BD分析TH17细胞

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Th17细胞及其分泌的IL-17在自身免疫性疾病中的作用

Th17细胞及其分泌的IL-17在自身免疫性疾病中的作用种靖慧;解金辉【摘要】辅助性T细胞17(Th17)是一种新型T细胞亚群,能够分泌产生重要效应因子IL-17,IL-17作为炎症介质结合细胞上的IL-17受体引发包括NF-κB、MAPK 等途径在内的一系列信号传递而发挥其生物学功能,介导炎症、感染等的发生和发展.自身免疫性疾病是由于机体免疫功能紊乱,对自身抗原发生免疫反应,进而导致自身机体损伤的一种疾病,如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血等均属于常见的自身免疫性疾病.Thl7细胞及IL-17的异常表达和信号传递机制与各种自身免疫性疾病的致病机理研究成为一个热点,这为自身免疫病的防治对策提供新的认识和方案,Th17细胞及IL-17成为自身免疫性疾病一个新的治疗靶标.【期刊名称】《继续医学教育》【年(卷),期】2018(032)007【总页数】3页(P129-131)【关键词】辅助性T细胞;Th17;IL-17;自身免疫性疾病【作者】种靖慧;解金辉【作者单位】天津市血液中心免疫血液学研究室,天津 300110;天津市血液中心免疫血液学研究室,天津 300110【正文语种】中文【中图分类】R392自身免疫性疾病是机体的免疫平衡状态被打破，进而引起对自身机体的损伤的一种疾病，亦是对于外界入侵甚或自体产生的抗原发生的反应。

在参与机体免疫应答的各种免疫细胞中，CD4+T细胞作为效应T细胞发挥关键作用，Thl7细胞是一种新型的CD4+T细胞，其分泌的IL-17因子，能够作为介质调控机体的免疫调节，与其受体结合活化信号传递发挥生物学功能，调节炎症、感染等病理过程，是自身免疫病中重要的调控机制。

Th17及其分泌的IL-17表达和功能的异常与自身免疫性疾病的发生发展密切相关[1]，在炎症性自身免疫病患者和动物模型中均发现IL-17的异常高表达及异常的信号传递，这与其炎症性病理机制密切相关。

现将相关研究综述如下。

560484人TH1TH2TH17细胞因子CBA分析试剂盒原理及方法

3

FITC 阳性质控（E2）：FITC 标记抗体质控品，流式细胞仪调整仪器补偿时使用。4C 保存，勿冷冻。 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品（C）：为人类细胞因子重组蛋白冻干品。一瓶用 0.2mL 分析稀释液稀释，成为 10标准品（人 IL-2、IL-4、 IL-5 (Kit I)或 IL-6 (Kit II)、IL-10、TNF-、IFN-和 IL-17A 蛋白各含 50ng/mL）。4C 保存。 Human TH1/TH2/TH17 细胞因子标准品可以存放至有效期。复溶后的 10标准品在 2-8C 保存，可存放 12 个小时。
156 156 156 156 156 156 156 156
80 80 80 80 80 80 80 80
40 40 40 40 40 40 40 40
20 20 20 20 20 20 20 20
2. Human TH1/TH2/TH17 细胞因子捕获微球混悬液的制备捕获微球分为（A1）-（A7）七瓶，制备捕获微球混悬液之后应立即进行下一步操作，加入 PE 信号抗体、标准品和待测样本。 1) 计算分析实验管数（包括标准品和质控品），例如分析 8 个待测样本，加 9 个标准管和 1 个阴性质控管，共计 18 管； 2) 充分摇匀各捕获微球试剂瓶（A1）-（A7）； 3) 每个测试需加入（A1）-（A7）捕获微球各 10L，制成捕获微球混悬液，例如 18 管实验需要（A1）-（A7）捕获微球各 180L； 4) 如果是血清或血浆，先 300g 离心混匀的捕获微球，轻轻吸出上清，加入等量的 H 富集血清，室温避光 30 分钟。
2
为了满足不同用户的实际需要，BD 公司 2005 年初推出了可以自由组合的 CBA Flex set。它改变了 CBA KIT 的固定形式，成为自由组合、灵活搭配的自助餐。 CBA Flex set 的原理与 KIT 相似，捕获微球用来定性目的蛋白，检测抗体的荧光强度来定量目的蛋白。与 KIT 不同的是，Flex set 微球是带有两种荧光，分别在流式细胞仪的 FL3 和 FL4 通道检测，通过这两个二维矩阵来对捕获微球定性。PE 检测抗体在 FL2 通道来对目的蛋白定量。(如下图)

Th17研究方法和产品应用

七、产品信息
研究意义
• Th17细胞与自身免疫病有着非常密切的关系. 包括类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮 (SLE)、以及哮喘等患者的血清及组织中检测到了 IL-17的高表达。 • IL-17在哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和肿瘤等也有密切的关系。
报告内容一、Th17的发现二、Th17细胞分化三、Th17细胞的功能四、研究方法
Th17细胞发育与Th1和Th2细胞一样，受各种因素的协调控制。
Th17发现
Th17细胞发现于对实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) ，以及对胶原诱导的关节炎(CIA)的研究。传统观点认为，上述疾病由 Th1 细胞介导，然而中和 Th1细胞因子IFN-γ和（或）IL-12的功能，并不能减轻疾病进程. 而中和IL-23则延缓了疾病的进程。证实IL-23的缺失可以降低体内IL-17+T 细胞的比例，而不影响IFN-γ+ T 细胞的含量。
报告内容一、Th17的发现二、Th17细胞分化三、Th17细胞功能四、研究方法
五、Th细胞亚群比较六、研究方法
七、产品信息
生物学功能 Th17 细胞能够分泌产生 IL-17A 、 IL-17F 、 IL-6 、 IL-22 以及 TNF-α 等 , 其功能主要就体现在它分泌的这些细胞因子集体动员、募集及活化中性粒细胞的能力上。 Th17 细胞产生的最重要的效应因子是IL-17, 其受体在体内广泛表达， IL-17 细胞因子家族包括 IL-17A 、 IL-17B 、 IL-17C 、 IL-17D 、 IL-17E(IL-25 ) 和 IL-17F 。通常， IL-17 是指 IL-17A 。 IL-17 具有促炎症作用，诱导促炎细胞因子 (如IL-6、TNF) 、趋化因子(如MCP1和MIP2)和基质金属蛋白酶的表达，引起组织细胞浸润和组织破坏。 IL-17 也参与中性粒细胞的增殖、成熟和趋化，对 T 细胞的活化起协同刺激作用，并能促进树突状细胞的成熟

Th17细胞的研究进展

有研究发现： [11] 孤独受体 (Orphan nuclear recep tor, RORγt) 是控制 Th17 细胞分化的转录因子。当小鼠缺乏 RORγt 后，Th17 细胞数量也相应减少。
除此之外，研究者还发现，在原代培养中加入 IFN-γ 或者 IL-4 可以明显抑制 Th17 发育分化（图 1）[12]。另外，在培养体系中加入外源性 IFN-γ 或 IL-4，也可以阻断 IFN-γ 缺陷的 CD4+T 细胞分泌 IL17[13]。这表明，Th1 和 Th2 细胞可有效抑制 Th17 细胞发育。这也提示，Th-17 细胞
【关键词】Th17 细胞；IL-17；CD4+T 细胞；免疫调节
1 Th17 细胞与 IL-17 的生物学特性
Th17 细胞作为一种效应性 CD4+T 细胞，其最主要的特征就是分泌 IL-17。 IL-17 与受体结合后 , 通过活化 MAP 激酶和 NF-κB[2] 发挥其生物学活性。IL-17 的主要生物学功能是促进炎性反应 , 与类风湿性关节炎、哮喘、多发性硬化症、银屑病和移植排斥反应密切相关。IL-17 还可以刺激上皮细胞、内皮细胞或成纤维细胞产生 IL-6、急性反应蛋白、粒 - 巨细胞刺激因子 (G-CSF) 和前列腺素 E2 等表达。因此，适应免疫系统可以通过 IL-17 和固有免疫系统相联系并促进炎症反应过程。但同大多数炎症因子相似，在体内不同疾病环境中， IL-17 也可能发挥不同的免疫调节效应 [3]。
小鼠缺乏 IL-23 几乎没有 Th17 细胞 [5] 的扩生 IFN-γ 和 IL-2[8] 却明显增加 IL-17 的产

辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)的平衡关系在全身炎症反应综合征(SIRS)中的作用及机制研究 (1)

transcription
子
Th9
Helper T lymphocytes9
辅助性 T 淋巴细胞 9
IFN-γ Interferon γ
γ 干扰素
TGF-β transforming growthfactorβ
β 转化生长因子
Socs3 suppressor of cytokine signaling 3 细胞因子信号传送
激酶途径和核转录
因子 kB
CNS2 conserved noncoding sequence 保守非编码序列 2
CXCL8 Neutrophils and induction of 中性粒细胞和诱导
chemokine
趋化因子
APC
Antigen presenting cells
抗原提呈细胞
Granulocyte-macrophage
阻抑蛋白 3
GM-CSF colonystimulating factor
粒细胞-巨噬细胞刺
激因子
-2-
第四军医大学硕士学位论文
CAM-1 cellular adhesion molecule 1
细胞黏附分子 1
NFkB nuclearfactor kB
中国人民解放军第四军医大学二 O 一二年四月
第四军医大学硕士学位论文
目录
缩略语表 ................................................................................................................ 1 中文摘要 ................................................................................................................ 4 ABSTRACT .......................................................................................................... 7 前言 .............................................................................................................. 11 文献回顾 .............................................................................................................. 13 正文 .............................................................................................................. 27

th17细胞

TH17细胞TH17细胞是一类重要的淋巴细胞亚群，起源于T辅助细胞，其在免疫系统中扮演着重要的角色。

这种细胞被广泛认为与炎症和自身免疫性疾病的发展密切相关。

TH17细胞主要通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-21等细胞因子来发挥作用。

TH17细胞的发现TH17细胞最早于2005年由美国科学家发现并鉴定，该发现被认为是免疫学上的一次重大突破。

TH17细胞的发现使得人们对于自身免疫性疾病的机制有了更深入的了解。

TH17细胞的功能TH17细胞在免疫应答中扮演着重要的角色，主要参与体液免疫和细胞免疫的调节。

TH17细胞除了可以诱导炎症反应外，还能促进新生血管生成和组织修复。

然而，过度活化的TH17细胞也与多种自身免疫性疾病的发生有关。

TH17细胞的调控TH17细胞的发育和功能受到多种细胞因子、细胞途径和信号分子的调控。

IL-6、IL-23、TGF-β等因子在TH17细胞的分化和活化过程中发挥关键作用。

通过调节这些信号分子的表达和活性，可以有效干预TH17细胞相关疾病的发展。

TH17细胞与疾病除了在自身免疫性疾病中的作用外，TH17细胞还与多种炎症性和感染性疾病的发展密切相关。

研究人员对于TH17细胞在疾病发生和发展中的具体作用进行了深入研究，希望通过调控TH17细胞的活性来治疗相关疾病。

总结TH17细胞作为一类免疫细胞亚群，在免疫系统中发挥着重要作用。

它的发现为免疫学领域带来了新的认识，而对于TH17细胞的功能、调控以及与疾病的关系的研究也在持续深入。

随着对TH17细胞的进一步了解，相信将有助于未来更好地治疗相关疾病和疾病的预防。

Th17细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎中的检测及临床意义

Th17细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎中的检测及临床意义目的探讨IL-6、IL-17在类风湿关节炎（RA）患者外周血及关节液中的表达及临床意义。

方法RA患者51例为RA外周血组，其中15例为RA关节液组，30例健康者作为对照组，IL-6及IL-17采用ELISA方法检测。

结果RA外周血组及关节液组具有较高的IL-6、IL-17检测值（P 0.05），具有可比性。

1.2 研究方法本实验中的血液及关节液均采用干净的试管进行收集，在室温条件下凝固0.5 h，离心（1 000 r/min）15 min，弃沉淀后收集分离中的上清液。

将上清液进行分装后冷冻于-80°C条件下保存备测。

ESR的检测采用Alifax公司的Microtest1全自动快速血沉仪进行，而CRP及RF的检测采用免疫比浊法进行，采用ELISA 法检测血液及关节液中的IL-6、IL-17，检测中使用上海森雄科技实业有限公司的试剂盒。

1.3 统计学方法数据的统计学分析均采用SPSS17.0统计分析软件进行处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析与t检验及直线相关分析，对RA相关的指标与IL-6、IL-17水平的相关性进行分析，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果2.1三组IL-6及IL-17水平的比较由表1可以看出，与对照组比较，RA外周血组及RA关节液组均具有明显较高的IL-6、IL-17检测值，差异具有显著性（P < 0.05）；与RA外周血组患者比较，RA关节液组具有明显较高的IL-6、IL-17检测值，差异具有显著性（P < 0.05）。

2.2 ESR、RF、CRP与IL-6、IL-17水平的相关性分析由表2数据可以得出，ESR、RF、CRP与RA外周血患者及关节液患者中IL-6水平呈显著的正相关（P < 0.05）。

进一步将RA外周血中的IL-17及关节液中的IL-17与RA的各观察指标进行相关性分析发现，RA外周血中的IL-17与RA各观察指标不具有相关性，而RA关节液中的IL-17则显著正相关于CRP（r = 0.78，P < 0.05）。

Th17淋巴细胞研究进展

㈣ Th17细胞与其它疾病
此外，Th17细胞与肿瘤的发生存在联系。目前已在不同肿瘤患者的器官样本中发现了IL-23P19的过度表达，包括结肠癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、头颈部肿瘤及黑色素瘤等。研究发现，IL-17可进血管内皮细胞迁移，显着上调成纤维细胞或肿瘤细胞中前血管生成因子的表达，具有促进肿瘤血管生成的作用。体内实验也发现转染IL-17的肿瘤较对照组血管密度明显增加。IL-17抗体可明显抑制CD4+T细胞的血管生成活性，即IL-17对肿瘤的发生有抑制作用。研究表明，Th17细胞也可能在2型糖尿病的发生、发展中起重要作用。国内研究发现，2型糖尿病患者外周血中Th17细胞比例显着高于对照组，且在糖尿病生病组高于正常清蛋白尿组，提示Th17细胞与2型糖尿病的发生、发展密切相关，进一步丰富了2型糖尿病发病的免疫学机制，补充了Th1/Th2平衡失调理论的不足。Th17细胞通过分泌细胞因子集体动员、募集及活化中性粒细胞，诱导炎症。多项研究发现Th17细胞与炎性肠病有一定的关系，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎，其患者结肠莫局部及血清中Th17/IL-17水平明显高于健康者。
⒉SLE
在狼疮小鼠模型中，血清的IL-17水平和脾脏Th17细胞数目均异常增加，分离的初始CD4+T细胞在体外培养中更易于分化成为Th17细胞。实验发现，SLE患者体内IL-17蛋白的基因表达水平存在的明显差异并且两者存在正相关关系。
⒊银屑病
是一种常见的自身免疫病炎性皮肤病。研究显示，银屑病患者外周血Th17细胞/CD4+T细胞比例和相关细胞因子IL-17/IL-23表达高于正常人群。患者外周血IL-23高表达，促进了CD4+T细胞向Th17细胞分化，使其分泌IL-17异常增加，可能是银屑病发病机制重要环节。目前，生物学数据显示，IL-23/IL-23R通路可能是银屑病的重要干预治疗靶向。

Th17细胞在自身免疫性疾病和感染性疾病中的作用

Th17细胞在自身免疫性疾病和感染性疾病中的作用白婕综述天津市海河医院普外科，天津，300350摘要：在免疫反应过程中，CD4+T细胞起了重要的作用。

Th17细胞是一种新发现的CD4+T 细胞，它不同于Th1，Th2等CD4+T细胞，可分泌IL-17A，IL-17F，IL-21和IL-22等不同的细胞因子，通过这些细胞因子在免疫应答中起着重要的作用。

Th17细胞在自身免疫性疾病中的作用已有报告并有一些明确的证据支持，并且在不同的疾病研究中表现出相似的作用，本文分别阐述Th17细胞在桥本甲状腺炎、多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、脊柱关节病、系统性红斑狼疮、牛皮癣、炎症性肠病、人类免疫缺陷病毒（HIV）感染和乙型肝炎病毒（HBV）感染等不同的自身免疫性疾病、炎性疾病和感染性疾病中的作用。

尽管有证据表明Th17细胞可以在这些疾病的控制中发挥重要作用，但其具体的作用机制仍不完全清楚，还需要研究者进一步的探索。

关键词：Th17 自身免疫性疾病感染性疾病在免疫反应过程中，CD4+T细胞对于免疫应答的启动起着重要的作用，其可为其它细胞提供帮助并承担着多种效应因子的功能。

经抗原刺激，原始的CD4+T细胞活化、扩展并分化成不同亚型，称为辅助T细胞—Th（Th1，Th 2，Th 9，Th17，和Th22）—其特征在于生成不同的细胞因子和效应因子[1]。

Th17细胞已被确定是许多自身免疫疾病的主要致病Th细胞群，并且IL-23可以增强和稳定其功能[2]。

免疫系统的主要功能是识别并消除外来抗原，以诱导免疫记忆，并培养对自身抗原的耐受。

有效的免疫稳态依赖于若干因素的平衡，包括调节性T细胞对Th细胞的激活和抑制。

当动态平衡被破坏，并且免疫系统处于活化状态时，宿主容易产生自身免疫[3]。

Th17细胞在诱导炎症的过程中起着重要作用[3]，但免疫应答需要一定程度的控制以避免慢性炎症的免疫应答介导的损伤。

CD4+T细胞是免疫防御的第一线，主要是通过分泌细胞因子在免疫反应的诱导和调控中扮演重要角色。

冠心病患者中Th17细胞水平的变化及其意义探讨

冠心病患者中Th17细胞水平的变化及其意义探讨摘要：目的探讨不同类型冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血辅助性T细胞17（T help cell 17，Th17细胞）的变化及其临床意义。

方法选取急性心肌梗死（AMI）患者20例、不稳定性心绞痛（UA）患者25例、稳定性心绞痛（SA）患者19例及健康体检者22例。

采用流式细胞仪检测各组患者外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例，采用实时定量PCR方法检测IL-17mRNA的表达，采用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测各组患者外周血白细胞介素（IL）-17的表达。

结果AMI 组和UA组患者外周血Th17细胞/CD4+T细胞、IL-17mRNA、IL-17表达明显高于SA组和健康对照组（P0.05）。

结论AMI患者和UA患者外周血中Th17细胞比例增加，IL-17mRNA及IL-17水平升高，Th17 细胞可能参与动脉粥样斑块不稳定和冠心病的发病。

关键词：冠状动脉粥样硬化性心脏病；辅助性T细胞17；IL-17；IL-17mRNA冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，基本病因是冠状动脉粥样硬化。

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是动脉血管壁的慢性炎症反应，其中CD4+T淋巴细胞发挥着重要的作用[1]。

近年来发现一种新的CD4+T淋巴细胞即Th17细胞，能分泌白介素（Interleukin）-17等多种细胞因子参与炎症过程[2]。

许多研究表明Th17细胞及其分泌的细胞因子参与类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等多种疾病发病及进展[3-4]。

而目前动物实验表明，在动脉粥样斑块的发生发展中，IL-17参与巨噬细胞的活化并通过相关机制释放蛋白水解因子，IL-17和TNF-α水平的增加能够发挥协同作用创造促炎微环境，从而促进动脉粥样硬化性疾病的发生发展。

由此我们推测Th17细胞可能通过IL-17的促炎效应，参与并促进粥样斑块不稳定和急性冠状动脉综合征（ACS）的发生发展。

牛奶蛋白过敏婴儿外周血中Th17细胞及IL—17、IL—21的研究

牛奶蛋白过敏婴儿外周血中Th17细胞及IL—17、IL—21的研究目的：探索Th17细胞及IL-17、IL-21在牛奶蛋白过敏（CMA）婴儿发病机制中的作用。

方法：采集病例组治疗前后和健康对照组各25例患者的空腹外周静脉血，用流式细胞仪技术测定Th17细胞在CD4+T细胞中的占比，用ELISA 法检测上清IL-17、IL-21水平，比较两组的各项指标。

结果：病例组治疗前Th17细胞占比（8.97±2.81）%，治疗后（3.72±2.52）%，对照组（1.92±1.38）%，比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

IL-17在对照组、病例组治疗前、病例组治疗后分别为（3.05±1.61）、（25.58±7.89）、（13.07±9.63）ng/mL，IL-21在对照组、病例组治疗前、病例组治疗后分别为（1.88±1.62）、（13.43±4.3）、（9.13±4.67）ng/mL，比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

结论：Th17细胞、IL-17和IL-21可能为CMA的研究及治疗提供了靶向依据。

牛奶蛋白過敏（Cow’s milk allerge，CMA）是婴儿最常见的食物过敏，在欧洲发病率2%～3%[1]。

国内尚无CMA的发病率统计，但有关我国两岁以下儿童一项调查发现，食物过敏的发生率为5.5%～7.3%[2]。

CMA可涉及各个系统，临床表现多样，以胃肠道及皮肤症状为主，如胃食管反流、呕吐、腹胀、腹泻、便血、便秘、湿疹、荨麻疹等，还可表现为缺铁性贫血、生长发育缓慢、喘息、慢性咳嗽等[3]。

目前已发现多种免疫细胞及因子参与其中，但具体机制尚不明确。

治疗方法包括疗效确切的饮食回避法和结论不一的口服益生菌法等[4]。

Th17是近几年发现的Th细胞亚群，由初始T细胞在TGF-β、IL-6、IL-1β和IL-23刺激后分化而来[5]，并通过其特征性细胞因子IL-17、IL-21、IL-22发挥生物学作用。

TH17细胞与过敏性疾病

作者：上海市交通大学附属第一人民医院检验科王娟，李莉Th1/Th2平衡是免疫反应分子机制和/或疾病研究的重要发现,在过去的20年被广泛视为重要的免疫调节“模式”,用以解释和研究基础免疫和免疫性疾病的发生机制。

新近发现的Th17细胞为揭示Th1/Th2模式不能解释的免疫现象提供了新的依据。

Th17细胞是以产生白细胞介素17(IL-17)类细胞因子为特征的CD4+T辅助细胞亚群, Th17细胞及其产生的细胞因子已被证实在多种炎症性疾病如过敏性哮喘、实验性自身免疫性脑脊髓炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、炎症性肠病及真、霉菌感染等的发生中发挥着重要作用。

一、IL-17细胞因子和Th17细胞1.IL-17细胞因子家族 IL-17细胞因子家族成员包括IL-17A(又称IL-17)、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(即IL-25)和IL-17F,其中对IL-17A、IL-17E和IL-17F的表达和功能已有较清晰的认识。

IL-17A主要由CD4+记忆性T细胞产生,分泌IL-17A的CD4+T细胞亚群称为Th17细胞。

而γδT细胞、自然杀伤性T(nature killer T,NKT)细胞、自然杀伤性(nature killer,NK)细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞也可产生IL-17A。

因此,IL-17A既是天然免疫也是适应性免疫细胞产生的效应因子,在2种免疫反应间起桥梁作用。

IL-17A是引起中性粒细胞迁移、募集和激活的关键细胞因子,可诱导多种细胞产生细胞因子[如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimutaing factor ,GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)]、趋化因子[如CXC 趋化因子配体(CXC chemokine ligand,CXCL)1、CXCL8、CXCL10等]及金属蛋白酶,参与多种炎症性疾病的炎症反应。

th17细胞

利用TH17细胞治疗多发性硬化
• 治疗多发性硬化等炎症性肠病
• 利用TH17细胞产生IL-17A和IL-17F，增强炎症反应
• 利用抗IL-17A和抗IL-17F抗体抑制炎症反应
05
TH17细胞研究的发展趋势与挑战
TH17细胞研究的未来发展方向

深入探讨TH17细胞的分化机制
• 揭示转录因子和信号通路在TH17细胞分化中的作用

⌛️
TH17细胞研究面临的挑战

TH17细胞分化的调控机制尚不完全明确
• 需要进一步研究转录因子和信号通路在TH17细胞分化中的作用
• 需要研究表观遗传调控在TH17细胞分化中的作用

TH17细胞在疾病中的作用机制尚不完全明确
• 需要进一步研究TH17细胞在自身免疫性疾病、炎症性疾病等疾病中
的作用机制
• 激活RORγt的表达
02
TGF-β信号通路
• 促进SMAD3的磷酸化
• 激活RORγt的表达
03
JAK-STAT信号通路
• JAK1和JAK2介导IL-6信号通路
• STAT3在TH17细胞分化中起关键作用
TH17细胞分化的调控策略
促进TH17细胞分化的策略
• 使用IL-6和TGF-β的激动剂

信号通路在TH17细胞分化中的作用
• IL-6和TGF-β信号通路促进TH17细胞分化
• JAK-STAT信号通路在TH17细胞分化中起重要作用
⌛️
表观遗传调控在TH17细胞分化中的作用
• DNA甲基化、组蛋白修饰等调控TH17细胞分化
TH17细胞分化的信号通路
01
IL-6信号通路
• 性疾病

Th17细胞的研究概况

Th17细胞的命名
• Th17细胞的命名主要基于其分泌的细胞因子的不同
• Th17细胞分泌的细胞因子除了IL-17 (IL-17A) 外，还包括IL-17F，以及IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α 等细胞因子 • 不同的T细胞亚群也有相对特异性的Marker,主要是它们的转录调控因子的不同. 如Th1细胞为T-bet, Th2细胞为GATA3, Tregs为FoxP3,目前证实Th17细胞的特异性转录调控因子为ROR-γt 等
• 在Th17细胞分化过程中具体的作用机制被认为与STA T3有关
Th17细胞的分化
3. IFN-γ、IL-4是Th17细胞分化的抑制因子 • IFN-γ和IL-4能够分别诱导Th1细胞和Th2细胞的分化。在体外细胞培养中发现，当存在抗IFN-γ单抗时, 大多数的初始型CD4+T细胞都向着Th17细胞分化; 阻断IL-4的作用后也能观察到类似的结果 • 另有研究者发现, IFN-γ和IL-4可以干扰TGF-β1诱导Th17 细胞分化的过程 • IFN-γ可以抑制TGF-β1 信号下游的Smad3的磷酸化作用, 从而阻断了Smad3对TGF-β1受体的影响
Th17细胞的生物学功能
现在已发现IL-17与抵抗多种病原体的感染有关。 • IL-17与其所激发的中性粒细胞具有防御肺炎杆菌或脆弱类杆菌等革兰阴性细菌的作用 • 在疏螺旋体和结核分枝杆菌感染时, 人类和鼠类T 细胞的IL-17都得到了优先表达 • 百日咳杆菌的某些产物可以优先激发IL-23, 能使树突状细胞的IL-23 水平远高于IL-12,从而为Th17细胞的扩增以及执行生理功能提供了有利条件。 • Th17 细胞还被发现有抑制肠道炎症性疾病的作用
Th17细胞的分化

支气管哮喘患者血清中 Th17细胞相关细胞因子的检测及意义

支气管哮喘患者血清中 Th17细胞相关细胞因子的检测及意义安霞;叶伶;龚颖;杨冬;李丽;金美玲【摘要】Objective:To compare the serum levels of transforming growth factor-β1 (TGF-β1),interleukin-17 (IL-17),inter-leukin-23 (IL-23)in patients with bronchial asthma at different degrees of airway obstruction after standardized treatment,in order to explore the significance of TGF-β1,IL-17,IL-23 in airway remodeling in patients with asthma.Methods:Ninety-one asthma patients,who underwent standardized treatment for at least three months,were recruited by applying control study.By using FEV1%pred as grouping criterion,the 91 patients with asthma were divided into the mild asthma group (FEV1%pred≥80%),the moderate asthma group (60 %< FEV1 %< 80%)and the severe asthma group (FEV1 %≤60%).In addition, 27 healthy people were selected as control group.The serum levels of TGF-β1,IL-17,and IL-23 in each group were monitored and compared with each other.Results:pared with that in the control group,the serum levels of TGF-β1 in asthma group were higher,while the levels of IL-17 were lower.There was no significant difference in serum IL-23 level between the two parison were done among the asthma groups.There were significant differences in serum levels of TGF-β1 and IL-17 between mild asthma group and moderate-to-severe asthma group (P <0.05 ),while there were no significant differences between moderate group and severe group.3.Serum IL-17 level was correlated negatively with TGF-β1 level. FEV1%pred was correlated negatively with serum TGF-β1 leveland positively with serum IL-17 level,while it had no correla-tion with serum IL-23 level.Conclusions:In patients with asthma,the serum TGF-β1 level is negatively correlated with FEV1%pred,which indicates that TGF-β1is an important index for airway remodeling.The serum levels of IL-17 in patients with asthma is lower than those in healthy people.Furthermore,the decrease of serum IL-17 level is more significant while the obstruction is worse.The probable answer is that persistent airway inflammation inhibits secretion and expression of IL-17,so that the expression of IL-17 declines in phase with severe impairment of pulmonary function and severe airway remodeling.%目的：比较规范治疗后的气道阻塞程度不同的支气管哮喘（哮喘）患者血清中的转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）、白细胞介素-23（interleukin-23，IL-23）等指标，探讨上述指标在哮喘患者气道重塑中的意义。

辅助性T细胞17(Th17)的特征及其在自身免疫性疾病中的作用

子，每个因子都是通过激活ＳＴＡＴ３来实现其功能的，相对有效性是由该因子的受体数目决定的。其
Ｉ一３受体不表达在初始Ｃ４Ｌ２ＤＴ细胞上，只表达在
分化依赖于本身基因的调控和Ｔ细胞或其他造血
过程。Ｔｈ７细胞有异于Ｔｈｌｌ细胞的原因是由于缺
被发现，开展了很多相关研究，主要分泌Ｉ一并其Ｌ
１Ａ、Ｉ一７Ｉ一１和Ｉ一２。７Ｌ１Ｆ、Ｌ２Ｌ２
Ｔｌｈ７细胞的分化和维持初始Ｃ４ＤＴ细胞
Ｔ１ｈ７细胞的生长和存活＿。但是，一步的研究７］进
也发现，一３只能作用于已经表达Ｉ一３受体的记Ｉ２ＬＬ２
忆性Ｔ细胞，对诱导幼稚细胞分泌Ｉ一７无效＿］Ｌ１６。
相反，Ｌ６和ＴＧＦ８Ｉ－一１作用于初始Ｃ４ＤＴ细胞，驱
Ｔｈ７细胞上，１维持Ｔｌｈ７的生存＿；反，Ｌ６受体９相Ｉ一
主要表达在初始Ｃ４ＤＴ细胞上，以诱导Ｔｈ７的可ｌ形成。ＴＮＦａＴｌ — 对ｈ７分化的作用颇有争议。有数
据表明，ＴＮＦａ是一个重要的负调控因子，仅中 — 不
乏ＩＮ一Ｆ７和Ｔ—ｅ转录因子及其靶标Ｈ１＿。ｂｔＸ９］
Ｉ一、Ｌ２Ｌ６Ｉ一１和Ｉ－３是同一个家族的细胞因Ｌ２

抗原特异性Th17细胞的分化与调节

抗原特异性Th17细胞的分化与调节目的：探讨影响抗原特异性Th17细胞分化和调节的因素。

方法：T细胞受体转基因小鼠（DO11.10）CD4+T细胞，与同背景正常小鼠的脾细胞混合，经OV A多肽刺激后，在不同的Th17极化的培养条件下，观察Th17细胞及细胞因子的产生。

结果：单纯OV A抗原刺激主要诱导特异性Th1型反应，在TGFβ和IL6存在的条件下，主要诱导Th17反应；当加入IL23之后，促进了Th17细胞的分化。

阻断了IFNγ和IL4之后，Th17细胞的百分率明显增加。

LPS可以促进Th1型细胞因子的产生，但对抗原特异性Th17细胞的分化没有明显的促进作用。

结论：抗原特异性Th17细胞是与Th1、Th2相对独立的细胞亚群，TGFβ、IL6和IL23可诱导或促进Th17的分化，而Th1和Th2细胞因子抑制其分化。

关键字：Th17T细胞亚群流式细胞术细胞因子按照CD4+T细胞分化和功能特征可以将其分为Th1和Th2细胞[1]。

Th1型细胞通过分泌干扰素γ（IFNγ）等细胞因子介导细胞免疫；Th2型细胞通过分泌IL4等细胞因子介导体液免疫[2，3]。

Th1型免疫反应失调，出现组织损坏和慢性炎症，而Th2型免疫反应失调，则导致过敏和哮喘疾病的发生[3]。

近年来，在类风湿关节炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎等自身免疫病和过敏原特异性反应研究中发现一种特殊的辅助型T细胞。

这群CD4+T细胞同传统Th1和Th2细胞具有明显不同的特征：主要分泌IL17，表达控制其分化的独特的转录因子——孤独受体（orphan nuclear receptor，RORγt）[4]，因此命名为Th17细胞。

目前对于此细胞亚群的研究主要集中于其在疾病的发生发展中的作用，而探讨影响抗原特异性Th17细胞的诱导和分化因素的报道较少。

为此，我们研究了体外培养体系中，初始抗原特异性TCRTg CD4+T细胞，经抗原刺激后，探讨影响Th17细胞的诱导、分化和调节的因素。

Th17细胞大动脉粥样硬化性脑梗死中的表达及意义的开题报告

Th17细胞大动脉粥样硬化性脑梗死中的表达及意义
的开题报告
一、研究背景
大动脉粥样硬化性脑梗死是一种常见的神经血管疾病，已成为导致
人类死亡和致残的主要原因之一。

尽管在过去几十年中，已针对其病因
和临床治疗方法进行了广泛的研究，但其发生机制具有复杂性和多样性。

Th17细胞是一类重要的免疫细胞，其参与及调控多种自身免疫病和炎症性疾病的发生和发展。

最近的研究发现，在大动脉粥样硬化性脑梗
死中，Th17细胞的数量和活性均有显著变化，但其在疾病发生和机制中
的具体作用和调控机制尚不清楚。

二、研究目的
本研究旨在探究Th17细胞在大动脉粥样硬化性脑梗死中的表达及其在疾病中的作用机制，以期为疾病的防治提供新的思路和参考。

三、研究方法
1. 免疫组织化学：采集大动脉粥样硬化性脑梗死患者脑组织标本，
先进行常规病理学检查，然后用免疫组织化学方法检测Th17细胞的表达情况。

2. 实时荧光定量PCR：采集大动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血样本，提取RNA并逆转录为cDNA，然后运用实时荧光定量PCR技术检测Th17细胞分泌因子的表达情况。

3. 细胞实验：培养大动脉粥样硬化性脑梗死患者的外周血单个核细胞，检测其Th17细胞分化和其分泌因子的活性，并进行相关药物干预试验。

四、研究意义
本研究的结果将有助于深入了解大动脉粥样硬化性脑梗死发生和发展的新机制，并为该疾病的防治提供新的思路和途径。

此外，该研究对于Th17细胞在疾病中的作用机制的探索，对于自身免疫性疾病和炎症性疾病的研究将具有广泛的应用前景。

快速体外分离、长期培养人Th17细胞

快速体外分离、长期培养人Th17细胞方法1.Subject全血2.CD4+T细胞浓缩采用RosetteSep（StemCell Technologies，Canada）进行阴性选择得到浓缩CD4+T细胞。

建立标准密度梯度离心，分离出淋巴细胞3.CD4+T细胞刺激将浓缩的CD4+T细胞悬浮在RPMI1640培养基中（Sigma），包含青霉素/链霉素，L-谷氨酰胺，HEPES缓冲液和10%小牛血清（R10），浓度为1×106个细胞/ ml.含 3×106个细胞的3mlR10，在15ml Falcon管中，用每毫升含4μL（1mg/ml）PMA和2μL（1mg/ml）伊沃诺霉素（AG Scientific，San Diego，CA）的细胞溶液刺激。

继而加入总量3μL的包含CD49d （1mg/ml）和CD28（0.5mg/ml）的共刺激抗体（BD Biosciences）。

随后细胞在37℃、5%CO2条件下孵化3个半小时。

阴性对照采用相似方法，但用R10替换PMA和伊沃诺霉素。

为了用细胞内细胞因子标记法测量IL-17产量，浓缩的CD4+T细胞用10μL Brefeldin A（1mg/ml）刺激。

4.IL-17捕捉复合物的准备IL-17捕捉复合物由2个生物素标记的抗体组成，2个抗体通过一个抗生物素蛋白分子连接。

直接连在T细胞表面CD45分子的抗体与IL-17抗体配对。

2μL生物素标记的CD45抗体（clone H130）（Caltag，Invirtrogen，CA）和20μL生物素标记的IL-17抗体（0.5mg/ml）（clone：eBio64DEC17）（ebiosciences，CA）混合加入eppendorf管，并彻底漩涡。

然后，加入2μL未作标记的5mg/ml的生物素（Invitrogen，CA），并立即充分混匀。

复合物在室温下孵化10分钟，使用前再次漩涡。

5.IL-17体外捕获分析被刺激过的细胞用含有2%小牛血清（2%FCS/PBS）的冰冻PBS（Cellgro ，Mediatech，V A）,冲洗，以500×克离心10分钟成小球，上清液被完全吸出。