第四篇 动物病毒学第五版

四、病毒鉴定
（一）病毒提纯
病毒提纯
化学法
离心法
层析法
硫酸铵沉淀法
超速离心法
离子交换层析法
聚乙二醇沉淀法
密度梯度离心法
亲和层析法
氯仿去脂法
（二）形态特征观察：电镜
1、透射电镜观察：提纯浓缩
2、扫描电镜观察
（三）病毒理化特性鉴定
理化特性 鉴定
核酸类型
有无囊膜
抗酸性
浮密度
G+C克分 子%
DNA或 RNA
第二章 病毒分离鉴定技术
一、取材
取病毒存在较多的部位，如：粪、血、肝、脾
等。
无菌污染的直接检测，有菌污染的加双抗
1000~2000单位/ml处理或过滤除菌。
二、检查包涵体
存在的细胞种类
存在位置：胞浆或胞核。
染色性：
三、病毒分离
1、接种实验动物或本动物 2、禽胚接种 3、单层细胞接种:原代细胞、传代细胞
（五）血清学鉴定
1、已知抗体鉴定病毒抗原 补体结合反应 中和实验 对流电泳 琼脂扩散 ELISA 荧光抗体技术 血凝和血凝抑制 2、已知病毒抗原测定血清抗体及效价
（六）病毒分子生物学鉴定
分子生物学鉴定
聚合酶链反应
核酸杂交
DNA芯片
DNA病毒
RNA病毒
DNA杂交
PCR
RT-PCR
RNA杂交
套式PCR
（五）番鸭细小病毒
危害1－3周龄番鸭，又名“三周病”。 症状和病变与小鹅瘟相似。
（六）牛细小病毒
引起犊牛腹泻。
该病毒具有细小病毒属的特性，但血凝特性较
强，可凝集多种动物的红细胞。该病毒不与本属
的其他病毒发生交叉血清学反应。
病毒可在胎牛肾细胞上生长，可用胎牛肾细胞
从粪便中分离病毒，以血凝实验和中和实验鉴定。
MDV
（三）禽传染性喉气管炎病毒
鸡传染性喉气管炎。
咳嗽、气喘、流涕、呼吸困难。
喉头、气管出血，炎性分泌物。
9－12日龄鸡胚尿囊膜接种分离病毒。
鸡传染性喉气管炎活疫苗免疫。
鸡传喉病毒（ILTV）
ILT
（四）鸭瘟病毒
1、病毒特征：引起鸭的鸭瘟，急性热性败血症。在 核内核衣壳直径 95~105 nm 。在胞浆中形成囊膜 后的直径为160~180，为球形的成熟病毒颗粒。在 鸭胚或鸭胚成纤维细胞上生长，引起细胞病变。 2、诊断 ⑴病毒分离：鸭胚尿囊腔接种。 ⑵病毒鉴定：中和实验、琼扩、ELISA 3、免疫：鸭瘟弱毒疫苗、鸭瘟鸭肝炎二联弱毒苗。 保护期可达一年。
犬细小病毒
（二）猫全白细胞减少症病毒
原名猫瘟热病毒。主要感染猫科动物，如猫、水貂、
虎、豹、狮，怀孕最后2周的胎猫及出生后2周的猫崽最
易感。 以高热、呕吐、白细胞严重减少、肠炎特征。病毒仅 在4OC对猴、猪红细胞有凝集作用，能在猫肾、肺、睾 丸细胞上生长。用上述细胞分离病毒，进行HA－HI实
验诊断（用猪红细胞）弱毒苗和灭活苗。
猫全白细胞减少症病毒
（三）猪细小病毒
引起猪繁殖障碍，公猪繁殖力下降，母猪流产、 死产、胎儿畸形，是由于病毒经胎盘传递给胎儿 引起， 。 HA－HI实验检测胎儿组织悬液中病毒，用豚鼠 红细胞。 可用弱毒苗或灭活苗免疫。
（四）鹅细小病毒
小鹅瘟。雏鹅急性肠炎以及肝肾心等实质器官 炎症。 与本属其他病毒无血清交叉反应。 对环境的抵抗力较强。 在鹅胚、鸭胚上生长，用鹅胚分离病毒，进行 病毒中和实验，也可用电镜观察病毒。 用小鹅瘟灭活苗免疫母鹅，使雏鹅获得较高水 平的母源抗体而获得保护。小鹅瘟血清、小鹅瘟 卵黄抗体可用于预防和治疗
2、诊断
⑴取材：新鲜病变组织或羽毛囊
⑵鸡胚培养：6日龄鸡胚卵黄囊接种、在绒毛尿囊膜上形
成病变。
⑶病毒中和实验
⑷琼脂扩散：标准血清检测羽毛囊中病毒抗原。
3、免疫
可用HVT冻干疫苗（火鸡疱疹病毒）预防。
马立克病毒
MDV
MDV的双核衣壳颗粒
MDV
神经肿大
心肿瘤结节、腺胃肿大
MDV
肾脏肿大
心、肺、肝、脾上肿瘤结节
内容提要
第一章
病毒概论
个体微小、无细胞结构、只含一种核酸(RNA或
DNA），专性细胞内寄生。
一、病毒大小：纳米（nm），20－300nm 。电
镜观察。大部分病毒能通过细菌滤器。
二、病毒形态
（一）砖形：痘病毒
（二）弹形：狂犬病病毒
（三）球形：大多数人畜病原病毒
（四）杆形：大多数植物病毒
（五）蝌蚪形：寄生于细菌的病毒，又称噬菌体。
1、疱疹病毒甲亚科 伪狂犬病毒
疱疹病毒科
禽传染性喉气管炎病毒 马立克氏病毒
鸭瘟病毒
2、疱疹病毒乙亚科
3、疱疹病毒丙亚科
二、共同特征
1、形态：病毒球形，大小约150nm。核酸为单分子
双股线状DNA，衣壳20面体立体对称，有囊膜。 2、致病特点 通过交配、舔等密切霎触而传染。 持续感染、代代相传、周期性排毒。
转录出mRNA，翻译成蛋白质。 转录出mRNA，是翻译出蛋白质的关键。 DNA病毒转录mRNA： 单股正股RNA病毒：自身RNA作为mRNA。 双股 RNA 病毒、单股负股 RNA 病毒：依赖自身 携带的RNA依赖的RNA聚合酶，形成mRNA。
病毒核酸合成
（四）病毒粒子装配
核酸芯髓外装上蛋白质衣壳，形成核衣壳。
各种病毒的形态和大小
大肠杆菌噬菌体
大肠杆菌噬菌体
大肠杆菌噬菌体
三、病毒结构与化学组成
（一）核酸芯髓：由核酸组成，一种病毒只含一种
核酸，或DNA，或RNA，有单链或双链。
（二）蛋白质衣壳：按一定规则排列的壳粒组成，
壳粒排列规则有：螺旋对称；二十面体立体对称。 核酸芯髓与衣壳统称核衣壳。 （三）有的病毒核衣壳外有脂蛋白囊膜，有的囊膜 上有许多突出物，称囊膜粒。有囊膜的病毒对乙 醚、氯仿敏感。
第二节
圆环病毒科
鸡传染性贫血病病毒 一、病毒特征 病毒球形，大小约22nm，基因组为单分子线状 单股DNA，20面体立体对称，无囊膜。 二、致病性 鸡传染性贫血病。红细胞生成减少而贫血，血 液稀薄如水，凝集缓慢。 三、诊断 直接免疫荧光抗体技术或中和实验。
鸡传染性贫血病毒
第五章 反转录病毒
第一节 反转录病毒科的分类及特性 第二节 禽白血病／肉瘤病毒 第三节 慢病毒属
三、重要动物病毒
（一）伪狂犬病病毒 1、一般特征：多种动物的伪狂犬病。表现流产、神经症状。 大小约 120~200 。在神经细胞核内形成包涵体。可在猪、
牛、羊等肾细胞上生长，并形成空斑病变。
2、诊断 ⑴动物实验：家兔皮下注射，接种部位表现奇痒。 ⑵分离培养：猪、兔肾细胞或鸡胚培养。 ⑶免疫诊断：对流免疫电泳、荧光抗体技术、 ELISA
氯仿处理
酸性环境 处理
密度梯度 离心
单股或双 股
乙醚处理
（四）病毒感染单位测定
病毒感染单位 测定 空斑试验 空班形成单位 /ml（CFU） 终点稀释法
细胞法
鸡胚法
动物法
半数感染量 （TCID50）
半数致死量 （ELD50）
半数感染量 （EID50）
半数致死量 （LD50）
半数感染量 （ID50） 半数反应量 （RD50）
3、少数畜禽病毒，装配后不释放，称为病毒潜在感染。不
排毒，可维持数年。受外界因素影响才排毒，出现症状， 称为慢病毒。
病毒繁殖
六、病毒干扰现象和干扰素
（一）干扰现象：一种病毒感染畜禽细胞后，能产生抑制另 种病毒感染的作用，使另种病毒不能再感染，称为病毒干 扰现象。病毒干扰的原因有三： 1、两种病毒吸附时需要细胞膜上相同受体。 2、一种病毒复制时使用了细胞组成成份。 3、一种病毒在细胞内产生了干扰素。
第一节
一、分类
反转录病毒科的分类及特性
反录病毒科
甲型反录病毒属
乙型反录病毒属
丙型反录病毒属
丁型反录病毒属
慢病毒属
泡沫病毒属
禽白血病病毒
牛白血病病毒
人免疫缺陷病毒
马传染性贫血病毒 梅迪／维士那病毒
二、共同特性
病毒球形，大小约80－100nm。
基因组为核酸与蛋白质的复合物，呈螺旋对称 状。基因组为二倍体，由单分子线状的正股单股 RNA组成。衣壳20面体立体对称。有囊膜。 含反转录酶。反转录酶同时具有RNA依赖的
（三）对乙醚、氯仿敏感性 有囊膜的病毒，对乙醚、氯仿敏感；无囊膜病毒可用 其提纯。 （四）核酸分子量 相同或相近病毒，核酸分子量也相同或相近。 （五）浮密度 提纯病毒悬浮于某种事先制成一定密度梯度液体（氯 化铯或蔗糖）表面，底部密度大，上部密度小。超速离 心后，病毒存在于液体的某一层中，该层溶液密度称为 病毒浮密度。大于1小于2，不同病毒浮密度不同。
DPV：核内无囊膜病毒与胞浆有囊膜病毒
第三节
一、共同特征

腺病毒科
病毒球形、80－100nm，20面体立体对称，无 囊膜。 可凝集动物红细胞。 二、主要病毒
（一）犬传染性肝炎病毒：引起犬传染性肝炎。表 现急性肝炎症状。可用ELISA、HA－HI、中和实 验诊断。犬腺病毒2型弱毒苗预防。
（二）鸡减蛋综合症病毒：引起鸡减蛋综合症，表现产蛋
二、形态
砖形、大小约250nm*250nm*200nm、线状双股DNA、 核衣壳复合对称、有囊膜。 三、抵抗力：不强。 四、致病性：皮肤伤口或蚊虫叮咬感染。常见有鸡痘、猪 痘、绵羊痘。 五、诊断：鸡胚尿囊膜上生长，形成痘斑。同种动物单层 细胞（肾、胚胎、睾丸细胞）上良好生长。
鸡痘病毒
第二节
一分类
套式RT-PCR
斑点杂交
原位PCR
原位杂交
荧光定量PCR
第一节
痘病毒科
一、分类 1、脊椎动物痘病毒亚科：分8个属。 （1）禽痘病毒属：鸡痘、鸽痘。 （2）正痘病毒属：痘苗、牛痘。 （3）猪痘病毒属：猪痘 （4）山羊痘病毒属：山羊痘、绵羊痘 （5）兔痘病毒属 （6）副痘病毒属 （7）软疣病毒属 （8）雅巴痘病毒属 2、昆虫痘病毒亚科：3个属。
率大幅下降、产软壳蛋、薄壳蛋。用鸡胚分离病毒，
HA－HI或中和实验诊断。鸡减蛋综合症油佐剂苗预防。
（三）鸭腺病毒
引起鸭腺病毒病。表现产蛋率大幅下降。可用鸭腺病
毒蜂胶苗预防。
第四章
单股DNA病毒
第一节 细小病毒科 第二节 圆环病毒科
第一节
细小病毒科
一、共同特征 病毒球形、大小约25nm。核酸为单分子线状单股DNA， 衣壳20面体立体对称，无囊膜。 几乎都具有血凝特性，特别易凝集豚鼠和人O型红细胞， 其次猴、仓鼠、鼠、猫、犬、猪、马、鹅、鸭、鸡的红细 胞。对环境具有强大的抵抗力。 二、主要病毒 （一）犬细小病毒 犬细小病毒病。 肠炎、白细胞减少。 HA－HI实验诊断（猪红细胞）。 灭活苗和弱毒苗。
3、免疫：灭活苗、弱毒苗、基因缺失疫苗。
伪狂犬病毒
伪狂犬病毒神经细胞核内包涵体
（二）马立克氏病毒（MDV）
鸡、火鸡马立克氏病，表现淋巴细胞增生和肿瘤形
成。
1、病毒特征 上皮细胞中：无囊膜，85~100 nm，抵抗力很弱，脱 离活细胞即死亡。 羽毛囊上皮细胞中：形成囊膜，为完整病毒粒子， 130~170 nm，抵抗力较强，较强致病力。 鸡胚或鸡胚肾细胞上生长。
病毒结构
病毒结构
四、病毒的理化特性
（一）包涵体：细胞内繁殖后形成的病毒集落。光 镜能见到。 能否形成包涵体、形状、大小、位置（核内或 质内）、染色性（嗜酸性或嗜碱性）、在那种细 胞（NC、上皮细胞）形成等具有规律性，作为病 毒病初步诊断。 （二）血凝性 有些病毒能凝集某些动物的红细胞，称为病毒 血凝性。 病毒血凝实验和血凝抑制实验，诊断病毒。
DNA聚合酶、 DNA依赖的DNA聚合酶、整合酶、
RNA酶的功能，由该分子的不同部位执行不同的
酶功能。
第二节
禽白血病／肉瘤病毒
是一群病毒，分为A－J共10个亚群。 引起禽各种传染性肿瘤，如鸡白血病、淋巴细 胞增多症、成红细胞增多症、成髓细胞增多症、 髓瘤、内皮瘤等。 A－D、J亚群为外源性，E亚群为内源性，宿主 为鸡。蛋鸡中A亚群最普遍，B亚群次之，C、D亚 群致病力低，J亚群引起肉鸡髓细胞瘤，危害严重。 F、G亚群宿主为雉；H亚群为斑鸠；I亚群为鹌 鹑。 垂直传播。
五、病毒繁殖
（一）吸附：病毒粒子与细胞表面特异性受体结合，吸附在
易感细胞表面。无特异性受体的动物不感染。
（二）核酸进入
1、只核酸进入，如噬菌体，肠病毒（无囊膜）。
2、核衣壳进入胞内，然后裸露核酸，如疱疹病毒。
3、整个病毒进入胞内，胞内去囊膜和衣壳，裸露核酸，
如牛瘟病毒。
（三）病毒成分形成
以病毒核酸为模板，大量合成 DNA 或 RNA ，并
DNA病毒在核内装配，RNA在胞浆中装配。 有囊膜病毒在病毒释放经过核膜、细胞膜时覆 盖上部分核膜、细胞膜而形成囊膜。有时少装某 段核酸，形成缺损性病毒。
（五） 病毒粒子释放
1、噬菌体在细菌内装配，几乎整个细菌充满噬菌体，菌体 全部裂解而释放。 2、多数畜禽病毒，边装配边释放。不一定引起细胞死亡、 破裂，而表现细胞变形，胞质颗粒化、核浓缩、核裂解等。 单层细胞培养出现空斑。
（二）干扰素：干扰素是细胞受病毒感染后所产生的一种低 分子蛋白质。干扰素可诱导细胞产生一种抗病毒蛋白而抑 制病毒合成。干扰素具有动物种属特异性，即某种动物产 生的干扰素只能用于该动物。
七、病毒的遗传和进化（自学）
（一）突变
（二）诱变
（三）基因重组
（四）病毒基因产物间的相互作用
（五）遗传变异与病毒进化