乙肝病毒耐药基因检测试剂盒的临床意义及开发方案V6汇编

ຫໍສະໝຸດ Baidu 方案二
测序片段选择：选取P区包括204，180等热 点位点的片段，C区对干扰素敏感的片段进行 引物设计，预设多套引物方案，选取综合效率 最高组。 核酸提取：DNA提取采用磁珠法提取（便于 以后自动化集成） 反应体系优化：包括Taq酶的选用，缓冲体系 的选择，相应离子浓度的调节等

相关指标
相应成本初测

以单次生产5000人份试剂为例（不同品牌原料成本有差异） DNA提取试剂（成熟技术柱式），约1万元-5万元 PCR检测试剂（引物，盐酸，酶等），约2000元-2万元 纯化试剂（建议用户现配现用），约200元-2万元 质控品（阴性质控，阳性质控等），约1800-3000元 测序试剂（Bigdye，Hi-Di等）。约1万2-12万元 采用20ul反应体系。约2000元 包装，人工，杂费。约5000-1万元 即确认不同品质水准的试剂制造方针后，单次生产5000人份试剂的成本 在3万3-22万5之间。分摊到每个测试成本为6.6元-45元。
开发方案


方案二设计思路 除P区外，C区的基因突变检测可以指导干扰素在乙肝治疗过 程中的应用。在部分临床医师治疗过程中也会做相应关注。

此方案会选取C区和P区相应序列进行测序检测。
相比立菲达安方案，测序区域更大，检测位点更多，除了方 案一中的6种药物，还可指导干扰素在乙肝治疗的应用 按照现有医疗收费物价体系，该方案可收费1200-1800元 （即按照2-3个测序收费）
1000万
300万 40万 4万
全国 HBV— PCR总 测试数
慢性乙 肝病人 数
需要 药敏 实验 的例 数
现存 乙肝 耐药 检测 数
现存 测序 法检 测乙 肝耐
临床意义-市场分析




如上图，因耐药无法进行正确治疗而不得不做测序 检测的测试数现存4万例每年（无证状态） 因耐药无法进行正确治疗而不得不做耐药检测的测 试数现存40万例每年（两家公司有证，非主营产品） 理论值，需要药敏实验的乙肝病人300万每年每人需 要做两次耐药检测，即有600万测试每年 按每测试150元出货到渠道的价格来算，总体市场容 量有9亿人民币。





产品名称：乙型肝炎病毒耐药基因突变检测试剂盒 包装规格：20人份/盒 用途：本试剂盒适用于定性检测HBV患者血液中HBV耐药基 因突变，并判断因突变导致的耐药情况。 主要组分：DNA提取试剂（成熟技术磁珠法），PCR检测试 剂（引物，盐酸，酶等），产物纯化试剂（建议用户现配现 用），质控品（阴性质控，阳性质控等），测序试剂 （Bigdye，Hi-Di等）。 适用标本类型：血清或血浆 采用20ul反应体系。
相应成本初测

以单次生产5000人份为例 DNA提取试剂（成熟技术磁珠），约3万元-15万元 PCR检测试剂（引物，盐酸，酶等），约4000元-4万元 产物纯化试剂（建议用户现配现用），约200元-2万元 质控品（阴性质控，阳性质控等），约1800-3000元 测序试剂（Bigdye，Hi-Di等）。约1万2-12万元 采用20ul反应体系。约2000元 包装，人工，杂费。约5000-1万元 即确认不同品质水准的试剂制造方针后，单次生产5000人份试剂的成本在4万834万5之间。分摊到每个测试成本为9.6元-69元。
临床意义-耐药情况

拉米呋啶（一年耐药率>20%,五年耐药>70%） 替比呋啶（一年耐药率>7%） 恩替卡韦（一年耐药率<2%,三年耐药约17%） 阿德福韦酯（一年耐药率<1%,五年耐药 <29%） 替诺福韦酯（一年耐药率<1%） 恩曲他滨（一年耐药率<1%）
临床意义-耐药处置
乙肝病毒耐药基因检测试剂盒
临床意义及开发方案
临床意义
开发方案
临床意义
概况 耐药情况 耐药处置 市场容量 市场分析 开发方案

临床意义-概况




目前国内97.3%的肝病患者长期不能得到正确有效的 治疗。 核苷类药物是乙肝主要治疗药物。 个别种类核苷类物药耐药比例较高（连续服用拉米 呋啶药物一年耐药率超过20%） 204与180等位点耐药突变之后，会加大其它药物的 耐药突变机率。 治疗初期了解病人基本耐药位点突变情况，有利于 正确确立治疗方案

方案一

测序片段的选择：选取P区包括204，180等 热点位点的片段，进行引物设计，预设多套引 物方案，选取综合效率最高组。 核酸提取：DNA提取采用成熟技术。（柱式） 反应体系优化：包括Taq酶的选用，缓冲体系 的选择，相应离子浓度的调节等。


相关指标





产品名称：乙型肝炎病毒耐药基因突变检测试剂盒 包装规格：20人份/盒 用途：本试剂盒适用于定性检测HBV患者血液中HBV耐药基 因突变，并判断因突变导致的耐药情况。 主要组分：DNA提取试剂（成熟技术柱式），PCR检测试剂 （引物，盐酸，酶等），产物纯化试剂（建议用户现配现 用），质控品（阴性质控，阳性质控等），测序试剂 （Bigdye，Hi-Di等）。 适用标本类型：血清或血浆 采用20ul反应体系。




成本分析



由上可知，工业成本+基本生产成本分摊到5000人份试剂生 产之时，成本为6.6元-45元每个测试。 经验得知，成本在10元左右的成本是可以实现临床基本稳定 使用的方案，18元左右的成本是可以实现临床无障碍使用的 方案。成本从25元开始到45元或以上没有显著检测品质提升。 建议方案采用20元工业成本的方案。也可适当加大每次生产 规模压低成本。
试剂盒开发方案
开发方案---原理与流程
核酸提取 核酸提取
柱 式
柱 式 磁 珠 法 磁 珠 法
PCR扩增
引 物 设 计 纯 化
测序反应
Sanger 法 纯 化
上机测序
3500Dx 数 据 分 析
开发方案
方案一设计思路 因主要几种药物的耐药位点都集中在P区，故 方案一中，会选取P区相应区域进行测序检测。 达到相关耐药检测需要。 覆盖6种市场上主流乙肝治疗药物的耐药基因 突变位点 立菲达安方案 按照现有医疗收费物价体系，该方案可收费 600-1200元（即按照1-2个测序收费）
因前期用拉米呋啶类药物产生耐药而转用恩替 卡韦等非呋啶类药物时，会因为基因屏障被打 破而大幅度加大恩替卡韦类药物的耐药机率。 故对临床医生来讲，从病人开始治疗就知道其 乙肝耐药基因突变情况，对其正确确立治疗方 案意义重大。相关检测产品是其日常工作中需 要的有意义的工具。

临床意义-市场容量
2000万