实验一 油镜的使用和细菌形态的观察

实验一油镜的使用和细菌形态的观察

一、实验目的

1.学习并掌握油镜的工作原理和使用方法。

2.掌握细菌单染色法原理和操作方法，并观察细菌的基本形态。

二、实验内容：

1.学习油镜的使用方法；

2.用单染色法制作装片；

3.观察枯草芽抱杆菌和八叠球菌细菌的形态观察

三、实验原理

油镜是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系），而是一层油脂，称为“油浸系”。利用油镜的目的是增加显微镜的分辨力，和光线的强度。

简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料对细菌进行染色。

四、实验仪器和材料

八叠球菌（Staphylococcus aureus )，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）；草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、香柏油、二甲苯。

显微镜，酒精灯，载玻片，接种针，擦镜纸。

五、操作步骤

（一）油镜的使用

1．将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为4cm。坐正，练习用左眼观察。

2．调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，上升聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察未染色装片时，光线不宜太强（这就是注意事项）。

3. 低倍镜观察

首先下降载物台，夹住标本。从目镜观察，将欲观察位置移至物镜正下方，适当缩小光圈，转动粗调节器使物镜逐渐升降至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部分移至视野中心.

4. 高倍镜观察

眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与破片相撞。再用目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。将最适宜观察部分移至视野中心，准备用油镜观察。

5. 油镜观察

(1)滴油：下降载物台约2cm，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴上一小滴香柏油。

(2)下镜：从侧面注视，小心慢慢上升镜筒，使油镜浸入油香柏油中，镜头贴近装片。

(3)寻像：将光线调亮，左眼从目镜观察，旋转细调节器将载物台徐徐下降，直至视野中有物像为止。

（4）擦油：观察完毕，上旋镜筒。先用擦镜纸拭去镜头上的油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留油迹，最后再用干净擦镜纸擦去残留的二甲苯。切忌用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头。擦净显微镜的金属部件。

（5）复位：将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将接物镜转成八字形，再向下旋。同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。

（二）细菌形态的观察

1.制作装片：

（1）标记洁净的载玻片：左上角或右下角

（2）涂片：在载玻片中央滴一小滴菌液，用无菌操作调匀并涂成薄膜。

（3）干燥于室温中自然干燥。

（4）固定：涂片面向上，于火焰上通过4—5次，使细胞质凝固，固定细菌的形态，并使其不易脱落（固定于载玻片上）。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。

（5）染色：放标本于水平位置，滴加染色液覆盖涂片薄膜上，并计时。草酸铵结晶紫染液1分钟，石炭酸复红染色液约染1—2分钟。

（6）水洗：染色时间到后，用水冲洗至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。

（7）将标本晾干或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油镜下观察。

（8）镜检：低倍镜到高倍镜再换油镜观察。

五、作业

1、八叠球菌和枯草芽孢杆菌的形态

2、油浸系有哪些优点？

3、油镜的使用方法及注意事项？