分析挥发性物质，只能 分析20%的化合物 不能分析热不稳定物质 用毛细管色谱可得到很高的 柱效 有很灵敏的检测器如ECD和 较灵敏的通用检测器(FID和 TCD) 流动相为气体，无毒，易于 处理 运行和操作容易 仪器制造难度较小 高效液相色谱 几乎可以分析各种物质 可以分析热不稳定物质 色谱柱不能很长，柱效不会 很高 没有较高灵敏的通用检测器
一、色谱法概述
• 色谱法是一种分离技术 • 色谱法原理
是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、 分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相 对运动时，使各组份在两相中反复多次受到上述 各作用力而达到相互分离。 两相中有一相是固定 的，叫作固定相，有一相是流动的，成为流动相。
高效液相色谱是以液体为流动相的色谱方法。
3）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时使截止波长增加； 4）化学稳定性好； 5）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。
流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”
气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为
液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作
用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争， 即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
5）电导检测器
• 电导检测器主要用于离子色谱的检测。 • 其原理是基于待测物在一些介质中电离后所 产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质 的含量。 • 电导检测器的主要部件是电导池。其响应受 温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温箱中。 另外，当pH>7时，该检测器不够灵敏。
HPLC流动相和固定相简介
按照固定相不同分为：液液分配色谱；液固吸附色
谱；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。 此外，还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等。
HPLC与GC的比较 分析对象及范围： GC 分析只限于气体和低沸点的稳定
化合物，而这些物质只占有机物总数的 20%；HPLC可以分析
高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物 总数的80%。
一、流动相
与GC流动相不同，HPLC流动相为溶剂，它既有运载作用，
又和固定相一样，参予对组分的竞争，因此溶剂的选择对分离 十分重要。理想的溶剂应有下列特性： 1）对待测物具一定极性和选择性； 2）使用 UV检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长；使用折
光率检测器，溶剂的折光率要与待测物的折光率有较大差别；
c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。 通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。 灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度洗脱。
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
(3) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
(4)检测器
a. 紫外-可见光检测器
⑴ 检测原理：基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光 或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。液相色谱 仪一般都配置有UV-Vis检测器 ⑵ 组成：光源、流通池、检测元件、工作站等。 ⑶ 特点：①灵敏度高，噪声低；②不破坏样品，可用于制备； ③对温度、流动相流速波动不敏感，可用于梯度淋洗；④属于 浓度型检测器。
d. 荧光检测器 （Fluorescence detector）
许多有机物具荧光活性， 尤其是芳香族化合物具 有很强的活性。荧光检 测器是一种选择性很强 的检测器，其灵敏度比 UV检测器高2~3个数量 级。 对多环芳烃，维生 素B，黄曲霉素，卟啉 类化合物，农药，药物， 氨基酸，甾类化合物等 有响应。
• 二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD)以光电 二极管阵列作为检测元件的紫外检测器它可构成多通 道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式 接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快 速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三 维谱图。 • DAD与UV检测器的区别 • 普通UV检测器是先用单色器分光，然后让特定波 长的光进入流通池。DAD检测器是先让所有波长的光 都通过流通池，然后通过一系列分光技术，使所有波 长的光在接受器上被检测。
流动相有毒，费用较高
运行和操作比GC难一些 仪器制造难度大
液相色谱仪
结构流程
注射器 进样器 高压泵 混合室 预柱 接头 色谱柱 溶剂 检测器
数据系统
HPLC仪器结构图
高效液相色谱分析过程
分析前，选择适当的色谱柱和流动相。开泵， 冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用 微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带 入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测 器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集 器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分 浓度转变成电信号，经过放大输入计算机，经过 工作站数据处理，就得到色谱图。色谱图是定性、 定量和评价柱效高低的依据。
⑷缺点 ①只能检测有紫外吸收的样品； ②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑸波长选择 ①选择λ max作检测波长，以得到较高的灵敏度； ②检测波长＞流动相的截止波长。 ⑹紫外检测器的类型 ①固定波长型(已淘汰)； ②可变波长型(最常用)； ③二极管阵列检测器(最新型)。
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
二、主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相 (<10μm) ，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、
高速是高效液相色谱的特点之一。
应具有压力平稳，脉Байду номын сангаас小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
(2) 进样装置
高效液相色谱与气相色谱比较
气相色谱 只能分析挥发性物质，只能 分析20%的化合物 不能分析热不稳定物质 用毛细管色谱可得到很高的 柱效 有很灵敏的检测器如ECD和 较灵敏的通用检测器(FID和 TCD) 流动相为气体，无毒，易于 处理 运行和操作容易 仪器制造难度较小 高效液相色谱 几乎可以分析各种物质 可以分析热不稳定物质 色谱柱不能很长，柱效不会 很高 没有较高灵敏的通用检测器
一、色谱法概述
• 色谱法是一种分离技术 • 色谱法原理
是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、 分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相 对运动时，使各组份在两相中反复多次受到上述 各作用力而达到相互分离。 两相中有一相是固定 的，叫作固定相，有一相是流动的，成为流动相。
高效液相色谱是以液体为流动相的色谱方法。
3）高纯度。否则基线不稳或产生杂峰，同时使截止波长增加； 4）化学稳定性好； 5）适宜的粘度。粘度过高，柱压增加；过低，易产生气泡。
流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”
气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为
液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作
用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争， 即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
5）电导检测器
• 电导检测器主要用于离子色谱的检测。 • 其原理是基于待测物在一些介质中电离后所 产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质 的含量。 • 电导检测器的主要部件是电导池。其响应受 温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温箱中。 另外，当pH>7时，该检测器不够灵敏。
HPLC流动相和固定相简介
按照固定相不同分为：液液分配色谱；液固吸附色
谱；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。 此外，还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等。
HPLC与GC的比较 分析对象及范围： GC 分析只限于气体和低沸点的稳定
化合物，而这些物质只占有机物总数的 20%；HPLC可以分析
高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物 总数的80%。
一、流动相
与GC流动相不同，HPLC流动相为溶剂，它既有运载作用，
又和固定相一样，参予对组分的竞争，因此溶剂的选择对分离 十分重要。理想的溶剂应有下列特性： 1）对待测物具一定极性和选择性； 2）使用 UV检测器时，溶剂截止波长要小于测量波长；使用折
光率检测器，溶剂的折光率要与待测物的折光率有较大差别；
c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。 通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。 灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度洗脱。
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
(3) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
(4)检测器
a. 紫外-可见光检测器
⑴ 检测原理：基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光 或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。液相色谱 仪一般都配置有UV-Vis检测器 ⑵ 组成：光源、流通池、检测元件、工作站等。 ⑶ 特点：①灵敏度高，噪声低；②不破坏样品，可用于制备； ③对温度、流动相流速波动不敏感，可用于梯度淋洗；④属于 浓度型检测器。
d. 荧光检测器 （Fluorescence detector）
许多有机物具荧光活性， 尤其是芳香族化合物具 有很强的活性。荧光检 测器是一种选择性很强 的检测器，其灵敏度比 UV检测器高2~3个数量 级。 对多环芳烃，维生 素B，黄曲霉素，卟啉 类化合物，农药，药物， 氨基酸，甾类化合物等 有响应。