MS培养基配制方法-new
ms培养基配方表
ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基,用于无菌条件下培养哺乳动物细胞,特别是鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryo Fibroblast,MEF)。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物,可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时,它还包含有机缓冲剂和盐类,可以调节培养品的 pH 值和离子浓度,保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表:MS培养基水相1. 将1L 去离子水(DI水)加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液(1mol/L)27.7g,调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g,混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g,细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g,细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3(7.5%)4mL,细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐(HEP)2g,细胞培养所需濃度;过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4(7H2O)0.94g,细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g,细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4(H2O,2. H2O)0.19g,细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4(7H2O)3.05g,细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤(NEAA)1mL,必需的非必需氨基酸,促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g,利用减少氧淤积,促进细胞生长9.加入硫酸铜子(10-5M))1mL,为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注:以上配方根据MS原始文献略作调整,如果在实验中出现差异,请根据实际情况微调。
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项:
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水
浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功,主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点,也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时,首先要对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素,但是植物激素的种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料有变化,因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基,还有B5培养基,N6培养基。
MS培养基配方
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置:加热都是用温水浴加热,全部都要避光保存,用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml(20 x)KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml(100x g/L)KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,加水定容至500ml,置于小口瓶中,贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液:大量元素,微量元素,有机微量元素,铁盐母液•蔗糖,琼脂锥形瓶MS培养基配方:母液都稀释至1xMS培养基配方(1L)母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g(15g/L)3g琼脂8g(8g/L) 1.6gPH先调至 5.85-5.88,最终灭菌后pH接近5.81)。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基配制
培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基配制方法-new
MS 培养基一、大量元素母液1:大量A母液2:大量B母液3:Fe盐注:配制顺序如下1。
称取3。
73 g Na2—EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4:微量三、有机物质母液5:有机(不含肌醇)℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素) 双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸) 1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone—syringone,AS)称取196。
2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA).。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16.5g②KNO31900 mg/L 19.0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4.4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3.7g⑤KH2PO4170 mg/L 1.7g注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3 mg/L(21.4 mg/L)223mg②ZnSO4·7H2O8.6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0.025mg/L 0.25mg④CuSO4·5H2O0.025 mg/L 0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg/L 2.5mg⑥KI 0.83 mg/L 8.3 mg⑦H3BO36.2 mg/L 62 mg注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。
3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量Na2·EDTA37.3 mg/L 373 mgFeSO4·7H2O27.8 mg/L 278 mg注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
植物组织培养中MS培养基的配置步骤
植物组织培养中MS培养基的配置步骤
项目:配置培养基
配方:1.MS
2.MS+6-BA0.5
3.MS+6-BA1
材料用具:一定数量的玻璃瓶,烧杯,移液管,量筒,烧杯,玻璃棒,电饭锅,高压灭菌锅,洗耳球,MS母液,6-BA0.5mg/L 植物生长调节物质母液,PH试纸,蔗糖,琼脂粉,标签等
添加物:蔗糖30g/L
琼脂粉7.5g/L——8g/L(注:美国琼脂量4.5g/L——5g/L)PH值=5.6——5.8,可适当调高0.3左右。
一般在出锅前进行调适。
基本步骤:1,根据所需配置的培养基量,用移液管从装有MS 母液的容器里吸取所需的母液量以及所需的6-BA0.5mg/L植物生长调节物质母液。
注:不同的母液需要用不同的移液管吸取,切忌混用,以免母液被污染不纯
2,将吸取的母液依次注入量筒,注入蒸馏水定容
3,将电饭锅的电源插上,将溶液倒入,打开开关加温,并在适当的温度时分别加入蔗糖与琼脂,并用玻璃棒不断搅拌,使其均匀溶解。
注:加入琼脂时,必须注意温度的掌握,不可过高。
4,在桌上将玻璃瓶按一定序列排好,将煮好的培养基
均匀倒入,并且盖好瓶盖,贴上标签,写上培养基的名称。
5,将培养基放入高压灭菌锅后,拧紧,并加适量的水。
打开开关工作后,先让温度上升至120℃,保持20分钟左右,温度开始下降,整体灭菌需要一段较长时间(一般为2个小时左右)。
6,一段时间后,取出培养基,将那些瓶盖没盖好,已经感染的培养基处理掉。
7,做好一切后,打扫卫生,保持整体环境干净整洁。
MS培养基的配制
MS 培养基的配制1、配制几种母液(1)配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L((500ml 500ml)的母液。
各自倒入)的母液。
各自倒入1L 1L((500ml 500ml)试剂瓶中,存放于冰箱中。
)试剂瓶中,存放于冰箱中。
)试剂瓶中,存放于冰箱中。
(2)配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取(注:溶好一个后,再加下一个)依次称取(注:溶好一个后,再加下一个)名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液,倒入1L 试剂瓶中,存放于冰箱中。
试剂瓶中,存放于冰箱中。
注:注:CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一,由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一,可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g,,CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液,然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
(3)配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS培养基的配方与灭菌
MS培养基(用于分离)的配方与灭菌植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意:1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取,分别将各种化合物称量后,除CaCl2·2H2O单独配制外,其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
1.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
2.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
.生长调节剂母液配制:为了操作方便,节约时间,生长调节剂也可如同配制母液一样,先配成原液,这样配制培养基时只要稍加计算,按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水,可用少量不同的溶剂先溶解,萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA),赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量95%酒精溶解,然后加水,如溶解不完全再加热。
MS培养基的配置
MS培养基的配置一、母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点:(1)保证各物质成分的准确性;(2)便于配置时快速移取;(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(50X)称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。
配1升培养基取20 ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16.5g②KNO31900 mg/L 19.0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4.4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3.7g⑤KH2PO4170 mg/L 1.7g注:CaCl2·2H2O单独配置2、MS微量元素母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O(MnSO4·H2O)22.3 mg/L(21.4 mg/L)223mg②ZnSO4·7H2O8.6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0.025mg/L 0.25mg④CuSO4·5H2O0.025 mg/L 0.25mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg/L 2.5mg⑥KI 0.83 mg/L 8.3 mg⑦H3BO36.2 mg/L 62 mg注:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5 mg)或100倍量(25 mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml,即含0.25 mg的量。
3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基母液10ml。
化学药品1升量10升量Na2·EDTA37.3 mg/L 373 mgFeSO4·7H2O27.8 mg/L 278 mg注:配制时,两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。
ms培养基的制备实验报告
ms培养基的制备实验报告
实验目的:
本实验旨在制备ms培养基,为细胞培养提供适宜的营养环境。
实验原理:
ms培养基是一种适用于植物细胞培养的基础培养基,其主要成分包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等。
本实验制备ms培养基的主要步骤包括配制无机盐溶液、配制糖类溶液和调配维生素、植物激素溶液等。
实验步骤:
1. 配制无机盐溶液:按照ms培养基的配方,称取所需的无机盐粉末,加入适量的去离子水中,用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
2. 配制糖类溶液:按照ms培养基的配方,称取所需的糖类粉末,加入适量的去离子水中,用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
3. 调配维生素、植物激素溶液:按照ms培养基的配方,称取所需的维生素和植物激素粉末,加入适量的去离子水中,用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
4. 将无机盐溶液、糖类溶液和维生素、植物激素溶液按照一定比例混合,得到ms培养基溶液。
5. 调节溶液的pH值:使用pH计测定ms培养基溶液的pH值,并根据需要调节pH值至适宜范围。
6. 将培养基溶液过滤:使用0.22μm的滤膜将ms培养基溶液过滤,以去除其中可能存在的微生物和杂质。
实验结果:
经过上述制备步骤,我们成功制备了一定量的ms培养基溶液。
经过pH调节和滤膜过滤处理,该溶液清澈透明,无菌。
经过质量检测,该溶液满足细胞培养的要求,可以用于细胞培养实验。
结论:
本实验通过一系列制备步骤,成功制备出适用于植物细胞培养的ms 培养基溶液。
该溶液满足细胞培养的营养需求,可以用于后续细胞培养实验。
MS培养基的配制步骤
MS培养基的配制步骤大量元素(母液Ⅰ) mg/LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、[烈宜醄NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L 的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0?1 mg/mL 的母液。
MS固体培养基的配制
MS固体培养基的配制一、实验目的通过实验实训,掌握MS固体培养基的配制技术及操作技能。
二、材料与用具配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、电饭煲、全自动高压灭菌器、pH试纸、0.1mol/L 的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔等。
三、方法与步骤(一)按母液顺序和规定量,用吸管提取母液,放入盛有一定量(150-200ml)纯净水的量筒中。
母液一 30ml/L母液二 15ml/L母液三15ml/L母液四 15ml/L母液五30ml/L母液六7.5ml/L1-8组4人配1L,9-10组3人配1L。
(二)加入植物生长调节物质加入的具体调节物质与量视培养物不同而异(本次实验不加生长调节剂)。
(三)定容加纯净水定容至1000ml。
(四)倒入预先用铅笔标好刻度的电饭煲中。
(五)加糖、加热:加入蔗糖20g/L并开始加热。
(六)加琼脂粉12g/L:在电饭煲中给培养基加温至冒热气时均匀缓慢地加入琼脂粉,用玻璃棒不断搅拌至全部熔解并煮沸。
(七)调节pH值:煮沸后,用试纸测试pH值,用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.6—5.8;加水至预先标注的刻度处,煮沸1-2分钟。
(八)培养基分注把配置好的培养基用烧杯分注到培养瓶中,分注前用量筒量取30ml水倒入培养瓶测试,每瓶装30ml(3瓶/100 ml)左右。
分注后立即加盖,贴上标签,注明培养基的名称、配制时间、配制人姓名。
(九)培养基灭菌,无菌水、无菌瓶、无菌纸片制作。
1.将蒸馏水注入灭菌腔,直至水流进入水位板中间的水位指示器。
2.将待灭菌的物品放入提篮中,将提篮放入灭菌腔中。
3.插上电源,打开开关。
4.旋紧“排汽旋钮”,关闭灭菌腔盖,直至指示灯“LOCKED”亮起。
5.选择灭菌程序,按“SET/ENT”键设置温度为121℃,保温时间20min。
6.长按“START”键开始灭菌。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意:1.除CaCl2·2H2O单独配制外,大量元素按照使用时高10倍的数值称取,将各种化合物称量后,分别用少量水在不同的容器内充分溶解,然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液,加适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌促溶,倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,置小口瓶中保存,贴上标签注明化合物名称(或编号),浓缩倍数,配制日期和配制者姓名,CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2.微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取,分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外,其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后,定容在1000ml容量瓶中,置小口瓶中保存,贴上标签。
3.铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中,加热,(很重要)不断搅拌,溶解后,两液混合,调PH至5.5加水定容至1000ml,置于小口瓶中,贴上标签。
4.有机物母液配制,按母液要求浓缩50倍,除蔗糖按3%单独临时称量外,其余分别称量后,溶解,定容在500ml容量瓶中,置于小口瓶中保存,贴上标签。
5.母液最好在2~4℃的冰箱中贮存,特别是有机类物质,贮存时间不宜过长,无机盐母液最好在一个月内用完,如发现有霉菌和沉淀产生,就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时,所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求,化学药品必须是高纯度的(分析纯)。
B.称量药物采用高灵敏度的天平,每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一.养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积(CC)×——————————母液浓缩倍数(二)各种母液按顺序编号排列A.大量元素;B.CaCl2.2H2O;C.微量元素;D.铁盐;E.有机物;F.生长素萘乙酸(NAA):配制0.5mg/ml的NAA称取50mg , NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml;G..细胞分裂素、激动素(KT)配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
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MS 培养基
一、大量元素
母液1:大量A
母液2:大量B
母液3:Fe盐
注:配制顺序如下
1. 称取3.73 g Na2-EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A);
2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中(B);
3. 将B缓慢倒入A中混合,边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h;
4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素
母液4:微量
三、有机物质
母液5:有机(不含肌醇)
℃
注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel;肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液
试剂名称配制方法母液浓度Amp(氨苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Str(链霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌50 mg/ ml Cb(羧苄青霉素)双蒸水溶解,定容,过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml NAA(萘乙酸)1M NaOH溶解,双蒸水定容,高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容,过滤灭菌 1 mg/ ml
五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone, AS)
称取196.2 mg AS用10 ml DMSO溶解,母液浓度100 mM,-20℃避光保存,工作浓度100 ~ 200 μM
六、MS溶液的混合
5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素(6-BA和NAA),定溶至1000 ml,用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel (Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后,在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA)。