动物细胞培养实验
动物细胞操作实验步骤
一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握动物细胞传代、冻存、复苏等基本操作方法。
3. 了解动物细胞在生物学研究中的应用。
二、实验原理动物细胞培养是将动物组织或细胞在体外模拟体内环境条件下，进行生长、繁殖的一种技术。
通过动物细胞培养，可以研究细胞生物学、分子生物学、遗传学等方面的知识，为生物医学研究和药物开发提供实验材料。
三、实验材料1. 细胞：小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠胚胎肺细胞等。
2. 培养基：DMEM、RPMI-1640等。
3. 培养试剂：胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等。
4. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、倒置显微镜、移液器、离心机、水浴锅等。
四、实验步骤1. 细胞复苏（1）将冻存的细胞从液氮罐中取出，立即放入37℃水浴锅中解冻。
（2）用移液器将细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）将培养至80%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液按1:2或1:3的比例传代至新的培养瓶中。
（5）置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞冻存（1）将培养至70%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。
（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。
（4）将细胞悬液按1:1的比例转移至冻存管中。
（5）加入10%DMSO，混匀。
（6）将冻存管置于-80℃冰箱中过夜，然后转入液氮罐中保存。
4. 细胞观察（1）将培养好的细胞取出，用胰蛋白酶消化。
（2）将消化后的细胞悬液转移至载玻片上，滴加适量固定液。
（3）室温固定10分钟。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养实验设计教案：选材与变量控制策略
动物细胞培养是生物学和生命科学领域中应用广泛的一种重要实验技术。
在科学研究和临床医学等领域，动物细胞培养实验被广泛运用，用于药物筛选、疾病模型构建、生长因子和信使分子生物学研究等。
本篇文章将从动物细胞培养实验选材和变量控制策略两个方面进行讲解，以帮助读者更好地设计动物细胞培养实验教案。
一、动物细胞培养实验选材1.培养物资料的准备动物细胞培养实验中，培养物资料的准备是非常关键的一个环节。
我们需要选择适当的生物材料，如细胞株、药物和微生物等，以确保实验结果的可靠性和稳定性。
细胞株的选择应该根据实验目的来确定，如需要研究某种疾病模型，我们可以选择与病理学相关的人类细胞株，如乳腺癌细胞株MCF-7；如果需要筛选新型潜在药物，我们可以选择与药物代谢和药效相关的肝癌细胞株HepG2。
此外，在选择细胞株时还要考虑其生长速度、细胞数、生长条件等因素。
药物的选择应该以实验的目的和细胞株稳定性为基础。
比如，如果需要研究某种药物的毒性，我们可以选择其不同浓度的药物进行培养，并观察细胞的生长及形态变化。
在选择药物时还需注意其溶解度、稳定性等因素。
2.培养条件的设置动物细胞培养实验中，培养条件的设置是确保实验稳定性和可重复性的前提。
培养条件包括培养基配方、培养温度、CO2浓度、培养时间等因素。
培养基的选择要根据培养细胞株的需求，可以根据文献资料中的配方或进行适当的调整和优化。
在培养过程中，需要注意培养基的PH值、温度、灭菌等因素，以保证细胞的健康生长。
温度和CO2浓度的设置对细胞的生长、代谢和分化具有非常重要的影响。
在一般的培养条件下，温度一般设置在37℃，CO2浓度一般为5%。
当然，在不同实验情况下，温度和CO2浓度的设置也会有所不同。
二、变量控制策略动物细胞培养实验中，各种因素的变化都可能会影响实验结果。
如何控制变量，确保实验结果的可信性和稳定性，是每个研究人员需要仔细思考和控制的问题。
下面我们就来探讨一些常见的变量控制策略：1.正确执行实验正确的实验操作是确保实验结果可重复性的基础。
高中生物课程教案分享：动物细胞培养实验案例讲解
高中生物课程教案分享：动物细胞培养实验案例讲解导言生物学是指研究生物体及其相互关系和运动规律的学科，其内涵包含了多样性、相互作用、进化和适应性等。
而生物学课程不仅是学生学习生物学或进一步攻读医学或生物科学的必要前提，更是一种较为全面的自然科学。
在生物课程的教学中，神经元和细胞、遗传学、免疫学等学科是不容忽视的重要内容之一。
在其中，细胞学更是贯穿整个课程的核心。
教学目的细胞培养实验是细胞学领域一个常见的实验技术，使用这种技术，我们可以在实验环境下研究细胞的许多功能和过程。
这一实验的教学目的包括：1.理解细胞培养的重要性和运作原理；2.学习如何准备培养基及其配制方法；3.学会样本准备和理解细胞培养的基本技能；4.掌握无菌操作和安全措施。
教学过程实验材料1.细胞培养基（DMEM）；2.无血清胎牛血清（FBS）；3.法尼迪胆红；4.表面活性剂（如Tween 20）；5.96孔板。
步骤1：样品收集洗涤细胞样品及其培养。
为保证实验能够顺利进行，必须使用无菌技术并避免感染风险。
在进行收集样品作业前，务必洗手及其消毒，并在时期内保持反复按照。
此外，需要准备完整的实验平台及其消毒设备，如消毒液、眼罩、手套、口罩等。
步骤2：试管准备收集样品后，需要将其移动至已经清洗和消毒的环境中。
此时，必须通过微生物循环柜和干燥器来消毒以及干燥工具和表面。
之后，Proceed to add the culture medium, FBS,and penicillin-streptomycin combination.在处理试管时使用无菌循环柜，紧挨着清洁过的手套将保存期点的细胞样品注入，使其均匀分布于试管中。
步骤3：细胞培养在培养过程中，需要定期观察其细胞的生长状况和替换细胞培养基。
此外，还需要为细胞提供必要的营养物质和环境因素。
在这些位置，需要进行的步骤如下：1.使用微量注射器在试管里添加保护培养基和抗生素，确保细胞的生存和稳定；2.在试管上方贴上无菌膜，不仅可以保护试管和培养基，还能增加细胞的纯度和稳定性；3.将试管在配备好了的細胞培養箱中放置，在恒温孵育器上设置适宜的温度、湿度和氧气供应，确保试管保持稳定和深度。
动物细胞培养实验2
实验题目：动物细胞培养教师：XXX实验类型：综合学时：26(参考)内容：一、实验目的通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材1.材料出生后2-3天的乳鼠2.试剂平衡盐液－Hank液细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液犊牛血清碳酸氢钠 1万单位/ml青、链霉素 3%谷氨酰胺磷酸盐缓冲液3.实验器材镊子解剖刀剪眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗量筒记号笔试管试剂瓶三角瓶移液管培养皿培养瓶吸管橡皮头显微镜血细胞计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架试管解剖板碘酒棉球口罩二氧化碳培养箱超净工作台灭菌锅倒置显微镜四、实验内容原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。
传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。
培养细胞冷冻保存。
五、关键步骤及注意事项1. 注意无菌操作，及时更换培养液。
六、思考题1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
动物细胞培养原理
动物细胞培养原理
动物细胞培养是一种基于细胞生物学原理的实验技术，用于在体外环境中维持和增殖动物细胞。
其基本原理可以归结为以下几点：
1. 细胞培养基的准备：动物细胞培养基是一种含有营养物质、生长因子和激素的培养液。
它提供了细胞生长所需的基本养分和环境条件。
培养基的配方可以根据不同细胞类型的要求进行调整。
2. 细胞来源和分离：动物细胞通常来自活体组织或已经培养的细胞系。
活体组织需要进行分离，通过消化酶或机械切碎等方法将组织细胞单元分离开来。
3. 细胞接种和传代：分离得到的细胞被接种到含有培养基的培养皿中，放入培养箱内进行培养。
细胞根据其生长速度和密度定期传代，即将细胞从原培养皿中剥离并转移到新的培养皿中。
4. 培养环境的控制：细胞培养中，一系列环境因素需要得到严格控制，如温度、湿度、气体浓度和pH值等。
这些条件的维
持可以使用培养箱、CO2和空气混合器以及培养皿的设计来
实现。
5. 感染与检测：细胞培养过程中，存在着细菌、真菌、病毒等微生物的污染风险。
为了防止细胞感染，通常会添加抗生素或抗真菌剂到培养基中。
同时，也需要进行细胞的纯度和活性检测，如形态学观察、细胞计数、细胞周期的测定以及特定蛋白
质或基因的表达分析等。
总而言之，动物细胞培养是一项复杂而精细的技术，依靠培养基的配制、细胞来源和分离、细胞接种和传代、培养环境的控制以及感染与检测等步骤来实现。
这项技术的发展和应用对于细胞生物学、药物研发、组织工程等领域有着重要的意义。
动物细胞培养实验方案
动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。
二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。
三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。
此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。
四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。
五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。
动物细胞培养传代培养
实验三：动物细胞培养细胞传代培养【实验目的】熟练掌握细胞的传代培养法。
【实验原理】传代培养是组织培养常规保种方法之一。
也是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。
这一过程就叫传代。
传代培养可获得大量细胞供实验所需。
传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
【材料用品】材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞。
药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25％胰蛋白酶，Hanks 液。
仪器：C02培养箱，倒置：显微镜，超净台。
【实验步骤】1．人无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。
2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将培养用液置37℃下预热。
3．超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭溶液擦净。
4．打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。
5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
6．将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7．倒掉培养细胞的旧培养基。
酌情可用2—3 mL Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
18．每个大培养瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。
注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7～10 mL／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。
盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。
实验五动物细胞培养与细胞活性检测
学习并掌握数据分析方法，如 统计分析、图表制作等，对实 验结果进行科学合理的解释。
了解药物研发过程中细胞活性 检测的重要性和应用价值，为 后续药物研发提供实验依据和 指导。
02
实验原理
动物细胞培养基本原理
动物细胞培养是将动物细胞在适 宜的条件下进行体外培养，使细 胞在体外继续生长、分裂和维持
生命活动的过程。
药物对细胞活性影响机制
药物对细胞活性的影响是指药物通过与细胞膜上的受体或直接进入细胞内，对细 胞的代谢、信号转导、基因表达等方面产生影响，从而改变细胞的生长、增殖和 凋亡等过程。
药物对细胞活性的影响机制非常复杂，涉及多个环节和信号通路，是药物研发和 药理学研究的重要内容。
03
实验步骤
动物细胞培养准备
05
结论与展望
实验结论总结
实验结果表明，动物细胞在适宜的培 养条件下能够正常生长和繁殖，并且 通过细胞活性检测可以评估细胞的生 长状态和存活率。
细胞活性检测的方法包括染色法、荧 光法、酶活性法等，这些方法可以有 效地评估细胞的生长状态和存活率。
实验中使用的动物细胞培养技术包括 细胞分离、传代、培养基选择等，这 些技术对于保证细胞生长和存活至关 重要。
了解细胞活方法，如MTT法、荧光染色法、 细胞计数法等。
02
了解不同检测方法的原理和应用范围，能够根据实验需求选择
合适的检测方法。
掌握细胞活性检测的实验操作流程，包括样品制备、加药处理、
03
孵育时间等。
分析细胞活性与药物作用的关系
通过实验观察不同药物对细胞 活性的影响，分析药物作用机 制和效果。
培养基是细胞生长的必要条件， 它提供了细胞所需的营养物质、
激素、生长因子等。
高中生物教案分享：动物细胞培养实验中的细胞数量计数方法
高中生物教案分享：动物细胞培养实验中的细胞数量计数方法为了深入理解动物细胞的结构和功能，许多生物学教师会在其课程中让学生参与动物细胞培养实验。
在此过程中，培养物中的细胞通常是需要计数的一个重要参数，以便进行后续的研究。
本文旨在分享在动物细胞培养实验中计数细胞数量的几种方法，并讨论这些方法的优缺点以及适用范围。
一、视觉计数法视觉计数法是最基础的细胞计数方法之一，它通过显微镜直接数出视野中的细胞数量。
这个方法简单易懂，不需要任何特殊设备，对于初学者来说是非常有吸引力的。
但是，这种方法的缺点也是显而易见的：视觉计数法的准确性非常依赖于实验者的经验和技术水平。
因为在视觉计数法中，实验者不仅需要能辨认出真正的细胞，还要能够判断细胞是否已经被计算过，以及必须像数色块一样覆盖所有的视野，这在实践中是非常困难的。
视觉计数法适合于初学者或对于数量要求不高的实验。
二、伽玛计数法伽玛计数器是一种流量细胞计数器，是一种通过流体力学原理统计流体中粒子数量的仪器。
在这个方法中，培养物通过一个流通的计数器，在计数器中加入一个丙酮和伽玛线的混合剂，伽玛线能够捕获到细胞中的核物质，通过对不同颗粒刺激伽玛线发射的特殊方式计数细胞。
伽玛计数器的优点是速度非常快，准确度非常高，适合于需要准确计数的实验。
然而，伽玛计数器也有其缺点：首先是需要耗费较高的成本；对设备的严格要求会对实验产生一定的限制。
三、明胶滤膜计数法明胶滤膜计数法是一种将培养物滤过一种特殊的纱布或滤膜，将滤膜放在载玻片上，通过染色或直接计数的方法计算细胞数量的方法。
这种方法的优点是比视觉计数法更加准确，也比伽玛计数法便宜，因此，很多实验室通常都会采用这种方法。
明胶滤膜计数法的缺点也是显而易见的：它需要大量时间和劳动力，而且不适用于所有类型的细胞。
由于某些不适合培养的细胞无法在滤膜上形成群集，就无法计算细胞的数量。
四、显微图像分析法显微图像分析法是最新的一种计数细胞数量的技术。
动物实验细胞实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本操作技术。
2. 了解细胞培养过程中可能出现的常见问题及其解决方法。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态，了解细胞生长规律。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出，在体外条件下进行培养、繁殖的过程。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于细胞生物学、分子生物学、遗传学等领域。
本实验采用动物细胞培养技术，通过观察细胞在不同培养条件下的生长状态，了解细胞生长规律。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠胚胎成纤维细胞、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、无菌培养皿、无菌移液器、细胞计数板等。
2. 实验仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、超净工作台、离心机、电子天平等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）将小鼠胚胎成纤维细胞接种于无菌培养皿中，放入细胞培养箱中培养。
（2）配制DMEM培养基，加入青霉素、链霉素，混匀后过滤除菌。
2. 细胞传代（1）将培养好的细胞取出，用无菌移液器吸取适量的细胞悬液，加入无菌离心管中。
（2）以1500r/min的速度离心5分钟，弃去上清液。
（3）加入适量的DMEM培养基，混匀后用无菌移液器吸取适量的细胞悬液，接种于新的无菌培养皿中。
（4）将培养皿放入细胞培养箱中培养。
3. 细胞计数（1）用细胞计数板对细胞进行计数，计算细胞密度。
（2）根据细胞密度调整细胞传代比例。
4. 观察细胞生长状态（1）用倒置显微镜观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
（2）记录细胞形态、细胞密度、细胞周期等指标。
五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在适宜的培养条件下，细胞呈长梭形，排列整齐。
随着培养时间的延长，细胞密度逐渐增加，细胞体积逐渐增大。
2. 细胞计数结果经过多次传代，细胞密度逐渐增加，细胞计数结果如下：第1代：1.5×10^6个/mL第2代：2.0×10^6个/mL第3代：2.5×10^6个/mL第4代：3.0×10^6个/mL3. 细胞周期分析通过观察细胞形态，发现细胞处于不同的生长阶段，包括G1期、S期、G2期和M 期。
动物科学细胞实验报告
实验名称：动物细胞培养与传代一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本操作流程；2. 掌握动物细胞传代技术；3. 学习观察细胞形态变化，了解细胞增殖、衰老等生命现象。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或细胞分离出来，在体外培养条件下使其生长、繁殖的一种技术。
通过动物细胞培养，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象，为生物医学研究提供重要手段。
动物细胞传代是指在细胞培养过程中，将细胞从培养瓶中取出，加入新鲜培养液，使细胞继续生长、繁殖的过程。
传代次数越多，细胞生长速度越慢，衰老现象越明显。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠胚胎成纤维细胞；2. 培养基：DMEM高糖培养基；3. 细胞消化剂：胰蛋白酶；4. 细胞培养瓶、培养皿、移液器、显微镜等。
四、实验步骤1. 预处理（1）将小鼠胚胎成纤维细胞从冻存管中取出，37℃水浴箱中解冻；（2）加入适量DMEM高糖培养基，轻轻吹打，使细胞分散均匀；（3）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）观察细胞生长状态，待细胞密度达到80%时，进行传代；（2）用胰蛋白酶消化细胞，吹打均匀；（3）将消化后的细胞悬液转移至培养皿中，加入适量DMEM高糖培养基，终止消化；（4）收集细胞，用移液器将细胞悬液转移至新的培养瓶中；（5）将细胞悬液在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 观察细胞形态变化（1）每隔一定时间，观察细胞形态变化，记录细胞增殖、衰老等现象；（2）用显微镜观察细胞形态，拍照记录。
五、实验结果与分析1. 细胞生长状态在培养过程中，细胞生长状态良好，细胞密度逐渐增加，细胞形态呈扁平状，细胞间连接紧密。
2. 细胞形态变化随着传代次数的增加，细胞生长速度逐渐减慢，细胞衰老现象逐渐明显。
在显微镜下观察，可见细胞出现皱缩、核仁缩小、细胞膜皱褶等衰老现象。
六、实验结论1. 动物细胞培养是一种重要的实验技术，可以研究细胞的生物学特性、细胞增殖、分化等生命现象；2. 动物细胞传代技术是细胞培养过程中的重要环节，有助于维持细胞的生长、繁殖；3. 细胞培养过程中，细胞形态变化反映了细胞的增殖、衰老等生命现象。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。
步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。
步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。
在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。
在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。
细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。
通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。
结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。
动物医学细胞实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和操作方法。
2. 观察动物细胞在体外培养过程中的形态变化，了解细胞生长、衰老和死亡过程。
3. 探讨细胞培养技术在动物医学研究中的应用。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出，在体外条件下进行培养和繁殖的技术。
通过细胞培养，可以研究细胞的生物学特性、细胞代谢、细胞分化等，为动物医学研究提供有力支持。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验器材：细胞培养瓶、超净工作台、显微镜、剪刀、镊子、培养皿、移液器、吸管、细胞培养液、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、75%酒精、无菌生理盐水、DMSO （二甲基亚砜）3. 实验试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、75%酒精、无菌生理盐水、DMSO四、实验步骤1. 取小白鼠胚胎，用剪刀剪开胚胎包膜，取出胚胎组织。
2. 将胚胎组织置于超净工作台上，用无菌生理盐水冲洗，去除杂质。
3. 将冲洗后的胚胎组织用剪刀剪成小块，加入胰蛋白酶，消化10-15分钟。
4. 倒掉消化液，加入适量细胞培养液，用吸管吹打均匀，制成细胞悬液。
5. 将细胞悬液转移至培养瓶中，加入青霉素、链霉素，防止细菌污染。
6. 将培养瓶放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
7. 观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量、生长速度等指标。
8. 在细胞生长过程中，定期更换培养液，以维持细胞生长环境。
9. 细胞培养至一定时期后，观察细胞衰老和死亡现象，分析衰老和死亡原因。
五、实验结果与分析1. 细胞形态：培养初期，细胞呈圆形，排列紧密。
随着培养时间的延长，细胞逐渐变长，形态不规则，出现细胞突起。
2. 细胞数量：培养初期，细胞数量增长较快，约每2-3天翻倍。
后期，细胞数量增长速度减慢，进入平台期。
3. 细胞生长速度：培养初期，细胞生长速度快，约每2-3天翻倍。
后期，细胞生长速度减慢，进入平台期。
4. 细胞衰老和死亡：培养至一定时期后，细胞出现衰老和死亡现象。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言：动物细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。
本实验旨在通过培养动物细胞，观察细胞的生长、分裂和功能表达，以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。
材料与方法：1. 细胞培养基：选择适合培养动物细胞的培养基，如DMEM或MEM等。
2. 细胞培养器具：细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞株：选择合适的细胞株，如人类肺癌细胞株A549。
4. 细胞培养条件：温度、湿度、CO2浓度等。
5. 细胞培养试剂：胎牛血清、抗生素等。
实验步骤：1. 细胞传代：将细胞株从冻存管中取出，加入培养基中，将细胞传代至合适的密度。
2. 细胞培养：将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中，放入培养箱中培养。
3. 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。
4. 细胞染色：使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色，观察细胞内部结构。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞，如药物处理、温度变化等，观察细胞的反应和变化。
7. 细胞计数：使用细胞计数板或细胞计数仪等工具，统计细胞的数量。
结果与讨论：1. 细胞生长：观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、对数期和平台期。
2. 细胞形态：细胞在培养基中呈现出典型的形态特征，如细胞核的形状、细胞质的颜色等。
3. 细胞分裂：观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂，并计算细胞分裂指数。
4. 细胞染色：通过荧光染料或细胞染色剂染色后，观察到细胞内部结构的变化，如细胞器的位置和形态。
5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。
6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞后，观察到细胞的形态、数量和功能发生变化，如细胞凋亡、增殖等。
09动物细胞培养实验
实验一清洗与灭菌（4学时）一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒, 掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作, 了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步, 是组织培养中工作量最大, 也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿, 不仅要求干净透明, 无油迹, 而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质, 哪怕残留0. 1个, 也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要, 对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对, 即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品1. 材料: 无臭氧型紫外灯, 微孔滤膜(直径25): 孔径为0. 22μm, 微孔滤膜(直径90): 孔径为0. 22 μm, 过滤器(直径25)。
2．药品：70％或75％酒精, 0．1％新洁尔灭, 煤酚皂溶液(来苏儿水), 0．5％过氧乙酸, 乳酸, 37％甲醛, 高锰酸钾, NaOH, 盐酸, 重铬酸钾, 浓硫酸(工业)。
3．仪器：超净台, 干燥箱, 高压蒸气灭菌锅, 过滤器, 过滤泵。
四、实验步骤(一)清洗1. 新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗, 再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。
2. 使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水, 避免干涸难洗。
(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿, 自来水清洗数遍, 倒置自然干燥。
(3)浸酸性洗液过夜。
(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10. 15次去除残余酸液, 蒸馏水涮洗3次, 倒置烘干。
(5)包装(牛皮纸或一般纸)。
(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。
(7)贮存备用。
3. 胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0. 2％NaOH煮沸lO-20 min。
动物细胞培养实验
试验一：试验器材预备【试验原理】细胞培育技术与其他一般试验室工作的主要区分在于要求保持无菌操作，避开微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培育室应包括配液室、预备室和培育室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培育过程中的不同操作。
【试验目的】①培育室的设置和设备。
②无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1.试验室设置（1）配液室（2）预备室（3）培育室培育室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要留意以下几点：①培育室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照耀的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过 2 米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流淌。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角积存灰尘。
2.试验室常用设备（1）预备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③枯燥箱：洗涤完的玻璃器皿用枯燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、局部液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜 1：放置未消毒物品。
⑥储品柜 2：放置已消毒物品。
预备室留意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平〔扭力天平和电子天平〕：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培育室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，缓缓通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
依据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，根本原理大致一样，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的干净气流从确定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高干净度工作环境。
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实验一：实验器材准备【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
【实验目的】①培养室的设置和设备。
②无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
但两种净化台的气流方向不同。
使用超净工作台应注意的几点问题：A．净化工作台最好安装在无尘的房间内，最好为隔离好的无菌间内，以免尘土过多易使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。
B．新安装的或长期未使用的工用台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
C．每次使用工作台时，应先用75%酒精擦洗台面，并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。
在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
D．净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰。
E．一般情况下，高效过滤器三年更换一次。
更换高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。
要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗，时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3~6个月进行一次。
F．每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品，并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
②4℃冰箱和低温冰箱：③CO2培养箱：A．一定浓度的CO2对细胞生长，尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用（5%）。
B．一定浓度的CO2可维持培养液恒定的pH。
适用于开放培养，培养箱封口后，可在一般恒温培养箱内培养，但是采用培养皿或多孔板培养时，则需要高湿度和高CO2含量的空气。
C．它增加了湿度，箱体内装有水浴，可以保证培养箱内的湿度。
D．培养箱内装有紫外灯。
E．通过气体流量计可以调节CO2和空气的比例。
F．在水中可加入防腐剂（二氧乙酸）。
可防止因CO2培养箱中湿度较高，易长霉菌。
④离心机：⑤CO2钢瓶：⑥液氮罐：⑦储品柜：用来存放杂物⑧紫外灯：⑨空气净化系统⑩倒置显微镜3．无菌操作（1）无菌室的灭菌：①紫外灯无人时就要打开；②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；③每周清洗消毒一次；④所用物品要以外科手术方式严格消毒；⑤室内台面要要保持洁净，做完实验后，用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等；⑥所用物品要一次性准备好；⑦瓶口要用酒精火焰消毒；⑧尽量减少出入。
（2）实验人员的无菌准备：①肥皂洗手②穿好隔离衣③酒精棉球擦手【思考题】1．观看演示填写出无菌操作的要领。
2．在无菌室工作时应注意的事项是什么？实验过程中如何才能在头脑中形成良好的无菌概念？实验二：动物细胞前处理【实验原理】培养的动物细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，将组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中，在培养箱中培养，这个过程称为原代培养。
细胞在培养瓶中贴壁生长。
随着细胞的生长和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为传代培养。
实验三：动物细胞培养用液的配制【实验原理】熟练掌握培养基(RPMIl640和DMEM)的配制，了解其他培养基的配制方法。
【实验目的】组织培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。
合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。
其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。
它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必须的生长因子、激素、贴附因子等，这是合成培养基所无法替代的。
此外它还能中和有毒物质的毒性。
故一般体外培养细胞时要加入一定量的小牛血清(10％。
20％)。
【实验器材】材料：3 000 mL锥形瓶，250 mL或500 mL培液瓶，翻帽塞，饭盒，pH试纸，孔径0．22 μm的微孔滤膜。
药品：盐酸，无离子水，小牛血清，合成培养基(RPMI1640或DMEM)，青霉素，链霉素，NaHC03。
仪器(请参看仪器图库)：滤泵(进口)1套，滤器(进口)1套，蒸馏器，高压灭菌锅，磁力搅拌器。
【操作步骤】（相关链接培养基的制作方法）(一)准备和安装过滤器清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0．22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。
在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。
用滤泵做正压过滤，压力数字为2。
过滤后要检查滤膜是否完好无损。
(二)合成培养基的配制1．去离子水用蒸馏器进行重新蒸馏(去除无机和有机杂质)，制3 000 mL三蒸水。
三蒸水应及时使用，如果放置一段时间，则使用前须高压处理(15磅20 min)。
2．待水温降至15—30℃C，加入合成培养基干粉，用磁力搅拌一定时间(2—4 h)使之充分溶解。
3．配制RPMll640培养基时应通入适量C02或加入6 mol／L盐酸调pH至6．0左右，这样才能充分溶解。
4．加入一定量NaHCO，调节pH至7．0左右。
5．加水至最终体积。
6．在超净台中对溶液进行滤过除菌，分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞紧瓶口。
7．瓶口封好，4℃冰箱贮存(RPMI1640培养基可以-20℃贮存)。
(三)小牛血清的处理市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。
1．将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
2．处理后的血清贮存于4℃。
3．小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量(见八、新生牛血清的筛选)。
(四)生长培养基的配制除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清和抗菌素。
1．培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。
2．按如下比例配制：基本培养基占80％－90％，小牛血清占10％－20％。
按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL,。
【注意事项】：1．培养细胞使用的瓶子和饭盒应与提取RNA和培养细菌的瓶子和饭盒严格分开。
因为用于处理提取RNA的DEPC水(0．1％焦炭酸二乙酯)是一种致癌剂，并可能影响细胞生长；而培养过细菌的用品也不应与细胞混用。
2．过滤时压力不要太大，以压力数字2为宜，否则细菌易滤过达不到除菌效果，或使滤膜破裂。
分装时需根据使用量的多少分装于大小合适的瓶子中(分装量为使用3．5次用完为宜，并且每瓶只能装2／3体积的液体，过多时瓶子易爆或胶塞自喷)。
3。
滤器用毕立即刷洗，过蒸馏水，晾干收藏。
【操作步骤—详细—细胞培养用液的配制与消毒】器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。
具体步骤：一. 水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
三. 胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
四.青、链霉素溶液的配制于消毒1. 所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
2.具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。