细菌及细胞电镜观察样品制备方法
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM)是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像,因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而,由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性,透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂:固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛(glutaraldehyde)、乙酰化亚胺(acrolein)、纤维蛋白素(formaldehyde)等。
2.采取合适的固定时间和固定温度:固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下,固定时间为数小时至数天,温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度:样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜:通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织,而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核:利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种,机械法利用高速离心的作用将细胞核分离,而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水:样品在固定后需要进行脱水处理,以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等,脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透:在脱水后,样品需要在树脂中进行浸透,使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间,如数小时甚至数天。
3.树脂填充:浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充,并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法:样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
细菌及细胞电镜观察样品制备方法
细菌及细胞电镜观察样品制备方法
1) 取样:取大量样品离心(转速3000r~4000r),去除上清液,加入适当PH(7.2~7.4)的0.1 M PBS清洗三遍;清洗时菌体温柔悬浮。
2) 固定:2.5%戊二醛固定3h(此步时间非绝对,1~12h都可),用PBS清洗两遍,每遍10min。
再用纯水清洗两遍。
3) 梯度脱水:用乙醇的水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水,每步15min,之后在100%乙醇的水溶液中脱水15min×2 次;再将样品置于乙醇与叔丁醇1:1混合液中15min;最后置样品于叔丁醇中15min×2次。
(此步也能够尝试不做)4) 冷冻干燥:滴加处理好的样品于5*5 mm的盖玻片上,置-80度冰箱冷冻后放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。
5) 电镜观察:样品充分干燥后,进行扫描电镜观察。
2.5%戊二醛:
Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制:(0.1M的就是稀释2倍)取50mL定容100mL
---------------------
磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O) 2.6克
磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克
双蒸馏水加至500毫升
pH调至7.4
Step 2:
戊二醛固定液的配制:
---------------------
25% 戊二醛1ml
双蒸馏水4ml
0.2mol/L磷酸缓冲液5ml
戊二醛最终浓度 2.5%
pH值7.3-7.4。
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备可参考以下步骤:
1. 将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内,用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液。
2. 用无菌滤纸过滤菌悬液,并调整滤液中的细胞浓度为10^8-10^9个/毫升。
3. 取等量的上述菌悬液与等量的2%的磷钨酸钠水溶液混合,制成混合菌悬液。
4. 用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。
5. 经3-5分钟后,用滤纸吸去余水,待样品干燥后,置低倍光学显微镜下检查,挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。
细菌透射电镜样品制备的方法还有很多,具体步骤可能因细菌的种类和实验需求而有所不同。
透射电镜细胞样品制备流程
透射电镜细胞样品制备流程透射电镜细胞样品制备流程概述透射电镜(TEM)是一种常用于观察细胞结构和超微结构的高分辨率显微镜。
样品制备是进行TEM观察的关键步骤,正确的制备流程能够保证样品的质量和结构完整性。
流程步骤1.选择适合的细胞样品–根据研究目的选择不同类型的细胞样品,如培养细胞、动物细胞组织或植物细胞等。
–样品选择要考虑细胞生长状态、形态和结构的要求。
2.采集样品–从培养皿中取出细胞,或从动物或植物组织中切取适当大小的样品。
–注意避免样品受到污染或损坏。
3.固定样品–使用适当的固定剂,如戊二醛、冰醋酸或凝胶固定剂,对样品进行固定处理。
–固定剂的选择要根据样品类型和所需观察结构的特点。
4.去除固定剂–使用缓冲液或盐水洗涤样品,去除多余的固定剂。
–洗涤时间和次数需根据固定剂的种类和浓度进行调整。
5.后续处理–为了进一步增强对样品的对比度和分辨率,可以对样品进行染色处理。
–常用的染色剂包括重质金属盐、乙酸铀和铅染色剂等。
6.样品包埋–涂覆样品表面的浸渍剂,如环氧树脂或丙烯酸树脂。
–用于支撑样品的网格可以放置在浸渍剂中。
7.制备超薄切片–使用超薄切片机将包埋的样品切割成透明的超薄切片。
–切片的厚度通常控制在70-100纳米之间。
8.将切片转移到网格上–使用特殊工具将切片转移到电子显微镜用的网格上。
–要小心操作,避免切片受到损坏或污染。
9.干燥和稳定–将转移到网格上的切片进行脱水和干燥处理,以提高稳定性。
–常见的方法包括用醇溶液进行脱水,然后使用气体吹干。
10.开始透射电镜观察–将处理完的样品装入透射电镜,调整参数和放大倍数。
–进行细胞结构和超微结构的观察和拍摄。
结论透射电镜细胞样品制备是进行TEM观察的关键步骤。
通过选择合适的细胞样品、适当的固定、去固定剂和染色处理,以及正确的样品包埋和超薄切片制备,可以确保样品的质量和结构完整性。
准确无误的制备流程能够为细胞学研究提供可靠的数据支持。
注意事项1.样品的选择要根据研究目的和所需观察结构的特点进行。
透射电镜细胞样品制备流程
透射电镜细胞样品制备流程以透射电镜细胞样品制备流程为标题,我们来介绍一下这个过程。
透射电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)是一种高分辨率的显微镜,可以用来观察非常微小的细胞结构和内部细节。
为了获得高质量的透射电镜图像,样品的制备非常重要。
下面我们将详细介绍透射电镜细胞样品制备的流程。
第一步,收集细胞样品。
可以选择不同类型的细胞样品,如动物细胞、植物细胞或微生物细胞。
细胞样品可以从生物实验室中获得,也可以通过培养细胞来获取。
第二步,固定细胞样品。
固定是为了保持细胞在制备和观察过程中的形态和结构。
常用的固定剂有乙醛、戊二醛等。
将细胞样品与固定剂混合,使细胞膜和细胞器固定在原位,停止细胞内部的生化反应。
第三步,脱水样品。
将固定的细胞样品通过一系列浓度递增的乙醇溶液进行脱水处理。
脱水的目的是去除细胞内外的水分,使样品适合后续的浸渍和包埋。
第四步,浸渍和包埋样品。
将脱水后的细胞样品置于透明的有机溶剂中,如丙酮或环氧树脂。
浸渍的目的是使样品与嵌入剂之间充分接触,逐渐将有机溶剂替换为嵌入剂。
然后将样品转移到嵌入剂中,使细胞样品被完全包裹在固体嵌入剂中。
第五步,切片样品。
使用超薄切片机将包埋的细胞样品切成非常薄的切片,一般为50-100纳米。
切片的过程需要非常小心和精确,以确保切片的质量和一致性。
第六步,上膜样品。
将切好的细胞样品转移到透明的膜上,如碳膜或铜膜。
上膜的目的是增强样品的稳定性和导电性,以便在透射电镜中观察。
第七步,染色样品。
可以使用染色剂来增加样品的对比度和可见度。
常用的染色剂有重金属盐(如铋盐)和阴离子染料(如尼格罗红)。
染色的过程需要小心操作,以避免染料的过度使用或样品的损坏。
第八步,干燥样品。
将上膜和染色后的样品放置在通风设备中,使其自然干燥。
干燥后的样品可以储存在干燥剂中,以保持其稳定性和保存时间。
将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
通过透射电镜,我们可以获得高分辨率和高对比度的细胞图像,从而更好地研究细胞的结构和功能。
扫描电镜细胞样品制备步骤
扫描电镜细胞样品制备步骤嘿,咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈!
你想想看,细胞那么小的玩意儿,咱要想好好观察研究它们,可得下一番功夫呢!就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。
首先呢,得把细胞好好地收集起来。
这就好比去果园摘果子,得小心翼翼地把果子从树上摘下来,不能弄伤了它们。
咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来,可不能太粗鲁啦!
然后呢,就是给细胞洗个澡啦!把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉,让它们干干净净的。
这就像是咱自己洗澡一样,把身上的脏东西都洗掉,清清爽爽的。
接下来,就是固定啦!这可重要得很呢!就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲,让它们能保持住自己的形态,不会东倒西歪的。
不然等会儿咱观察的时候,它们都变形了,那可咋整呀!
再之后,就是脱水啦!把细胞里面多余的水分都去掉,就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。
这一步可得仔细着点儿,不能让细胞受损哦!
接着呢,是干燥啦!让细胞处在一个干燥舒适的环境里,这样它们才能好好地被我们观察呀!
再往下,就是镀膜啦!这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣,让它们在电镜下能更好地显现出来。
最后,就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦!哇塞,你能想象到吗,通过电镜看到细胞的那一刻,就好像打开了一个微观世界的大门,里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢!
你说这是不是很神奇呀?咱通过这一步步的操作,就能看到细胞的各种奇妙之处啦!所以呀,可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦,每一步都马虎不得呢!咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞,这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀!这可不是闹着玩的事儿呢!大家可得认真对待哟!。
扫描电镜的样品制备
扫描电镜的样品制备
扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)是一种高分辨率的显微镜,对于复杂的样品结构、微观形态和表面形貌的分析非常有用。
然而,要获得良好的扫描电镜显像效果,样品的制备至关重要。
下面将介绍几种常用的扫描电镜样品制备技术。
1. 金属喷涂法
金属喷涂法是扫描电镜样品制备的经典方法。
该方法使用金属喷涂仪将金属颗粒喷在样品表面,使其形成一层均匀、导电性良好的金属膜,以便在扫描电镜中观察样品的表面结构。
该方法适用于非导电样品,如细胞、生物组织、聚合物等。
2. 离子切割法
离子切割法利用离子切割机将样品切割成纤细的薄片,以便于在扫描电镜中观察。
这种方法适用于非常薄的样品,如材料薄片、芯片等。
它可以提供非常高分辨率的图像,并且可以通过纵向切割获得样品的三维结构。
3. 冷冻切片法
冷冻切片法是一种用于生物样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用超低温技术将样品冻结,并使用超薄刀片切割成极薄的切片,通常为50~200纳米。
这可以保留样品的水感性和原始形态,并使其在扫描电镜中观察更加清晰。
4. 化学蚀刻法
化学蚀刻法是用于金属样品的扫描电镜制备方法。
该方法使用酸或碱对样品表面进行蚀刻,以去除不需要观察的材料,形成清晰的样品结构。
该方法适用于金属薄膜、晶体和合金等金属材料。
总之,良好的扫描电镜样品制备是获得高品质扫描电镜图像的关键。
每种样品都有其独特的制备方法,为了获得最好的结果,在选择合适的制备方法时需要谨慎选择。
扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告
扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告实验目的:通过使用扫描电子显微镜(SEM),观察并比较不同生物样品的细胞结构和形态特征。
实验材料:-不同种类的生物样品(如植物叶片、昆虫翅膀、细菌培养物)-10%磷酸盐缓冲液(PBS)-2.5%葡萄糖溶液-电镜显微镜台-SEM样品支架-SEM扫描电镜实验步骤:1.收集各种生物样品,并用PBS润湿样品表面,以去除杂质。
2.将样品放置在SEM样品支架上,用细菌镊子小心地将样品固定在支架上。
3.将SEM样品支架放入SEM扫描电镜中,并调节扫描电镜的参数,如电子束的加速电压和信号放大倍数。
4.将SEM样品支架移动到扫描电镜中心位置,并确保样品表面与电子束的垂直距离适当。
5.打开电子束,在视野范围内找到有代表性的细胞区域,并通过调整焦距和扫描速度来获取清晰的图像。
6.在观察过程中,可以尝试不同的电子束参数,以获得最佳的样品成像效果。
7.观察并记录每个样品的细胞结构和形态特征,注意细胞的大小、形状和细胞器的位置等。
实验结果与讨论:通过SEM观察,我们可以清晰地看到植物叶片的气孔细胞和叶绿体的内部结构。
气孔细胞呈现出多边形的形状,并且表面布满微小的细管,这些细管是用于气体交换的通道。
叶绿体则呈现出椭圆形,并且具有叶绿素颗粒的特征,这些颗粒是光合作用中的关键结构。
昆虫翅膀的观察结果显示,翅膀表面有许多微小的鳞片组成,这些鳞片具有复杂的纹理和形状。
昆虫通过这些鳞片可以完成特定的功能,如飞行和保护。
SEM的使用使我们能够更加详细地观察到翅膀表面的微观结构。
细菌样品的观察结果显示,细菌呈现出不规则形状的胞体,表面光滑且有不规则的突起。
通过SEM的高放大倍数,可以看到细菌细胞壁的纹理和孔隙结构,这些结构可能与细菌的生长和代谢有关。
通过SEM观察不同生物样品的细胞结构和形态特征,可以增进我们对细胞生物学的理解。
SEM的高分辨率能力使我们能够观察到细胞的微观结构,从而对细胞的功能和相互作用有更深入的认识。
悬浮细胞扫描电镜的标本的制备
悬浮细胞扫描电镜的标本的制备
悬浮细胞扫描电镜的标本制备是一个关键的步骤,它需要精确
的操作和耐心。
首先,我们需要准备一个含有悬浮细胞的样品。
这
些悬浮细胞可以来自培养物中的细胞,或者从组织中分离出来。
接
下来,我们需要将这些悬浮细胞固定在一个适当的载玻片上。
固定
的方法通常包括用乙醛或氧化铂等化学物质进行固定,或者使用冷
冻固定技术。
固定后,样品需要进行脱水处理,通常使用乙醇浓度
逐渐升高的方法。
然后,样品需要被干燥,可以通过自然干燥或者
使用临界点干燥法。
接下来是金属涂覆,通常使用金属如金或铂进
行喷涂,以增加样品的导电性。
最后,样品可以被放入扫描电镜中
进行观察和成像。
在整个制备过程中,需要严格控制各个步骤的时
间和条件,以确保最终的标本能够展现出清晰的细胞结构和形态特征。
此外,在操作过程中需要注意安全,避免对人体和环境造成伤害。
总的来说,悬浮细胞扫描电镜的标本制备需要细致的操作和严
格的控制,以确保最终观察到的细胞结构和形态信息是准确可靠的。
细胞电镜步骤
细胞电镜步骤一、引言细胞电镜(electron microscopy)是一种利用电子束代替光束进行显微观察的技术。
相比传统的光学显微镜,细胞电镜具有更高的分辨率和放大倍率,能够观察到更细微的细胞结构,为细胞学研究提供了重要的工具。
本文将介绍细胞电镜的主要步骤。
二、样品制备1. 固定要观察细胞的内部结构,首先需要将细胞固定在样品上。
常用的固定剂包括戊二醛、冰醋酸、乙醛等。
固定剂可以杀死细胞并保持其形态和结构。
2. 切片将固定的细胞组织进行切片,常用的切片工具有超薄切片机、刮刀等。
切片的厚度通常在50-100纳米之间。
3. 上膜将切片转移到铜或金网膜上,以便在电镜中观察。
上膜时需要小心操作,避免切片的损坏。
三、脱水和浸渍1. 脱水为了观察细胞的内部结构,需要将样品中的水分逐渐去除。
通常会使用一系列浓度递增的乙醇溶液进行脱水处理。
2. 浸渍脱水后,为了使样品能够在电镜中导电,并增加样品的稳定性,需要进行浸渍处理。
常用的浸渍剂有丙酮、环氧树脂等。
四、显微观察1. 扫描电镜(SEM)扫描电镜主要用于观察样品表面的形态结构。
在扫描电镜中,电子束通过扫描样品表面,与样品反射的二次电子或反射电子相互作用,形成图像。
通过调整电子束的扫描方式和参数,可以获得不同放大倍率和清晰度的图像。
2. 透射电镜(TEM)透射电镜主要用于观察样品的内部结构。
在透射电镜中,电子束穿过样品,与样品内部的结构相互作用,形成投影图像。
通过调整电子束的聚焦和对比度,可以获得高分辨率的细胞内部结构图像。
五、图像处理和分析1. 图像获取使用电镜观察样品后,需要将观察到的图像记录下来。
可以使用相机或数字图像采集系统将图像转换为数字信号,保存在计算机中。
2. 图像处理对于采集到的图像,可以使用图像处理软件进行处理和增强。
常见的处理方法包括去噪、增加对比度、调整亮度等。
3. 图像分析通过对处理后的图像进行分析,可以获取细胞内部结构的定量信息。
常见的分析方法包括测量细胞器的大小、计算细胞器的分布密度等。
电镜样本制备原理
电镜样本制备原理
1.固定:将取下的组织块及时投入
2.5%戊二醛固定液中,以固定细胞的形态。
这一步非常重要,因为固定液可以迅速凝固组织中的蛋白质和核酸,从而保持细胞的原有结构和功能。
2.脱水:将固定好的组织块进行脱水处理,通常使用乙醇或丙酮进行脱水。
脱水可以使组织块变硬,以便于进行后续的包埋和切片操作。
3.包埋:将脱水后的组织块放入包埋剂中,经过加热等处理后,使包埋剂凝固,将组织块固定在其中。
包埋剂的硬度适中,可以确保切片时能够切出较薄的样品。
4.切片:使用超薄切片机将包埋的组织块切成薄片,通常厚度在40-50纳米之间。
切片的厚度和质量对于后续的观察和鉴定非常重要,因此需要非常精细的操作。
5.染色:将切好的薄片放在载玻片上,用染色液进行染色,以增强细胞的对比度和结构细节的可见度。
这一步是为了使细胞的结构更加清晰,以便于在电镜下观察。
6.电镜观察:将染色后的薄片放入电镜中观察,可以使用透射电镜或扫描电镜进行观察。
在电镜下,可以观察到细胞的超微结构和细节,如细胞膜、细胞器、细胞核等。
总的来说,电镜样本制备原理需要经过多个步骤,每个步骤都需要严格的操作和质量控制,以确保最终观察到的细胞结构和功能的准确性。
sem生物样品制备步骤
sem生物样品制备步骤
SEM(扫描电子显微镜)是一种高分辨率的显微镜,常用于观察生物样品的微观结构。
生物样品制备是SEM观察的关键步骤之一,以下是一般的生物样品制备步骤:
1. 固定样品,首先,生物样品需要被固定以保持其原始结构。
常用的固定剂包括乙醛、戊二醛或glutaraldehyde等。
固定样品的方法可以根据具体的样品类型而有所不同。
2. 脱水,固定后的样品需要被脱水以去除水分,通常使用酒精逐渐替代水分。
这个过程需要逐渐提高酒精浓度,最终将样品置于无水酒精中。
3. 干燥,脱水后的样品需要被干燥以去除残留的溶剂。
常用的干燥方法包括自然干燥、临界点干燥或者冻干等。
4. 样品制备,干燥后的样品需要被切割、切片或者表面处理以展示所需的结构。
这可能涉及到金属喷镀以增加导电性,或者使用特殊的切割技术。
以上是一般的SEM生物样品制备步骤,不同类型的生物样品可能需要特定的处理步骤。
在进行SEM观察之前,样品制备的质量对于最终观察结果至关重要。
希望这些信息能够帮助到你。
电镜样品制备
透射电镜细胞样品制备技术和观察方法(一)原理透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)是利用阴极发射的电子,通过阳极中央的微孔形成的电子束穿透样品获得样品的电子信号,经物镜、中间镜和投影镜等多级电子放大至数百至数千万倍,最后成像在荧光屏上便可即时观察,或是投射到照相底片感光片上作为永久记录。
由于标本必须置于高真空中进行电镜观察,所以电镜观察的生物标本必须特殊制备,不能含水,离体的生物标本要迅速加以固定,以防产生结构改变。
另外,电子的穿透力很弱,这就需要把样品制成50nm~100nm厚的超薄切片(一个细胞切成100~200片)。
为了使柔软的生物组织能够制成这样薄的切片,并使切片耐受高真空和电子轰击,所以在切片前要进行包埋。
超薄切片技术是透射电镜观察成功的关键。
超薄切片制作样品过程大体分为取材、固定、漂洗、脱水、渗透包埋与聚合、切片、染色等。
细胞超薄切片技术中如何把细胞完整无损地从培养瓶皿壁上包埋下来是最大的难题。
新的定型产品无菌聚苯乙烯塑料薄膜的使用解决了这个难题,把薄膜放在培养瓶皿中,让细胞直接长在塑料薄膜上,不仅细胞生长效果好,而且可与细胞一起包埋切片,省去了许多麻烦。
(二)超薄切片基本操作步骤试剂和器具准备:(1)0.2 mol/L PBSA液:磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)35.61g加双蒸水溶解至1000ml。
B液:磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.21g加双蒸水溶解至1000ml。
(2)2.5%戊二醛(C5H8O2)固定液:25%戊二醛10ml,0.2mol/L PBS 50ml,加双蒸水40ml。
(3)1%四氧化锇(OsO4)固定液1)2%储存液:取1g OsO4 安瓿泡酸48h,冲洗48h,双蒸水漂洗30mins。
干后用玻璃刀刻划1或2道痕,置入棕色磨口瓶,加双蒸水50ml,用力摇动使安瓿破碎。
静止48h OsO4溶解后备用。
细胞扫描电镜样品制备流程
细胞扫描电镜样品制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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透射电镜细胞样品制备流程
透射电镜细胞样品制备流程透射电镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM)是一种利用电子束穿透样品以获取高分辨率图像的仪器。
它是生物学、材料科学等领域研究中不可或缺的工具。
在细胞学研究中,使用透射电镜观察细胞样品的超高分辨率结构,可以帮助科学家深入了解细胞的组织结构和功能。
想要制备透射电镜的细胞样品,需要经过一系列的步骤和操作。
下面将详细介绍透射电镜细胞样品制备的流程。
1. 样品固定:首先,需要将待观察的细胞样品进行固定。
固定的目的是保持细胞的形态结构和细胞内部组织的稳定性。
常用的固定剂有戊二醛、醋酸乙酯和冰乙酸等。
固定剂的选择应根据细胞类型和实验目的来确定。
2. 组织切片:固定后的细胞样品需要进行切片。
切片可以通过机械切割或冷冻切割等方法进行。
切片时应注意样品的厚度,一般要求细胞切片的厚度在50-100纳米左右。
3. 样品染色:对于未染色的细胞样品,其对电子束的吸收能力较弱,因此需要对样品进行染色增强对比度。
常用的染色剂有重铀酸、铅酸和乙酸铀等。
染色剂的选择应根据样品的性质和实验要求来确定。
4. 薄膜制备:切片好的样品需要转移到透射电镜网格上进行观察。
通常,会使用薄膜来支撑样品,并使其保持平坦。
常用的薄膜材料有碳膜和聚合物膜等。
5. 网格制备:透射电镜网格是一种特殊的载体,用于固定细胞样品并放置在透射电镜中观察。
网格制备通常需要使用特殊的网格支架和胶水,将薄膜和网格固定在一起。
6. 清洗和干燥:制备好的细胞样品需要进行清洗和干燥处理。
清洗的目的是去除样品表面的杂质和残留物,以确保样品的纯净度。
干燥的目的是使样品完全干燥,以便在透射电镜中观察时不产生影响。
7. 观察和记录:制备好的细胞样品可以放入透射电镜中进行观察。
透射电镜通过透射电子束与样品相互作用,获取样品的高分辨率图像。
科学家可以根据观察到的图像来分析细胞的结构和功能,并进行记录和分析。
总结起来,透射电镜细胞样品的制备流程包括样品固定、组织切片、样品染色、薄膜制备、网格制备、清洗和干燥、观察和记录等步骤。
扫描电镜测试生物样品制备技术.
扫描电镜测试生物样品制备技术大多数生物样品都含有水分,而且比较柔软,因此,在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。
扫描电镜样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好,没有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。
一.样品的初步处理(一取材样品面积可为8mm×8mm,厚度可为5mm。
对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。
(二样品的清洗用扫描电镜观察的部位常常是样品的表面,即组织的游离面。
由于样品取自活体组织,其表面常有血液、组织液或粘液附着,这会遮盖样品的表面结构,影响观察。
因此,在样品固定之前,要将这些附着物清洗干净。
清洗的方法有以下几种:1.用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;2.用5%的苏打水清洗;3.用超声震荡或酶消化的方法进行处理。
例如清洗肠粘膜表面的粘液,可用下面的方法:清洗液配方:透明质酸酶300 (gα—糜蛋白酶 10 mg生理盐水 100 ml清洗液的pH为5.5~6。
清洗的方法是将样品浸泡在配好的清洗液中,边浸泡边震荡30分钟,最后用双蒸水洗3次。
无论用哪种清洗方法,注意在清洗时不要损伤样品。
(三固定固定样品的常用试剂为戊二醛及锇酸双固定。
由于样品体积较大,固定时间应适当延长。
也可用快速冷冻固定。
(四脱水样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。
二.样品的干燥扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。
无论是水或脱水溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污染样品,还会破坏样品的微细结构。
因此,样品在用电镜观察之前必须进行干燥。
干燥的方法有以下几种:(一空气干燥法空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。
这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。
生物样品的扫描电镜制样干燥方法
生物样品的扫描电镜制样干燥方法一、本文概述扫描电子显微镜(SEM)是一种广泛应用于生物学、医学、材料科学等领域的高分辨率显微成像技术。
在生物学研究中,SEM被用于观察和分析各种生物样品的超微结构,如细胞、组织、微生物等。
然而,生物样品的电镜制样过程复杂且精细,其中干燥环节尤为关键,因为不当的干燥方法可能导致样品结构变形、失真,甚至破坏。
因此,本文旨在探讨和总结生物样品扫描电镜制样过程中的干燥方法,包括各种方法的原理、优缺点以及应用注意事项,以期为提高生物样品SEM分析的准确性和可靠性提供参考和指导。
二、生物样品扫描电镜制样概述扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)是一种用于观察和研究材料表面微观形貌和组成元素分布的强大工具。
在生物学领域,SEM常被用于研究生物样品的微观结构和形态,如细胞、组织、微生物等。
然而,由于生物样品往往含有大量水分,且结构复杂、易变形,因此在SEM制样过程中,干燥方法的选择和应用至关重要。
生物样品的扫描电镜制样过程一般包括前处理、固定、脱水、干燥、镀金等步骤。
其中,干燥是制样过程中的关键步骤之一。
干燥不当可能导致样品变形、结构破坏、微生物活性丧失等问题,从而影响后续的观察和分析。
因此,选择适合的干燥方法对于保证生物样品SEM制样的质量至关重要。
目前,常见的生物样品干燥方法包括自然干燥、临界点干燥、冷冻干燥等。
自然干燥方法简单易行,但可能导致样品变形和微生物活性丧失;临界点干燥通过控制温度和压力,避免样品在干燥过程中发生收缩和变形,适用于一些对结构要求较高的样品;冷冻干燥则通过在低温下将样品中的水分升华,从而避免样品在干燥过程中发生变形和破坏,适用于一些对微生物活性要求较高的样品。
在实际操作中,应根据样品的性质和研究目的选择合适的干燥方法,并结合其他制样步骤,如固定、脱水、镀金等,以确保制样质量和后续观察的准确性。
随着技术的不断进步,新型的干燥方法和技术也在不断发展,为生物样品SEM制样提供了更多的选择和可能性。
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细菌样品冷冻干燥制样方法
1) 取样:取大量样品离心(转速3000r~4000r),去除上清液,加入适当PH(7.2~7.4)的0.1 M PBS清洗三遍;清洗时菌体温柔悬浮。
2) 固定:2.5%戊二醛固定3h(此步时间非绝对,1~12h都可),用PBS清洗两遍,每遍10min。
再用纯水清洗两遍。
3) 梯度脱水:用乙醇的水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水,每步15min,之后在100%乙醇的水溶液中脱水15min×2 次;再将样品置于乙醇和叔丁醇1:1混合液中15min;最后置样品于叔丁醇中15min×2次。
(此步也可以尝试不做)4) 冷冻干燥:滴加处理好的样品于5*5 mm的盖玻片上,置-80度冰箱冷冻后放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。
5) 电镜观察:样品充分干燥后,进行扫描电镜观察。
2.5%戊二醛:
Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制:(0.1M的就是稀释2倍)取50mL定容100mL
---------------------
磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O) 2.6克
磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克
双蒸馏水加至500毫升
pH调至7.4
Step 2:
戊二醛固定液的配制:
---------------------
25% 戊二醛1ml
双蒸馏水4ml
0.2mol/L磷酸缓冲液5ml
戊二醛最终浓度 2.5%
pH值7.3-7.4。