高效液相色谱法测定人纤维蛋白原中甘氨酸_盐酸精氨酸含量_陈通威

量 80% ，110% ，115% 的甘氨酸、盐酸精氨酸，混匀，稀释 1 倍，分
2．4 方法学考察
别精密量取 100 μL，衍生化 后，每份进样 20 μL，计 算样品回收
线 性 关 系 考 察 ： 分 别 精 密 量 取 对 照 品 溶 液 30，50，70，100， 率。结果见表 2。
表 2 甘氨酸与盐酸精氨酸加样回收试验测定结果( n = 6)
0 0
2
4
6
8
t / min 0
10
0
2
4
6
8
t / min 10
范围内线性关系良好，甘氨酸测定质量浓度为 0． 4 g / L，在线性范
A
B
围之内； 盐酸精氨酸在 0． 186 3 ～ 0． 807 3 g / L 范围内线性关系良
A． 对照品溶液
B． 供试品溶液
好，盐酸精氨酸测定质量浓度为 0． 6 g / L，在线性范围之内。
平均回收率 100． 19% ，RSD 为 1． 06% ; 溶液稳定性试验中，供试品溶液放置 0，2，4，8 h 后分别进样，甘氨酸 RSD 为 1． 51% ，盐酸精氨
酸 RSD 为 1． 94% 。结论 该方法检测结果准确，可用于人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸含量的测定。
关键词： 人纤维蛋白原; 甘氨酸; 盐酸精氨酸; 高效液相色谱法; 含量测定
求; 甘氨酸质量浓度在 0． 186 8 ～ 0． 809 4 g / L 范围内与峰面积线性关系良好，盐酸精氨酸质量浓度在 0． 186 3 ～ 0． 807 3 g / L 范围内线
性关系良好; 精密度试验甘氨酸 RSD 为 1． 37% ，盐酸精氨酸 RSD 为 0． 88% ; 甘氨酸平均回收率 99． 65% ，RSD 为 1． 27% ; 盐酸精氨酸
冻融、干燥和储存过程中存在着多种影响因素 [2 ]。而冻干保护剂 于 3 000。在此色谱条件下甘氨酸、盐酸精氨酸峰与其它色谱峰之间
是影响制品冻干效果的主要因素 [3 ]。甘氨酸、盐酸精氨酸是一种 分离度良好。从色谱图 1A 可知，甘氨酸峰保留时间为 7． 590 min，
理想的蛋白保护剂。本试验中旨在建立一种含量测定方法，用于 盐酸精氨酸峰保留时间为 8． 041 min，内标物天门冬氨酸峰保留时
A 0． 204 8 0． 204 8 0． 204 8 0． 204 8 0． 204 8 0． 204 8
B 0． 313 5 0． 313 5 0． 313 5 0． 313 5 0． 313 5 0． 313 5
液 50 μL，混 匀 ，室 温 放 置 1 h，加 入 正 己 烷 400 μL，摇 匀 ，静 置 分别测得甘氨酸、盐酸精氨酸峰面积与内标峰面积的比值（ f） 。结
10 min，取下层溶液，滤过，即得衍生化的对照品溶液和供试品溶 果甘氨酸 RSD 为 1． 51% ，盐酸精氨酸 RSD 为 1． 94% ，表明溶液
作者简介： 李骘，男，大学本科，研究方向为应用化学，（ 电子 信箱） 391203893@ qq． com； 封淑华，女，硕士研究生，主任药师，研 究 方 向 为 药 品 和 保 健 食 品 质 量 分 析 ，本 文 通 讯 作 者 ，（ 电 话 ）
3 20110506
T5530 － 2005 检验 GB /T5530 －2005 检验
加入量( g / L)
样品含量( g / L)
测得量( g / L)
回收率( % )
X(%)
RSD( % )
A 0． 241 8 0． 241 8 0． 332 5 0． 332 5 0． 347 6 0． 347 6
B 0． 248 4 0． 248 4 0． 341 6 0． 341 6 0． 357 1 0． 357 1
液。精密量取衍生化的对照品溶液与供试品溶液各 20 μL，注入 稳定性良好。
高 效 液 相 色 谱 仪 ，记 录 色 谱 图 。按 内 标 法 以 峰 面 积 计 算 ，即 得 。精
加样回收试验： 取批号为 20100101 的供试品，精密加入处方
密量取对照品溶液 100 μL，按上述方法衍生处理，进样。
是由健康人血浆经低温乙醇法分离提取后，再经病毒去除和灭活 （ 4 ∶ 1） ，梯度洗脱 ( 表 1 ) ； 进样量： 20 μL； 柱温： 38 ℃ ； 检测波长：
处理，最后冻干制成。冻干过程是一个复杂的相变过程，在冻结、 254 nm； 流速： 1． 0 mL / min。理论板数按盐酸精氨酸峰计算应不低
2013 年 9 月 20 日 第 22 卷第 18 期 Vol． 22，No． 18，September 20，2013
China Pharmaceuticals
·药物鉴定· Drug Identification
高效液相色谱法测定人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸含量
陈通威，高红琴，崔素梅，张惠兰，王宗刚
B( % )
200104） 、盐酸精氨酸对照品（ 批号为 624 － 200104） 、天门冬氨酸
0
100． 0
0
20． 00
100． 0
0
对 照 品 （ 批 号 为 624 － 200104） 均 来 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定
7． 00
87． 0
13． 0
25． 00
所； 乙腈，三乙胺，正己烷，异硫氰酸苯酯，磺基水杨酸，盐酸，醋
图 1 高效液相色谱图
精密度试验： 精密量取对照品溶液 100 μL，按上述方法衍生
10 min，取上清液，用 0． 1 mol / L 盐酸溶液稀释 5 倍，得供试品溶液。 处理，连续进样 5 次。分别测得甘氨酸、盐酸精氨酸峰面积与内标
2．3 测定法
峰面积的比值（ f） 。结果甘氨酸 RSD 为 1． 37% ，盐酸精氨酸 RSD
（ 山西康宝生物制品股份有限公司，山西 长治 046011）
摘要： 目的 建立人纤维蛋白原中甘氨酸、盐酸精氨酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，柱外衍生，在色谱柱内层析，以紫外
检测器在 254 nm 波长处检测，用峰面积以内标法计算含量。结果 在该试验条件下，甘氨酸、盐酸精氨酸与内标物质峰的分离度符合要
2． 1
0311 － 85212004 － 8034（ 电子信箱） shuhua08@ sina． com。
注: 检品名称为 H 牌清宁软胶囊。
参考文献：
3 讨论 食 品 的 国 家 标 准 是 针 对 某 一 类 产 品 而 制 定 的 。如 GB /
T5009． 37 － 2003 适用于食用植物油卫生指标的分析，但含磷脂 / 卵磷脂的保健食品引用该标准，会存在样品不溶解的情况。经改 进溶剂，可使引用标准更适用。GB / T5530 － 2005 适用于动、植物 油脂中酸价的测定，但对于配方中含有较多药材 2； R977． 6
文献标识码： A
文章编号： 1006 － 4931 (2013 )18 － 0063 － 02
人纤维蛋白原主要是作为凝血因子Ⅰ而直接参与凝血过程 ， [1] 为 0． 1 mol / L 醋 酸 钠 （ pH = 6． 5） － 乙 腈 （ 93 ∶ 7） ，B 为 乙 腈 － 水
1 200
1 200
比值（ f） 为纵坐标回归计算。甘氨酸回归方程为 Y = 3． 413 2 X －
800
800
0． 071 6，r2 = 0． 996 8； 盐 酸 精 氨 酸 回 归 方 程 为 Y = 0． 978 7 X －
400
400
0． 039 9，r2 = 0． 998 2。结果表明，甘氨酸在 0． 186 8 ～ 0． 809 4 g / L
分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各 100 μL，置离心 为 0． 88% ，表明仪器精密度良好。
管 中 ，依 次 各 加 0． 1 mol / L 盐 酸 溶 液 200 μL，内 标 溶 液 50 μL，
稳定性试验： 取批号为 20100101 的供试品 1 份，按供试品溶
0． 1 mol / L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液 50 μL，1 mol / L 三乙胺乙腈溶 液制备方法制样、衍生，室温下放置，分别在 0，2，4，8 h 时进样，
[ 1 ] GB / T5009． 37 － 2003，中华人民共和国国家标准·食用植物油卫生 标准的分析方法 [S]．
[ 2 ] GB / T5530 － 2005，中华人民共和国国家标准·动植物油脂酸值和酸 度的测定 [ S]．
[ 3 ] GB / T5009． 56 － 2003，中华人民共和国国家标准·糕点卫生标准的 分析方法 [ S]．
2003） 中的样品处理方法，先将油脂用石油醚提取，低温挥尽溶
通过上述考察，建议保健食品企业标准制定人员，应针对企
剂，再按 GB / T 5530 － 2003 规定的方法进行滴定，经试验，方法 业产品的自身情况，在引用国家标准时，对前处理予以特别、详细
简便、快速、可行。产品酸价测定结果见表 2。
的规定，使检测方法更适用，从而通过检测手段可以监测产品情
10． 00
85． 0
15． 0
酸钠，乙腈为色谱级，其余试剂为分析纯。1 mol / L 三乙胺乙腈溶 2．2 溶液制备
液，0． 1 mol / L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液，1． 5% 磺基水杨酸溶液，
分别称取甘氨酸、盐酸精氨酸对照品适量，精密称定，置同一量
0． 1 mol / L 盐 酸 溶 液 ； 样 品 ( 批 号 为 20100101，20100102， 瓶中，加 0． 1 mol / L 盐酸溶液制成每 1 mL 约含甘氨酸、盐酸精氨基
20100203，山西康宝生物制品股份有限公司） 。
酸 0． 6 mg 的溶液，得对照品溶液。称取内标物天门冬氨酸适量，精