霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项1. 在进行霉菌和酵母菌计数时，确保实验室环境干净整洁，避免外部细菌的污染。
2. 使用适当的培养基进行霉菌和酵母菌计数，以确保得到准确的结果。
3. 对于悬浮在液体中的霉菌和酵母菌，必须充分混合样品以保证样品的均匀性。
4. 采用适当的离心机参数对悬浮在液体中的霉菌和酵母菌进行沉淀，以便于后续的计数和分析。
5. 在进行霉菌和酵母菌计数时，需要对悬液进行适当的稀释以避免高浓度下产生过多的交叉效应。
6. 霉菌和酵母菌计数前要进行质量控制，确保培养基和其他实验条件符合标准。
7. 在进行霉菌和酵母菌计数时，要遵循标准的微生物计数方法和技术，如平板计数法或膜过滤法等。
8. 经常进行实验室设备的维护和保养，确保设备的准确性和可靠性。
9. 实验人员需要接受相关的培训和教育，熟悉霉菌和酵母菌计数的方法和技术，以确保实验的准确性。
10. 实验室中应有标准操作程序（SOP）来规范霉菌和酵母菌计数的步骤，确保每个实验的一致性和准确性。
11. 霉菌和酵母菌计数应该在合适的温度和湿度条件下进行，以模拟真实环境中的生长条件。
12. 在进行霉菌和酵母菌计数前，对样品进行适当的处理和制备，以确保样品的完整性和可测性。
13. 霉菌和酵母菌计数要注意避免阳光直射，避免对微生物产生影响。
14. 在进行霉菌和酵母菌计数时，及时记录实验数据并进行数据分析，以便对结果进行验证和解释。
15. 实验过程中要小心操作，避免对实验人员和环境造成交叉污染。
16. 采用适当的培养基和生长条件来促进霉菌和酵母菌的生长，以便进行可靠的计数。
17. 霉菌和酵母菌计数时，注意样品的来源和保存条件，避免因为样品质量问题造成误差。
18. 在霉菌和酵母菌计数前进行适当的预处理，如破碎细胞壁、杀菌等，以确保样品中微生物的完整性。
19. 实验室中应建立完善的实验记录和档案，便于追溯实验过程和结果。
20. 实验室应遵循相关的卫生和安全标准，确保实验操作对实验人员和环境无害。
化妆品霉菌和酵母菌数测定的定义
化妆品霉菌和酵母菌数测定的定义化妆品霉菌和酵母菌数测定的定义化妆品霉菌和酵母菌数测定是一种用于检测化妆品中霉菌和酵母菌数量的方法。
这种检测方法是为了确保化妆品的安全性和稳定性而开发出来的，因为霉菌和酵母菌在化妆品中生长繁殖会导致产品变质、腐败、产生异味等问题，同时也会对人体健康造成危害。
一、化妆品霉菌和酵母菌数测定的原理化妆品霉菌和酵母菌数测定是基于微生物学原理开发出来的。
该检测方法通过将样品制备成适当稀释度后，采用平板计数法将其接种到含有适当培养基的平板上，然后在适宜温度下进行培养，在一定时间内观察并统计所形成的微生物典型形态，最终得出样品中霉菌和酵母菌数量。
二、化妆品霉菌和酵母菌数测定的步骤1.准备样品：将化妆品样品取出适量，进行均匀搅拌，然后按照一定比例进行稀释。
2.制备培养基：根据需要检测的霉菌和酵母菌种类，选择适当的培养基进行制备。
3.接种平板：将制备好的样品分别接种到含有适当培养基的平板上，并在适宜温度下进行培养。
4.观察结果：在一定时间内观察平板上所形成的微生物典型形态，并统计所形成的霉菌和酵母菌数量。
5.计算结果：根据所统计出来的霉菌和酵母菌数量，计算出每克或每毫升中微生物数量。
三、化妆品霉菌和酵母菌数测定的注意事项1.样品应该在尽可能短的时间内进行检测，避免在环境中长时间存放而导致结果不准确。
2.样品制备过程中要保证无菌操作，避免外部微生物污染导致结果失真。
3.选择合适的培养基和温度条件进行培养是保证检测结果准确性的关键因素，应该根据不同的样品类型和需求进行选择。
4.检测结果应该与国家标准或行业标准进行比对，以确保检测结果的可靠性和准确性。
四、化妆品霉菌和酵母菌数测定的意义化妆品霉菌和酵母菌数测定是保证化妆品安全性和稳定性的重要手段。
通过对化妆品中霉菌和酵母菌数量的检测，可以及时发现并处理存在的问题，保证产品质量。
同时，这种检测方法也为消费者提供了更加安全、健康、优质的化妆品选择。
细菌、霉菌及酵母菌计数操作规程
细菌、霉菌及酵母菌计数操作规程1. 目的本规程旨在为微生物计数提供一个标准化方法。
2. 适用范围微生物实验室3. 责任者QC主管生测员4. 安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染。
5. 规程a．平皿菌落计数法：取供试液各1ml，加入90mm的平皿中，每个稀释度各2个平皿。
每个平皿加15-20ml已融化并冷至45℃的培养基（细菌用营养琼脂培养基，霉菌和酵母菌用玫瑰红钠琼脂培养基），快速摇匀，待凝后，倒置进行培养。
同时各做一个空白对照。
b．薄膜过滤法：取相当于1mL供试品的供试液，加至适量的稀释级中，混匀，用pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液冲洗滤膜，冲洗时应注意保持供试品的溶剂及冲洗液覆盖整个滤膜表面。
冲洗量不宜过大，每张滤膜每次冲洗量约为100mL，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基上。
同时做一个空白对照。
c．培养：细菌30-35℃培养3天，计菌落数；霉菌、酵母菌25-28℃培养5天，计菌落数；空白对照应无菌生长。
必要时延长培养时间为7天6．结果判断细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu，霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1mL供试品中所含的菌数。
7. 附表及附录附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告8. 制定依据参照《中华人民共和国药典》2010版第二部细菌、霉菌及酵母菌计数（附录XI J）微生物限度标准，和GB/T14233.2医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分生物学试验方法。
附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告。
酵母菌计数
酵母菌计数简介酵母菌是一种单细胞真核生物，它们在酿酒、发酵和食品加工等过程中起着重要的作用。
为了控制和监测这些过程，我们需要对酵母菌的数量进行准确计数。
本文将介绍几种常用的酵母菌计数方法，并提供一些实用技巧和注意事项。
方法一：显微镜计数法显微镜计数法是最常用且准确的酵母菌计数方法之一。
具体步骤如下：1.取一定数量的酵母菌样品，通常采用培养液或悬浮液。
2.在显微镜下观察样品，并设定合适的倍数。
通常使用40倍或100倍的镜头。
3.使用显微镜的目镜网格或计数室，在一个区域内计数酵母菌的数量。
4.重复以上步骤，直到计数了足够多的区域。
5.将计数得到的酵母菌数量求平均，乘以相应的倍数，得到样品中的总酵母菌数量。
需要注意的是，在进行显微镜计数时，要保持显微镜的透明度，以便更清楚地观察和计数酵母菌。
此外，在计数过程中，应避免重复计数和漏计。
方法二：涂布法涂布法是一种简单快捷的酵母菌计数方法，适用于大批量的样品。
具体步骤如下：1.准备培养基。
选择适合酵母菌生长的培养基，可以是液体培养基或固体培养基。
固体培养基通常是琼脂糖培养基。
2.取一定数量的酵母菌样品，将其均匀地涂布在培养基上。
3.使用细菌铲或棉签，将酵母菌样品均匀涂布在培养基表面。
4.将涂布好的培养基放置在适当的条件下，如温度、湿度等，并进行培养。
5.在适当的培养时间后，观察涂布培养基上酵母菌的生长情况，并计算酵母菌的数量。
涂布法的优点是操作简单、快捷，适用于大样本量的计数。
但由于酵母菌的生长情况可能受到很多因素的影响，因此在进行计数时需要注意控制这些影响因素，如温度、湿度等。
方法三：电子计数法电子计数法是一种利用电子计数器对酵母菌进行计数的方法。
具体步骤如下：1.准备电子计数器。
选择适合的电子计数器，并与适当的软件相结合，以便更准确地进行计数。
2.取一定数量的酵母菌样品，并将其放置在电子计数器中。
3.打开电子计数器，开始对酵母菌样品进行计数。
4.计数完成后，软件会自动计算和显示酵母菌的数量。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液得制备与使用(以白色念珠菌为示例)白色念珠菌(0)代↓传代培养↓实验菌液得制备:沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基,培养温度20～２5℃,培养时间2~3天↓计数培养基适用性检查:胰酪大豆胨琼脂培养基,培养温度３0～3５℃,培养时间不超过5天,接种量不大于10０cｆu↓计数方法适用性试验:胰酪大豆胨琼脂培养基(ＭPＮ法不适用),培养温度３０～３5℃,培养时间不超过５天,接种量不大于10０cfu 注:当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌与酵母菌总数时,应进行培养基适用性检查,检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.１菌种试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
1。
2菌液制备(按表1规定程序培养各试验菌株)取白色念珠菌得新鲜培养物↓用pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得菌悬液取黑曲霉得新鲜培养物↓加入3～５ｍｌ含0.０５%聚山梨酯80得pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱↓采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0。
05％聚山梨酯80得pＨ7.０无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0。
９%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在２~8℃,可在24小时内使用、稳定得黑曲霉孢子悬液可保存在2~８℃,在验证过得贮存期内使用、1。
３阴性对照为确认试验条件就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查、2、培养基适用性检查按表1规定,接种不大于100cｆu得菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表１规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0。
霉菌和酵母菌计数
— 1—
• 样品的制备
检
1.固体和半固体样品的制备：
测
称取25 g样品,加人225 mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),
方
充分振摇,或用拍击式均质器拍打1 min-2min，制成1 : 10的样品匀液。
法
— 1—
• 样品的制备
检
2.液体样品的制备：
测
以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无茵稀释液(蒸馏水或生理盐水
方
或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)
法
或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min-2 min,制成1-
10的样品匀液。
— 1—
• 接种及培养
检
1.系列稀释：
测
取1 mL 1: 10样品匀液注人含有9mL无菌稀
25ml
1ml
方
释液的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹
告
和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌
落蔓延。
— 1—
• 结果报告
① 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值,
计
再将平均值乘以相应稀释倍数。
数 报
② 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU-
告
150 CFU之间,则按照GB 4789.2的相应规定进行
计算。
③若所有平板上菌落数均大于150 CFU,则对稀释
方 法
倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品
匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释
液加人2个无菌平皿作空白对照。及时将20 mL-25
mL冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼
脂(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
细菌、霉菌与酵母菌计数方法,大肠杆菌检测
1、称取供试品10g，置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用超声仪器使其充分混匀，作为供试液。
2、取均匀供试液，进一步稀释成1：10、1：102、1：103等适宜的稀释级。
分别取供试液和连续三级稀释的供试液各1ml，置平皿中。
每稀释级和阴性对照各作3个平皿，3、灭菌后的培养基45~50℃水浴加热，待其融化后，倾倒约15ml于已加入供试液的平皿中，混匀，待凝固后，倒置培养。
4、倒置培养箱中培养48小时，分别再24小时及48小时点计菌落数，一般以48小时菌落数为准。
菌数报告规则细菌选取平均菌落数再30~300之间的稀释级，霉菌选取平均菌落数在30~100之间的稀释级作为报告均属计算的依据。
如有一个稀释级别在30~300（30~100）之间时，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告；如果同时有2各稀释级在30~300（30~100）之间时，按下式计算两级比值。
比值=高稀释级的平均菌落数稀释倍数低稀释级的平均菌落数稀释倍数当比值≤2时，以两稀释级的均值报告，当比值＞2时，以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有3各稀释级的平均菌落数均在30~300之间时，以后2各稀释级计算级间比值报告；如各稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在300（100）以上，按最高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各细菌数每1g不得过1000cfu。
每1ml不得过100cfu。
霉菌和酵母菌数每1g或1ml不得过100cfu。
大肠xx每1g或1ml不得检出。
0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。
1、取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌50~100个作阳性对照，第三份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。
培养18~24小时.阴性对照应无菌生长。
2、取上述3份的培养物各0.2ml，分别接种至5mlMUG培养基管内培养，分别于5小时与24小时时，取未接种的MUG培养基管作本底对照，将各管置365nm-紫外光下观察。
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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细菌霉菌和酵母菌计数
细菌霉菌和酵母菌计数1 简述细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。
也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。
细菌、霉菌和酵母菌计数除另有外均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上常用的一种方法。
以琼脂平板上的细菌、霉菌和酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。
该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。
因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu）不应理解为细菌、霉菌和酵母菌的个数。
在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。
2 设备、仪器2.1 设备2.1.1 无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.1.1.1 结构和要求见无菌检查法2.1.1.2 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间的净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
2.1.1.3 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。
缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
2.1.1.4 洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
洁净级别尘粒数/m3 浮游菌（个）/ m3沉降菌（个）/（∮90mm·0.5h）微粒直径≥0.5µm 微粒直径≥5µm100级10000级100000级≤3，500≤350，000≤3，500，000≤0≤2000≤20，000≤5≤100≤500≤1≤3≤10沉降菌数测定（Ⅱ法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35℃预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上，在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。
保健用品微生物检验方法—霉菌和酵母菌数测定
保健用品微生物检验方法 第5部分：霉菌和酵母菌数测定警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围本标准规定了保健用品中微生物中霉菌和酵母菌数的测定方法。
本标准适用生产和经营的保健用品中霉菌和酵母菌数的测定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 19489 实验室生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1霉菌和酵母菌数 molds and yeast count样品在一定条件下培养后，1 g 或 1 mL中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明样品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。
本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28 ℃±2 ℃培养5 天，计算所生长的霉菌和酵母菌数。
4 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯 。
实验用水符合GB/T 6682中二级水的要求。
4.1 灭菌生理盐水:详见附录A.1。
4.2 灭菌液体石蜡:详见附录A.2。
4.3 灭菌吐温-80:详见附录A.3。
4.4 虎红培养基:详见附录A.4。
5 仪器和设备5.1 天平:感量0.1g。
5.2 灭菌刻度吸管:10 mL、5 mL、1 mL。
15.3 高压锅。
5.4 量筒:100 mL、200 mL、2000 mL。
5.5 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5 ℃±0.5 ℃。
5.6 三角烧瓶。
5.7 研钵。
5.8 振荡器。
5.9 灭菌平皿:直径90 mm。
5.10 恒温培养箱:28 ℃±2 ℃。
6 样品6.1 样品的采集所采集的样品，应具有代表性，一般视每批保健用品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
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1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
霉菌和酵母菌总数标准操作规程
霉菌和酵母菌总数检查标准操作规程1目的建立规范的霉菌和酵母菌总数检查标准操作规程，确保检查操作正确。
2范围本规范适用于本公司的霉菌和酵母菌总数检查操作。
3职责4术语及定义无5 内容5.1实验资源5.1.1仪器设备：恒温霉菌培养箱28℃、振荡器、三角瓶、酒精灯、高压灭菌器、恒温水浴锅。
5.1.2试剂：生理盐水、虎红培养基。
5.1.3耗材：90mm培养皿，10ml移液管、离心管。
5.2实验前准备5.2.1检查样本是否保持原有的包装状态。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
5.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
5.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做微生物检验，再将剩余样品做其他分析。
5.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。
5.3样品制备5.3.1液体样品5.3.1.1水溶性的液体样品，可量取10mL加到90mL生理盐水中，如样品少于10mL，仍按10倍稀释法进行。
如为5mL则加到45mL生理盐水中，混匀后制成1：10检液。
5.3.1.2油性液体样品，取样品10mL，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80,在40℃~44℃水浴油性液体样品，中充分混合，制成1：10检液。
5.3.2固体样品5.3.2.1称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10的检液。
5.3.2.2如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加入90mL生理盐水，均质1min~2min；疏水性膏，霜及眉笔、口红等，称10g样品，加入10mL灭菌液体石蜡，10mL 吐温80,70mL生理盐水，均质3min~5min。
5.4检验方法5.4.1取1：10 、1：100 、1：1000的检液各1ml，分别注入培养皿内，每个稀释度各用两个培养皿，注入融化并冷至45℃±1℃左右的虎红培养基，充分摇匀，凝固后，翻转平板，置28℃±2℃培养5d，观察并记录。
4789.15-2010霉菌酵母注意事项图文详解
GB 4789.15-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数Enumeration of moulds and yeasts新标准的修改内容及适用范围•本标准与GB/T 4789.15‐2003 相比，主要修改如下：•——修改了范围；•——修改了检验程序和操作步骤；•——修改了培养基和试剂；•——修改了设备和材料；•——修改了附录。
•本标准的附录A 为规范性附录，附录B 为资料性附录。
适用范围•本标准规定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的计数方法。
•本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
设备和材料• 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。
• 2.2 恒温培养箱：28 ℃±1 ℃。
• 2.3 均质器。
• 2.4 恒温振荡器。
• 2.5 显微镜：10×～100×。
• 2.6 电子天平：感量0.1 g。
• 2.7 无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL。
• 2.8 无菌广口瓶：500 mL。
• 2.9 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。
• 2.10 无菌平皿：直径90 mm。
• 2.11 无菌试管: 10 mm×75 mm。
• 2.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
培养基和试剂• 3.1 马铃薯‐葡萄糖‐琼脂培养基：见附录A 中A.1。
• 3.2 孟加拉红培养基：见附录A 中A.2。
检验程序操作步骤‐样品的稀释• 5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
• 5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：细菌、霉菌、酵母菌检查是食品安全和环境卫生领域中非常重要的一项工作。
为了确保检查结果的准确性和可靠性，需要遵守一系列标准操作规程。
下面将介绍一份关于细菌、霉菌、酵母菌检查的标准操作规程，以供参考。
一、检测方法选择在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，首先需要确定检测的目的和样品种类。
根据具体情况选择适合的检测方法，一般可以选择培养基法、PCR法、免疫学法等方法进行检测。
不同方法的灵敏度和准确度有所差异，需要根据具体要求选择合适的检测方法。
二、样品采集在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，需要首先采集样品。
样品的采集应该遵循以下原则：1. 样品应该代表性，能够反映整个检测对象的真实情况；2. 样品的采集方法应该符合标准操作规程，避免污染；3. 采样器具和容器应该经过消毒处理，避免样品受到外界干扰。
三、样品处理在采集到样品后，需要进行样品处理以提取目标微生物。
样品处理的方法应该符合标准操作规程，避免样品受到外界污染。
常用的样品处理方法包括过滤法、萃取法、富集法等。
四、培养条件设置对于细菌、霉菌、酵母菌的检测，需要设置合适的培养条件以促进目标微生物的生长。
培养条件的设置应该考虑到目标微生物的生长特性和适宜条件，并严格控制培养环境的温度、湿度和氧气等因素。
五、培养基选择在进行微生物检测时，需要选择适合的培养基以促进目标微生物的生长。
不同微生物对培养基有不同的选择性，需要选择适合的培养基进行培养。
常用的培养基包括普通培养基、选择性培养基、差异培养基等。
六、检测结果解读在检测完成后，需要进行检测结果的解读。
根据实验结果判断目标微生物的存在与否，对结果进行合理解读和分析。
检测结果应该符合标准操作规程的要求，确保检测结果的准确性和可信度。
七、结果报告在完成检测后，需要对检测结果进行报告。
检测报告应该包括检测方法、样品信息、检测结果、结论和建议等内容。
探讨能力验证中霉菌酵母菌计数检验方法及注意事项
培 养 方 式低 １ ０ ． ２ ％， 其 Ｒ ｓ Ｄ指 数 为 ６ ． ９ ５ ％； 马铃 薯 一 葡 萄 糖 一 琼 脂培 养 基 内 ，倒
置培 养 霉 菌 数量 比正 向放 置 低 ７ ． ２ ％， 其 Ｒ ｓ Ｄ指 数 为 ４ ． ８ ７ ％，倒 置 培 养 中 马铃 薯 一
葡 萄 糖 琼 脂培 养 基 霉 菌 数 量 此 孟 加 拉 红 培 养低 ５ ． ５ ％， 其 Ｒ ｓ Ｄ指 数 为 ２ ． ４ ７ ％。不 管 采 用哪 种 培 养 方 式 ，所 计 数 的 酵母 菌 总 数 基 本一 致 。 可 见 ， 马铃 薯 一 葡 萄 糖
马铃 薯 一 葡萄糖 一 琼脂培养基倾 注法
倒 置 ２ ７ ０ Ｏ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ 正 置 ２ ９ ０ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ
孟加拉红培养基倾注法
倒 置 ２ ８ ０ Ｈ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ 正 置 ３ １ ０ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ
无菌平皿 内置入 １ ｍ Ｌ ， 再注入马铃薯 一 葡 萄 糖 一琼 脂 培 养 基 １ ５～ ２ Ｏ ｍ Ｌ ， 凝 固琼 脂 后 ，用 倒 置 和 正 置 方 式 在 （ ２ ８±１） 度 中的培 养箱 中培养 ５ ｄ ， 各稀释度均平行重复三次 。
如倒 置培 养法、正置培 养法进行监测 ，分析其 酵母 菌、霉菌计数结果 ，对比差异。
结 果 如 下 ：孟 加 拉 红培 养 基 内， 正 向放 置 中 ， 马铃 薯 一 葡 萄 糖 一 琼 脂培 养 基 霉 菌 数量 比 孟 加 拉 红 培 养 基低 ６ ． ８ ％，其 Ｂ Ｓ Ｄ指 数 为 ４ ． ５ ５ ％，倒 置培 养 霉 菌 数 量 比 正 向
１ ． ４实验方 法 依 据作 业 指 导 书，所 使 用的样 品
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霉菌和酵母菌计数的注意事项
进行霉菌和酵母菌的计数是在微生物学、食品工业和制药等领域中常见的实验操作。
以下是在进行这类计数时需要注意的事项：
1.标本采集：
•标本采集的过程需要注意采集的样本的代表性，以确保实验结果具有可靠性。
采样器具和采样手法也应经过消毒，
以防止外源微生物的污染。
2.实验室环境控制：
•实验室空气和工作台表面应该保持清洁，以防止实验样品受到外源污染。
使用层流罩或生物安全柜可以降低空气中
微生物的污染。
3.消毒和灭菌：
•所使用的培养基、培养器皿和仪器设备需要经过严格的消毒和灭菌处理，以防止实验中的交叉污染。
4.菌种的选择：
•选择适当的霉菌和酵母菌菌种用于实验。
确保所选的菌种与实验目的一致，并且经过适当的质量控制。
5.菌落计数方法：
•使用适当的计数方法，如涂布法、滤膜法等，以确保准确可靠的计数结果。
根据实验的需要，可以选择不同的计数
方法。
6.培养条件：
•控制培养条件，包括温度、湿度、pH等，以促进霉菌和酵母菌的生长。
这可以通过使用恒温箱、培养箱等设备来
实现。
7.实验时间：
•在培养过程中，确定合适的培养时间以确保菌落充分生长。
同时，注意不要过度培养，以防止菌落过于密集。
8.质量控制：
•进行质量控制实验，包括使用标准菌株进行验证实验，以确保实验的可靠性和重复性。
9.记录和分析：
•记录实验的详细过程，包括样品信息、培养条件、计数结果等。
进行统计学分析以获取可靠的数据。
通过严格控制这些因素，可以确保霉菌和酵母菌计数实验的可靠性和准确性，从而为相关领域的研究和应用提供可信赖的数据。