85 细菌内毒素检查法USP37

<85>细菌内毒素试验USP37

装置

将用于验证过程的所有玻璃器皿和热稳定性材料置于干热灭菌箱中以除去热原。最小灭菌时间和温度一般为30min,250°。若需使用塑料器皿，例如微孔板或自动加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素且对试验无干扰的器械。【注：在本章中，“管”的意思包括其他任何反应容器，如微量滴定管】试剂及试液

阿米巴溶解产物（鲎试剂）——鲎试剂是一种由寄生于鲎（中国鲎或美洲鲎）中的阿米巴虫的溶解产物（白血细胞）获得的冻干产品。该试剂符合有关法规要求。

【注：鲎试剂会对一些除内毒素外的β-葡葡聚糖起反应。可利用鲎试剂不与葡聚糖反应，通过移除阿米巴溶解产物中会与葡聚糖反应的G因子或抑制阿米巴溶解产物的G因子反应系统和用于存在葡聚糖的内毒素试验。】

细菌内毒素检查用水（BET）——用注射用水或其他不与鲎试剂反应的在灵敏限度内的水。溶菌液供试液——在缓慢搅拌下，阿米巴溶解产物（鲎试剂）溶于BET检查用水或鲎试剂生产商建议的缓冲液中，根据生产需要贮存重组的鲎试剂，冷藏或冷冻。

溶液的制备：

标准内毒素储备液——标准内毒素储备液是根据包装上的说明书，制剂标签上标准内毒素储备液的储存和制备，用现行的WHO国际标准校准过的USP内毒素标准品制备的。内毒素用EU 表示。【注：1EU=1IU】

内毒素标准液——将内毒素储备液混合均匀，再用细菌内毒素检查用水对其作适当的系列稀释。尽快使用稀释液，以避免因吸附而失去活性。

供试液——供试溶液是通过用细菌内毒素检查用水溶解、稀释药物制备。某些物质或制剂可能在其他水溶液中被更适当地溶解、稀释。如有必要，调节待测溶液的pH值，使鲎试剂和样品的混合物pH在由鲎试剂生产者定的pH范围内。通常使用于pH范围在6.0-8.0的产品。pH 的调节可以用鲎试剂生产者推荐的酸、碱或适当的缓冲液。酸和碱可以在已去除内毒素的容器中用浓缩液或固体和细菌内毒素检查用水制备。缓冲剂必须进行验证无内毒素和干扰因子。最大有效稀释液（MVD）测定

最大有效稀释液是指内毒素限度待测样品的允许的最大范围的稀释液。用下列公式测定MVD：MVD = (内毒素限度×供试液浓度)/（λ）

内毒素限度——注射药品的内毒素限度取决于剂量，等于K/M2，其中K是每千克体重内毒素的阈值热剂量；M是每千克体重产品的最大推荐剂量。当进行间隔频繁注射和连续输液时，M 是指每小时给药的最大总剂量。在药典中，注射药品的内毒素限度规定为EU/mL, EU/mg, EU/单位生物活性，等。供试液浓溶液——

mg/mL内毒素规定为重量（EU/mg）的情况下；Units/mL内毒素规定为重量（EU/单位生物活性）的情况下；mL/mL内毒素规定为重量（EU/mL）的情况下。λ凝胶法（EU/mL）或者用于浊度法和显色法标准曲线的最低浓度的标示灵敏度。