ELISA2-乙肝两对半 PPT课件
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酶联免疫吸附实验-乙肝两对半测定24页PPT
酶联免疫吸附实验-乙肝两对半测定
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上Байду номын сангаас途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上Байду номын сангаас途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
乙肝两对半的解读PPT课件
性传播(Sexually transmission) ：性滥交、同性恋和异性恋之间的亲 密性行为是重要的乙肝病毒传播途径，这种传播亦包括家庭夫妻间的传 播，夫妻之间的无防御措施的性行为传播率大概在14%左右，具体引人 而异。因乙肝病人的唾液中可以查到乙肝病毒，在接吻时有可能会由于 皮肤粘膜破损造成传染。因此在口腔有破损（如溃疡，咬伤，牙龈出血
可见大三阳和小三阳的区别主要在病毒复制活跃程度上，但并不表示“大三阳”一定比“小三阳”病 情严重，临床研究证实，有些小三阳患者更容易转化为肝癌。在治疗上，如果是乙肝患者且HBVDNA含 量高，大三阳和小三阳的区别不大，都要以抗病毒治疗为主，辅助抗炎保肝，抗纤维化治疗。 Visible big 3 this world and small 3 this world difference is mainly in the viral replication activity, but it doesn't mean the "big 3 this world" than "small 3 this world" the disease is severe, clinical studies have confirmed that some small 3 this world are more likely to be converted into liver cancer patients. In treatment, if is hepatitis b patients and hbvdn乙a肝co两nt对en半t h的ig解h,读the difference between big 3 this world and4 small 3 this world is not big, to give priority to with antiviral therapy, anti-inflammatory, protecting liver, auxiliary anti fibrosis treatment.
如何看懂乙肝两对半ppt课件
13
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ HBeAg-
乙肝
乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV
DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
·
活动期和静止期
14
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e
cap
3.5kb
·
3
双股DNA 核心
DNA多聚酶
有逆转录酶活性 有合成DNA功能
脂质双层
外
PreS1
衣
壳 外壳 PreS2
蛋白
HBsAg
HBcAg
内衣壳 HBeAg
乙肝病毒Dane颗粒结构模式图
·
4
·
5
乙肝五项（二对半）及HBV DNA的临床意义
方法：ELISA或RIA检测。
HBsAg：最先出现，急性肝炎，慢性肝炎和携带者。 1-4个月消失，持续6个月为慢性肝炎。
RNA pregenome
修补正链
宿主RNA聚合酶
Ccc DNA
·
15
·
16
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs1
HBsAg ：组装病毒外模的主蛋白（外膜蛋白包括主蛋白、中蛋
白、大蛋白）。外模蛋白与其相应的抗体形成复合物与一些肝外 疾病有关。
HBsAg: 只具有抗原性，无传染性
急性自限性HBV感染：感染HBV后1－2周（11－12周）HBsAg 出现，持续1－6周（20周）。
代偿性肝硬化
病毒感染
慢性肝炎
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ HBeAg-
乙肝
乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV
DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
·
活动期和静止期
14
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e
cap
3.5kb
·
3
双股DNA 核心
DNA多聚酶
有逆转录酶活性 有合成DNA功能
脂质双层
外
PreS1
衣
壳 外壳 PreS2
蛋白
HBsAg
HBcAg
内衣壳 HBeAg
乙肝病毒Dane颗粒结构模式图
·
4
·
5
乙肝五项（二对半）及HBV DNA的临床意义
方法：ELISA或RIA检测。
HBsAg：最先出现，急性肝炎，慢性肝炎和携带者。 1-4个月消失，持续6个月为慢性肝炎。
RNA pregenome
修补正链
宿主RNA聚合酶
Ccc DNA
·
15
·
16
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs1
HBsAg ：组装病毒外模的主蛋白（外膜蛋白包括主蛋白、中蛋
白、大蛋白）。外模蛋白与其相应的抗体形成复合物与一些肝外 疾病有关。
HBsAg: 只具有抗原性，无传染性
急性自限性HBV感染：感染HBV后1－2周（11－12周）HBsAg 出现，持续1－6周（20周）。
代偿性肝硬化
病毒感染
慢性肝炎
ELISA II研究PPT教学课件
p=0.002
80% 67%
60% 47%
40%
20%
0% Initial TFG 3 at angiography
Dual therapy
Triple
• The secondary endpoint of initial TIMI grade 3 flow at angiography was higher in the triple therapy group (47% vs 67%)
Hours
Median time to angiography
40
30
30
26
20
10
0 Median time to angiography
Dual therapy
Triple therapy
www. C2l0in2ic1a/0l t1r/
• In the dual therapy group, median time to angiography was 26 hours. In the triple therapy group, median time to angiography was 30 hrs.
Secondary Endpoint: Initial TIMI flow grade of the culprit artery
www. C2l0in2ic1a/0l t1r/
2 Presented at ESC 2005
ELISA II Trial: Baseline Characteristics
ELISA II Trial
ELISA II Trial
Presented at The European Society of Cardiology
80% 67%
60% 47%
40%
20%
0% Initial TFG 3 at angiography
Dual therapy
Triple
• The secondary endpoint of initial TIMI grade 3 flow at angiography was higher in the triple therapy group (47% vs 67%)
Hours
Median time to angiography
40
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30
26
20
10
0 Median time to angiography
Dual therapy
Triple therapy
www. C2l0in2ic1a/0l t1r/
• In the dual therapy group, median time to angiography was 26 hours. In the triple therapy group, median time to angiography was 30 hrs.
Secondary Endpoint: Initial TIMI flow grade of the culprit artery
www. C2l0in2ic1a/0l t1r/
2 Presented at ESC 2005
ELISA II Trial: Baseline Characteristics
ELISA II Trial
ELISA II Trial
Presented at The European Society of Cardiology
乙肝两对半检验报告解读教学讲义PPT
个人卫生
保持良好的个人卫生习惯，勤洗手、避免与他人共用餐具等物品 ，以降低病毒传播风险。
防护措施
在公共场所、医院等地方，应采取必要的防护措施，如佩戴口罩、 保持社交距离等，以降低感染风险。
避免接触血液和体液
避免直接接触乙肝患者的血液和体液，尤其是皮肤有破损时更应注 意防护。
THANKS
感谢观看
判断传染性
HBeAg阳性表示病毒正在复制， 并且具有传染性。若HBeAg阴性 ，则表示病毒复制相对较低，传 染性较弱。
评估治疗效果
监测抗病毒治疗的效果
在接受抗病毒治疗后，患者需要定期 进行乙肝两对半检验，以监测治疗效 果。若治疗后HBsAg、HBeAg等指 标逐渐降低，则表明治疗有效。
指导后续治疗方案
CHAPTER
04
乙肝两对半检验报告的注意事 项
报告的时效性
01
乙肝两对半检验报告的有效期通 常为1-2个月，超过这个时间，报 告的结果可能不再准确反映受检 者的乙肝病毒感染状态。
02
如果在报告有效期内，受检者出 现乙肝病毒感染症状或接触过乙 肝病毒携带者，建议重新进行乙 肝两对半检验。
报告的准确性
选择正规的医疗机构进行乙肝两对半 检验，以确保检验结果的准确性。
在进行乙肝两对半检验前，应避免饮 酒、过度疲劳或服用可能影响肝脏功 能的药物，以免影响检验结果。
报告的隐私保护
乙肝两对半检验报告涉及个人隐私，应妥善保管，避免泄露 个人信息。
如发现报告结果异常，应及时咨询专业医生，并遵循医生的 建议进行治疗和复查，以免延误病情。
乙肝两对半检验报告解 读教学讲义
CONTENTS
目录
• 乙肝两对半检验报告概述 • 乙肝两对半检验报告解读 • 乙肝两对半检验报告的临床意义 • 乙肝两对半检验报告的注意事项 • 乙肝两对半检验报告的后续处理建议
乙肝两对半的解读课件
乙肝两对半中某项指标阳性
总结词
可能存在乙肝病毒感染或疫苗接种史
详细描述
注意事项
需要进一步检查肝功能和乙肝病毒 DNA，以确定是否需要治疗。同时， 需要定期复查乙肝两对半，以监测病 情变化。
乙肝两对半中某项指标阳性表示受检 者体内可能存在乙肝病毒感染或曾经 接种过乙肝疫苗。
04 乙肝两对半与疾病状态的关系
这五项指标的变化可以反映乙型肝炎病 毒在体内的感染状态和免疫状况，对于 诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
HBsAg阳性表示病毒在体内复制活跃， 具有传染性；HBsAb阳性表示机体已产 生免疫力，对病毒有一定的抵抗力。
乙肝两对半异常的疾病状态
HBsAg和HBcAb阳性
HBsAg和HBeAg阳性
表示病毒在体内复制活跃，具有传染性， 可能存在慢性肝炎或肝硬化。
表示病毒在体内大量复制，传染性强，可 能存在慢性肝炎或肝硬化。
HBsAb和HBcAb阳性
HBeAb和HBcAb阳性
表示机体已产生免疫力，对病毒有一定的 抵抗力，但病毒仍在体内复制，可能存在 慢性肝炎或肝硬化。
表示病毒复制减弱，传染性降低，但机体 仍存在免疫应答，可能存在慢性肝炎或肝 硬化。
乙肝两对半正常与异常的疾病状态比较
肝脏有损害的药物。
谢谢
THANKS
乙肝两对半的检测意义
01
判断是否感染HBV
通过检测HBsAg和HBcAb，可以确定个体是否感染了HBV。HBsAg阳
性表示正在感染HBV，而HBcAb阳性则表示曾经感染过HBV。
02 03
评估病情
HBeAg和HBeAb的检测可以用来评估病情的严重程度。HBeAg阳性表 示病毒复制活跃，传染性强，而HBeAb阳性则表示病毒复制受到抑制 ，传染性降低。
ELISA检测乙肝抗体HBsAbPPT课件
传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原 就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法 。
双抗体夹心法
酶标抗体
血清样品 或参比品
底物
特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体； 标本中的抗原与固相载体上的抗体结合成固相抗原复合物； 加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合， 酶量与标本中受检物质的量成正相关；
+
+
急性感染趋向恢复（小三阳
+ຫໍສະໝຸດ ++
+
-
-
+
-
+
既往感染恢复期
-
既往感染恢复期
+
既往感染或“窗口期”
-
既往感染或接种过疫苗
放射免疫技术
免疫荧光技术
酶免疫技术
酶免疫技术
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 可用酶标测定
仪测定光密度（OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到
ng-pg/ml水平。
Y
酶
酶
DH2 + H2O2
D + 2H2O
无色
有色
酶具有高效催化性：可以加快化学反应的速度 ；在反应前后， 没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用。
ELISA检测乙肝抗体
第三小组
肝表面抗体ELISA检测
➢ 实验目的
1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光素、酶、或者放射性核素等标记抗体或 抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
标记物
Y
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放色性核素
(精选课件)ELISA2-乙肝两对半PPT幻灯片
(450nm处测定吸光度)。
.
结果判断及解释
COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05 按0.05计算）
阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测）
15
.
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性
12
.
e抗原检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性
对照和空白对照（不加样品）； 4. 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 5. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
13
6. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留 时间10-15s，并注满反应微孔；
.
7. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)；
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
8. 终止：加终止液50ul；
9. 判读：终止反应后10min内完成。
14
处测定吸光度)。 8
.
结果判断及解释
COV=2.1×OD阴性对照 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10， OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04（双波长检测）
9
.
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔加50ul，同时设阳性对照、阴
实验ELISA法测定乙肝 PPT
将抗原或抗体结合于某种固相载体的表面并保持免疫活性再以标本中的待检抗体或抗原与之结合然后使酶标抗体与已形成的抗原抗体复合物结合分别洗去未结合的抗原与抗体最后加入酶反应的底物出现呈色反应该反应中的有色产物含量与待检抗体抗原的含量直接相关
实验七 ELISA法测定乙肝
：是指用可微量测定的标记物（放射性核素、荧光素、 酶等）对抗原或抗体进行标记，并在标记免疫物质反 应结合后，测定结合物中的标记物来反映抗原-抗体反 应的检测技术。
目前最常用的是酶标记免疫技术、荧光标记免疫技 术、放射性核素标记技术。这类免疫标记技术的应用 极大程度地提高了抗原-抗体反应的检测敏感性。
酶标记免疫技术
• 以酶作为标记物，通过显色反应指示抗原-抗体反 应的标记技术称为酶免疫技术。
• 可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定技术两 大类。目前应用最广的为酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）,是 免疫测定技术的代表。
试剂盒组成：
• 1.包被好的微孔反应板 • 2.酶结合物 • 3.阳性对照 • 4.阴性对照 • 5.洗涤液 • 6.显色剂A、B
测定步骤
• 1.每孔加入待测样本50μl，设阴性、阳性对照孔，每孔加入阴性 对照（或阳性对照）各一滴，并设空白对照1孔。
• 2.每孔加入酶结合物一滴（空白对照孔除外），充分混匀封板， 置37℃孵育30分钟。
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
测定原理：
采用单克隆抗-HBs（ HBs Ab）包被反应板， 加入待测标本，同时加入多克隆抗HBs-HRP （辣根过氧化物酶）,当标本中存在HBs Ag时， 该HBs Ag与包被抗-HBs结合并与抗HBs-HRP 结合形成抗-HBs- HBs Ag-抗HBs-HRP复合物， 加入显色TMB（四甲基联苯胺）底物产生显色 反应，反之则无显色反应。
实验七 ELISA法测定乙肝
：是指用可微量测定的标记物（放射性核素、荧光素、 酶等）对抗原或抗体进行标记，并在标记免疫物质反 应结合后，测定结合物中的标记物来反映抗原-抗体反 应的检测技术。
目前最常用的是酶标记免疫技术、荧光标记免疫技 术、放射性核素标记技术。这类免疫标记技术的应用 极大程度地提高了抗原-抗体反应的检测敏感性。
酶标记免疫技术
• 以酶作为标记物，通过显色反应指示抗原-抗体反 应的标记技术称为酶免疫技术。
• 可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定技术两 大类。目前应用最广的为酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）,是 免疫测定技术的代表。
试剂盒组成：
• 1.包被好的微孔反应板 • 2.酶结合物 • 3.阳性对照 • 4.阴性对照 • 5.洗涤液 • 6.显色剂A、B
测定步骤
• 1.每孔加入待测样本50μl，设阴性、阳性对照孔，每孔加入阴性 对照（或阳性对照）各一滴，并设空白对照1孔。
• 2.每孔加入酶结合物一滴（空白对照孔除外），充分混匀封板， 置37℃孵育30分钟。
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
测定原理：
采用单克隆抗-HBs（ HBs Ab）包被反应板， 加入待测标本，同时加入多克隆抗HBs-HRP （辣根过氧化物酶）,当标本中存在HBs Ag时， 该HBs Ag与包被抗-HBs结合并与抗HBs-HRP 结合形成抗-HBs- HBs Ag-抗HBs-HRP复合物， 加入显色TMB（四甲基联苯胺）底物产生显色 反应，反之则无显色反应。
乙肝两对半PPT课件
Dane’s 颗粒 小球形颗粒 管形颗粒
乙肝病毒（HBV）是一种DNA病毒，乙肝病毒对人的肝脏“情有独 衷”，在生物学上它是嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）家族中 的一员。这个家族中的病毒成员在哺乳动物和鸟类的身上也都有 发现，它们的结构、基因序列和复制策略都非常相似，但是它们 之间却不会互相交叉。
这个家族中的病毒成员除了对具体的器官具有特异性，它们对寄 主也同样有“种族要求”，比如HBV就只对人和猩猩有易感性。 乙型肝炎病毒（HBV）为专一的嗜肝病毒，HBV感染者血清经电 镜检查有3种病毒颗粒：①Dane颗粒（HBV颗粒），外壳蛋白为 HBsAg，核心含有HBV-DNA及HBVDNAp（DNA-多聚酶）、HBcAg、 HBeAg；②小球形颗粒；③管形颗粒。
IgM-/IgG-抗HBc：抗HBcIgM－早期抗体（1周－6月），抗
HBV的抗原抗体系统HBeAg和抗HBe1
HBeAg： 是功能蛋白。是临床上表达病毒复制较实
用的血清标志物。 临床意义：在急性HBV感染HBeAg仅存在于感染 的早期，在病变极期之后HBeAg消失，持续存在者 预示趋向慢性。
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ 乙肝
HBeAg乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
活动期和静止期
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e cap
3.5kb
RNA pregenome
研究Dane颗粒DNA结构发现，DNA分子含有约3，200个核苷酸。 它包括两个链；一个长度固定的负链和另一长度不定的正链。由 于DNA生物合成是在多聚酶作用DNA引物生长末端3′－OH与加入 的脱氧核苷酸的5'-磷酸基形成磷酸二脂键完成的，因此，链的增 生按5'-3'顺序进行，而且加到链上的每种脱氧核苷酸是按模板 DNA的碱基配对互补规律进行，长链在1,800或1,818核苷酸附近 有一个制品。
乙肝病毒（HBV）是一种DNA病毒，乙肝病毒对人的肝脏“情有独 衷”，在生物学上它是嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）家族中 的一员。这个家族中的病毒成员在哺乳动物和鸟类的身上也都有 发现，它们的结构、基因序列和复制策略都非常相似，但是它们 之间却不会互相交叉。
这个家族中的病毒成员除了对具体的器官具有特异性，它们对寄 主也同样有“种族要求”，比如HBV就只对人和猩猩有易感性。 乙型肝炎病毒（HBV）为专一的嗜肝病毒，HBV感染者血清经电 镜检查有3种病毒颗粒：①Dane颗粒（HBV颗粒），外壳蛋白为 HBsAg，核心含有HBV-DNA及HBVDNAp（DNA-多聚酶）、HBcAg、 HBeAg；②小球形颗粒；③管形颗粒。
IgM-/IgG-抗HBc：抗HBcIgM－早期抗体（1周－6月），抗
HBV的抗原抗体系统HBeAg和抗HBe1
HBeAg： 是功能蛋白。是临床上表达病毒复制较实
用的血清标志物。 临床意义：在急性HBV感染HBeAg仅存在于感染 的早期，在病变极期之后HBeAg消失，持续存在者 预示趋向慢性。
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ 乙肝
HBeAg乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
活动期和静止期
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e cap
3.5kb
RNA pregenome
研究Dane颗粒DNA结构发现，DNA分子含有约3，200个核苷酸。 它包括两个链；一个长度固定的负链和另一长度不定的正链。由 于DNA生物合成是在多聚酶作用DNA引物生长末端3′－OH与加入 的脱氧核苷酸的5'-磷酸基形成磷酸二脂键完成的，因此，链的增 生按5'-3'顺序进行，而且加到链上的每种脱氧核苷酸是按模板 DNA的碱基配对互补规律进行，长链在1,800或1,818核苷酸附近 有一个制品。
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处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗原检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
乙肝两对半的检测
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法
竞争抑制法 竞争抑制法
7.洗液如有结晶形成建议放置37℃充分溶解， 再稀释；
8.洗板：(洗板机) 1)每次使用前、后用蒸馏水或去离子水冲洗，
以防止管路堵塞和腐蚀； 2)加液量不能过多溢出，但又能充满整个反应
微板(350ul); 3)一般洗板次数不应少于5次； 4)最好采用有底部冲洗和两点冲洗的程序。
【器材】
BIORAD680型自动化酶免分析仪、 BIORAD全自动酶标洗板机、微 量加样器、吸头等
【试剂】
HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒
【标本】
待测血清
【操作步骤】
表面抗原检测(夹心法)
性（样品作1：30稀释） 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A≥1.0 ，阳性对照A≤0.5 ，否则 实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
c抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照
75ul/孔，轻轻振荡混匀； 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应60min; 5. 加酶结合物： 每孔加入50ul/孔
7. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 8. 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 9. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液
B50ul，混匀，贴上封膜，37℃反应 30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A ≥1。0 ，阳性对照A ≤0.50 ， 否则实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
【注意事项】
1.不同品种及批号试剂组份请勿混用； 2.试剂从2-8℃条件下取出，先在室温平衡1h； 3.最好用微量移液器加各种组份； 4.每次手工加样，应更换吸头； 5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡； 6..封板膜不能重复使用；
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗原检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
乙肝两对半的检测
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法
竞争抑制法 竞争抑制法
7.洗液如有结晶形成建议放置37℃充分溶解， 再稀释；
8.洗板：(洗板机) 1)每次使用前、后用蒸馏水或去离子水冲洗，
以防止管路堵塞和腐蚀； 2)加液量不能过多溢出，但又能充满整个反应
微板(350ul); 3)一般洗板次数不应少于5次； 4)最好采用有底部冲洗和两点冲洗的程序。
【器材】
BIORAD680型自动化酶免分析仪、 BIORAD全自动酶标洗板机、微 量加样器、吸头等
【试剂】
HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒
【标本】
待测血清
【操作步骤】
表面抗原检测(夹心法)
性（样品作1：30稀释） 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A≥1.0 ，阳性对照A≤0.5 ，否则 实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
c抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照
75ul/孔，轻轻振荡混匀； 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应60min; 5. 加酶结合物： 每孔加入50ul/孔
7. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 8. 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 9. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液
B50ul，混匀，贴上封膜，37℃反应 30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
处测定吸光度)
结果判断： COV=0.5×N
阴性对照A ≥1。0 ，阳性对照A ≤0.50 ， 否则实验无效。 S≤COV 阳性 S＞COV 阴性
【注意事项】
1.不同品种及批号试剂组份请勿混用； 2.试剂从2-8℃条件下取出，先在室温平衡1h； 3.最好用微量移液器加各种组份； 4.每次手工加样，应更换吸头； 5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡； 6..封板膜不能重复使用；
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时