第四篇 动物病毒学第五版
动物免疫学第五版
第二节 抗体产生一般规律
一、初次反应：抗原首次进入机体所产生的免疫反应。特 点： 1、有一定潜伏期 抗原进入机体到血清中出现抗体的时间，一般活病 毒2天，活的细菌3-5天，类病素2-3周,蜂胶灭活苗5－7 天，油苗10－14天。 2、抗体量不高，只能达到最大量的20-30%。 3、先产生IgM，将消失时IgG达最大量，再过2周出现 IgA。
胸腺的免疫功能；单克隆抗体技术；基因工 程疫苗。
三、免疫基本特性
1、识别特性：精确地识别自身和非自身。 2、特异性：某种抗原剌激机体产生的免疫力，只
针对相应物质。 3、记忆性：免疫记忆。相同抗原物质再次进入时，
将其更快更有效地消灭和排除。
四、免疫基本功能
1、抗传染 阻止进入；抑制体内繁殖；消灭繁殖的微生物 过高：传染性变态反应；过低：反复发病。
（3）杀伤性Tc（Killer T cell：TK）：
占Tc总数的50%左右。识别和杀伤靶细胞。Tk的作用需Th的 活化。
二、吞噬细胞
包括血液中嗜中性粒细胞、单核细胞；组织中 巨噬细胞。 （一）来源：骨髓多能干细胞。
（二）分化
骨髓多 能干细胞
红细胞系：红血球 原血细胞系 粒细胞系：嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、
（3）ADCC效应
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibody dependent cell mediated cytotoxicity)。
2、 NK细胞(natural kill cell)
（1）细胞特点和数量：占淋巴细胞数不超过 10%。可不依赖抗体而起杀伤作用，故又称自发 的细胞介导的细胞毒作用。 （2）作用：杀伤肿瘤细胞，杀伤力比Kc弱。不 依赖抗体，在早期发挥作用。
动物病毒学重点相关资料
说明：红色加下划线的是罗老师最后上课说的（基本上包括），红色的是老师平时上课时说的要掌握的，大家对着课件划一划吧，若有遗漏的，可以和我说哈要强调的是DNA病毒和RNA病毒的分类很重要：(如下)具有分段基因组的病毒：正粘病毒科：布尼病毒科：砂粒病毒科呼肠孤病毒科：双RNA病毒科：用于病毒的分离与培养：细胞培养、鸡胚和实验动物病毒有两种形式：一是存在于细胞外的具有感染性的病毒粒子，二是存在于细胞内的可以增值的基因组天花是人类历史上第一个用疫苗消灭的传染病。
根据病毒的宿主性质将其分为：✓动物病毒(animal virus)✓植物病毒(plant virus)✓细菌病毒(bacteria virus), 即噬菌体(bacteriophage or phage)病毒的结构组成衣壳（capsid）：在病毒的结构组成中，包围着病毒核酸及其结合蛋白的蛋白质鞘，由许多原体以次级键结合形成，具有保护病毒核酸的作用，同时也是病毒核酸由一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞的工具。
包膜(囊膜)（envelope）: 覆盖在病毒核衣壳外的脂蛋白膜。
其组成成分主要来自宿主细胞，是病毒的核衣壳在感染细胞内穿越核膜或在感染细胞表面“出芽”时由细胞膜获得。
病毒衣壳的对称形式1、二十面体对称（icosahedral symmetry）2、螺旋对称(helical symmetry)3、复合对称壳体(complex symmetry)1、二十面体对称（icosahedral symmetry）5、3、2构型，或5、3、2次轴对称二十面体对称有12顶、20面和30棱✓以顶点为轴旋转72°，其形不变，要转5 次复位✓以面为中心，旋转120°，其形不变，要转3次复位✓以棱为中心，旋转180°，其形不变，要转2次复位故又称5、3、2构型，或5、3、2次轴对称✓DNA病毒：虹彩病毒、疱疹病毒、腺病毒、乳多空病毒、细小病毒、圆环病毒、非洲猪瘟病毒、嗜肝DNA病毒✓RNA病毒：呼肠孤病毒、双RNA病毒、小RNA病毒、杯状病毒、戊肝病毒、披膜病毒、黄病毒、动脉炎病毒、反转录病毒2、螺旋对称(helical symmetry)副流感病毒的破碎病毒粒子，箭头所指为螺旋对称的核衣壳，右图为模式图呈螺旋对称的多为有囊膜的病毒，在动物病毒中螺旋对称的病毒均属有囊膜的单股RNA病毒。
动物病毒学课程论文
动物病毒学课程论文王小小：电镜技术在动物病毒检测中的应用电镜技术在动物病毒检测中的应用王小小摘要：对于常见动物病毒的检测，常使用的方法是血清学检测、生物学接种及病原分离等。
但对于一些新生疫病的检测，尤其用血清学检测时，于手中不一定具备与该疫病相对应的抗体，往往不能马上进行检测。
为了及时控制和扑灭新生疫病，必须尽快地确定病原。
电子显微技术问世及其在病毒检测中的应用解决了这一难题。
在国内外学者研究的基础上，就应用电镜技术检测动物病毒过程中的取样部位及时间、制样方法、电镜下病毒的识别方法及常见病毒的形态特征和鉴别要点进行归纳总结，为同行们使用电镜技术检测动物病毒提供一定的理论基础。
关键词：电镜技术，动物病毒，取样，制样，检测前言已有学者应用电镜技术对形态特征性强的动物病毒感染的动物病毒病进行了诊断[1]。
尤其对于混合感染的和新发现的病毒病的检测，电镜技术优于优于其他任何一种方法[2]。
虽然常规的血清学特异性诊断是比较快速和准确的,但一次只能检出一种病原,且对于新生疫病,当手头上不具备相应的血清时,更是束手无策[3]。
若使用电镜进行检测,凡在病料中有什么样的病原就能检出什么病原。
因此，对病料的取样部位及时间、制样方法、电镜下病毒的识别方法的探索，对于使用电镜技术检测动物病毒具有一定的理论意义及现实指导意义。
1.病料的取样部位及时间[2,3] 要想获得高检出率，病料的取样部位及时间是关键。
取材应根据各种病毒在动物体内分布的位置特点来确定，采集相应的组织或在特定部位取材,且要力求准确。
例如，鸡传染性法氏囊病病毒采取感染鸡的法氏囊粘膜层，猪传染性胃肠炎病毒最好取感染仔猪的小肠粘膜层等。
如取材的组织或部位不当,则很难观察到病毒。
另外所采集的样品尽量以最快的方式送往实验室。
取材时间应根据观察目的而定,一般在感染中期容易发现病毒，但也有的病毒在感 1 王小小：电镜技术在动物病毒检测中的应用染的初期也能较容易地找到病毒。
家畜病理学第五版第一章
1、疾病概论一、正常机体具有的特征⒈各器官系统机能活动协调。
⒉与外界环境保持动态平衡。
而机体在致病因素作用下，引起机体以上协调和平衡能力被破坏，导致：致病因素对机体损伤，机体对抗致病因素的抗损伤的复杂的斗争过程。
疾病：机体在致病因素作用下所发生的损伤与抗损伤的斗争过程；表现为机体代谢、形态的变化，畜体生产能力下降、经济价值降低。
二、致病因素与抗病因素致病因素：(一)生物性因素病原性微生物（病毒、支原体、立克次体、细菌、螺旋体、霉菌）寄生虫（原虫、蠕虫）所引起的疾病有一定潜伏期，有一定规律的病程，一定器官特异性病变，有传染性。
㈡物理因素：是疾病的启动因素。
机械力（创伤、震荡、骨折、脱臼、内源性肿瘤、包囊压迫）与力强度、力性质及力作用的部位、范围、持续时间有关。
热射病：高温高湿对全身的作用，日射病：脑的温度升高引起（波长600-1000nm的红外线可穿透颅骨）光照病：动物体内有光感物质，如卟啉、荧光素、伊红、叶绿素存在，则机体对普通光线感受过敏，引起皮肤疹块和坏死（感光过敏症）。
电流（电击伤），光线（电光性眼炎），声波（噪音性耳聋），电离辐射（放射病），大气压（高山反应、潜水病），温度（烧伤、冻伤）㈢化学因素：强酸，强碱，毒物中毒（氯，CO、SO2、有机磷农药），超剂量药物。
取决于毒物的性质，进入部位、溶解度、浓度以及动物年龄、种类、性别、营养状况、管理水平和个体反应性。
㈣营养性因素：营养↑→肥胖症→动脉粥样硬化营养↓→营养不良如：抗体↓蛋白质↓→吞噬↓吞噬活性↓→易得感染VitB1缺乏→脚气病；VitD缺乏→佝偻病；缺碘→甲状腺肿㈤应激性因素：转群、疫苗注射、打耳号、拥挤。
㈥遗传因素⑴直接遗传：遗传物质改变直接引起遗传性疾病，例如:先天愚型，血友病，色盲。
⑵遗传易感性：指具有易患某种疾病的遗传素质，在一定的环境因素作用下，机体才发生相应的疾病，如蚕豆病（G-6-PD 缺乏），高血压病，糖尿病等。
㈦先天因素：能损害发育胎儿的化学物质，药物及病毒，可致胎儿畸形或缺陷。
动物病毒学课件：动物微生物学试题解析【1、2次】
括（转化）和（转导）等。
25．链球菌按照抗原结构分为（属特异性）、（群特异性）和（型特异性）抗原
。
26．产志贺毒素大肠杆菌黏附素种类包括（菌毛）、（紧密素）和（外膜蛋白）
，毒性作用有（致Vero细胞病变）和（肠毒性）等。
27．胸膜肺炎放线杆菌毒力强的血清型包括（1）、（5）、（9）和（11）型等
。
28．布氏杆菌病的传播方式包括（直接接触），经（皮肤）、（黏膜）感染以及
18．最低抑菌浓度（MIC）： 能够抑制细菌生长繁殖的药物的最大稀释浓度。
19．真菌
是一大类真核细胞型微生物，不含叶绿素，无根、茎、叶，营腐生 或寄生生活，少数为单细胞，多数为多细胞，多数形成分支或不分 支的丝状体，能进行无性和有性繁殖。
20．螺旋体
是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状，能活泼运动的原核单细
（B）20．雏鸡类白痢的病原为：A、沙门氏菌 B、绿脓杆菌 C、嗜血杆菌 D、志贺氏菌
2020/7/5
17
（B）21．雏鸭传染性浆膜炎的病原为：A、李氏杆菌 B、里氏杆菌8 C、 巴氏杆菌 D、曼氏杆菌 （B）22．沙门氏菌不分解的糖是：A、葡萄糖 B、乳糖 C、麦芽糖 D、 甘露糖
一、解释概念
1．芽胞 2．菌落
某些革兰氏阳性菌在一定条件下在菌体内形成的休眠体。
单个细菌在固体培养基上，生长繁殖形成由大量细菌组成 肉眼可见的小体。
3．细菌生长曲线
细菌液体培养，定期取样，活菌计数，以时间为横坐标， 菌数对数为纵坐标，画出的曲线。
4．灭菌： 杀灭物体上所有微生物的方法。
5．病原菌致病性：
革兰氏阴性菌中的脂多糖成分，细菌在死亡之后被裂解或用人工方 法裂解后才释放细菌毒素。
动物病毒学(DOC)
《动物病毒学》实验课讲稿任课教师：方六荣讲课对象：2002级动物医学专业1-4班讲课时刻：2004.09-2005.01目录实验一鸡胚接种 (1)实验二传代细胞培育与病毒在传代细胞中的培育 (6)实验三原代细胞培育 (9)实验四病毒TCID50的测定 (11)实验五中和实验 (13)实验一鸡胚接种一、实验目的了解鸡胚的大体结构与功能及鸡胚接种的方式，把握经常使用的鸡胚接种方式。
二、鸡胚接种的作用要紧用于：①分离病毒，并依照病变初步鉴定病毒②培育病毒，制造抗原和疫苗③测定各毒株之间的抗原关系（用鸡胚作中和实验和交叉爱惜实验）④测定病毒毒力三、材料1、鸡胚10日龄2、病毒鸡传染性支气管炎病毒（IBV）3、照蛋灯4、打孔器5、石蜡6、注射器7、蛋座8、酒精棉球、碘酊棉球四、鸡胚用于病毒培育的优缺点（一）优势1、组织分化程度低2、可选择不同的日龄和接种途径3、病毒易于增殖4、感染病毒的组织和液体中含大量病毒5、容易搜集和处置6、来源充沛7、设备和操作简便易行（二）缺点1、胚内可能污染细菌和病毒沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒2、母源抗体3、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针五、鸡胚的结构与功能1、卵壳上有细孔，进行气体互换2、壳膜使气体分子和液体分子在内外两方面进行互换。
3、气室呼吸和调剂压力4、绒毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧气的互换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。
5、尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。
6、羊膜与羊膜腔其中盛有羊水，胎体浸泡于其中7、卵黄在胚胎发育初期供给鸡胚营养。
8、卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
六、受精卵的选择1、最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的阻碍。
2、受精卵的壳最好是白色的，以便于检卵。
3、受精卵必需新鲜，保留在5-20℃不要超过10天，保留一个月的受精卵，孵化率快要于零。
《动物病毒学》课件：第十章 单链DNA病毒
的性能，尤其对豚鼠和人的O型红细胞。
➢多数病毒的细胞感染范围较窄，只能在自然 易感宿主的相应细胞内增殖。
➢病毒的增殖需要正处于有丝分裂期的细胞的 某些机能的辅助，在细胞未长成单层时接种 或同步接种（为什么？）。
病毒本身不编码聚合酶，必需利用细胞的 DNA聚合酶II合成病毒DNA，形成双链DNA中 间体，然后以此为模板转录成mRNA
➢1982年，Tischer 等通过——
• 提取病毒粒子和病毒核酸 • 外切核酸酶S1鉴定核酸类型 • 电镜观察
❖揭示了这种细胞污染物实际上是一种单链环状DNA病 毒 ， 并 将 其 命 名 为 猪 圆 环 病 毒 (Porcine Circovirus， PCV）。
2.PCV的基本特征
病毒基因组为环状、闭合单链DNA，病毒粒子无囊 膜，呈二十面体对称，直径约17nm。不具血凝活 性，PK-15细胞上增殖不引起CPE。
二、科的特征
➢ 无囊膜，球形病毒粒子，直径17-22nm，衣壳二
十面体对称。
➢ 病毒颗粒常可见于感染细胞，以珍珠串样排列。 ➢ 基因组为单股环状DNA，大小约1.7-2.3kb。宿主
范围窄。
三、猪圆环病毒（PCV）
1. PCV的发现
➢1974年，Tischer等发现在PK-15细胞系中存在类似于小 RNA病毒的颗粒，当时被认为是一种细胞污染物
✓病毒对乙醚、氯仿等脂溶剂有抵抗力。
Canine Parvovirus
A
B 电镜下PRV与PPV的比较
A、PRV B、PPV
2.血凝性
✓凝集的红细胞：鼠、豚鼠、恒河猴、鸡、鹅和人的 O型红细胞，
✓75℃以上加热处理后，病毒的血凝效价几乎完全消 失，弱酸性到中性的介质适于血凝特性的保持。
兽医病毒学
• 二．白细胞介素-10 • 白细胞介素-10最初被称为细胞因子合成抑制 因子，它能抑制T淋巴细胞合成IFN-γ、IL2以及其它细胞因子，并抑制单核细胞和巨噬 细胞产生TNFα、IL-1α、IL-1β、IL-6、 IL-8等因子。另外，IL-10是一个潜在的B淋 巴细胞生长因子。
• 1、金刚胺及衍生物 金刚胺主要包括 金刚烷胺（amentadine）和甲金刚烷胺 （rimentadine）两种。它们的作用于 细胞和病毒蛋白的融合，防止病毒入侵 宿主细胞或阻止其脱壳过程，但是不能 抑制病毒吸附或穿入细胞。但是有报道， 用金刚烷胺防治产蛋鸡流感时，易引起 鸡产蛋率的下降。
六 干扰素的临床应用
• 一．干扰素的药物动力学 干扰素在经静脉一次注入人和动物后，半衰期仅几分 钟到十几分钟，而且不能很好地分布至各系统和器官。 干扰素似乎不能通过机体内的有关屏障，如血脑屏障、 胎盘屏障等。但将干扰素作人体静脉滴注，在血流中 达到稳定平衡后，半衰期可延长至2-4小时。 干扰素在体内迅速消失的原因是什么？现已证明，在 动物和人的血清、组织液，胆汁、尿液以及粪便中均 含有干扰素灭活物质。干扰素还可能与组织结合并蓄 积在肝、网状内皮系统等，从而影响其在体内的分布。
• 例如人干扰素只对人细胞和人体具有保护作 用，鸡干扰素只对鸡细胞和鸡体有保护作用， 猴干扰素除对猴有保护作用外，对人也有一 定程度的保护作用等。 • 干扰素还存在着组织差异，即使同一动物的 不同组织产生的干扰素，其生物学特性也有 差别,例如白细胞产生的干扰素对白细胞最为 有效，而成纤维细胞产生的干扰素则对成纤 维细胞呈现最大的抗病毒感染的保护作用。
兽医病毒学
第九章
抗病毒的药物
病毒感染是一大类严重威胁人类健康 和生命的疾病，病毒病的治疗是一大难题。 长期以来，病毒病主要依靠接种有效疫苗 预防，一旦发病，只能依靠自身免疫力清 楚病毒。近20年发现了一些具有抗病毒活 性的细胞因子、化学药物。本章将会对这 些研究成果作详细介绍。
病原生物学及免疫学 第三版 第二十二章 病毒学概述
病原生物学与免疫学
CONTENT S
０１ 第一篇 细菌学总论 ０２ 第二篇 免疫学基础 ０３ 第三篇 细菌学各论 ０４ 第四篇 真菌学 ０５ 第五篇 病毒学 ０６ 第六篇 人体寄生虫学
第二十二章 病毒学概述
1病毒的基 本性状
2病毒的感 染与免疫
3病毒感染 的检查与 防治原则
学习目标
1.掌握：病毒、病毒体、干扰现象等概念；病毒的结构及功能；病 毒的增殖方式；病毒感染的类型；抗病毒感染的预防方法；干扰 素的抗病毒作用。
2.熟悉：病毒大小、形态及化学组成；病毒的异常增殖；病毒的致 病机制；机体抗病 毒免疫特点；机体病毒感染的预防方式。
3.了解：理化因素对病毒的影响；病毒的传播方式；病毒感染的检 测方法。
4.具有理论联系实际，利用所学知识防范病毒感染的能力
病毒的发现
1.1892年，俄国学者伊凡诺夫斯基发现烟草花叶病原体能通 过细菌滤器，并定名为滤过性病原。
2.1898年，荷兰学者Beijerinck命名此种病原体为病毒。 3.1898年，德国学者Loeffler和Frosch发现了口蹄疫病毒， 揭开动物病毒学新篇章 。 4.十年后，相继发现了鸡瘟病毒（1900年）、黄热病毒 （1901年）、鸡痘病毒（1902年）、狂犬病病毒（1903年）、 鸡白细胞增生病病毒（1908年）、细菌病毒--噬菌体（1915、 1917年）等。
四、病毒的增殖
第一节 病毒的基本性状
病毒因缺乏细胞结构和代谢系统，故必须在活的易感细胞 内才能增殖。当病毒进入宿主细胞后，利用宿主细胞提供的酶 系统、能量、原料和场所，以病毒核酸为模板，进行病毒核酸 的复制和蛋白质的合成，并装配成完整的子代病毒体，病毒的 这种增殖方式称为复制。
兽医微生物学教学课件-12.病毒总论2014
（3）分子量小，基因组结构简单，所含基因组数目少。
（4）病毒基因组核酸复制和转录多样化
（5） 病毒核酸更易受宿主细胞的影响而发生基 因突变和重组
（6）有些病毒去除囊膜和衣壳，裸露的DNA或 RNA也能感染细胞，这样的核酸称为传染性核酸。
具备条件：
➢ 病毒核酸能作为mRNA或者能利用宿主细胞的 RNA聚合酶转录病毒的mRNA
2. 结构蛋白：系指构成一个形态成熟的有感染性 的病毒颗粒所必需的蛋白质。是构成病毒衣壳 的全部成分和囊膜的主要成分。
蛋白质功能：
➢ 保护病毒核酸，使其免受核酸酶或其它理化因 素的破坏。
➢ 参与病毒感染细胞的过程，决定病毒对宿主细 胞的亲嗜性。
➢ 抗原性：诱导特异性抗体、致敏淋巴细胞。
（三）脂类、糖类
从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制和病毒蛋白合成， 至释放出子代病毒的全过程，称为一个复制周期。
病毒的复制周期主要包括吸附和穿入、脱壳、生物合成、组 装和释放四个连续步骤。
复制周期
病毒的一步生长曲线
感染比（multiplicity of infection,MOI）：指一个系统中感染病 毒的细胞数与细胞总数之比。
➢主要存在于囊膜中，脂溶剂可去除囊膜，使病毒 丧失活性(有些病毒可能仍具感染活性)。
➢来自宿主细胞，与囊膜病毒的吸附和穿入宿主细 胞的作用有关。
第二节 病毒的分类
国际 病 毒 分 类 委员会 (International Committee on Taxonmy of Viruses,ICTV)是国际公认的病 毒分类与命名的权威机构。
腺病毒 乳头瘤病毒
乙肝病毒 细小病毒
正链RNA病毒的大小与形态
冠状病毒
砂粒病毒
动物病毒学课件第四章：病毒的复制
一、吸附(Adsorption/Attachment)
➢ 病毒与细胞表面特异性受体发生碰撞，病 毒附着于细胞受体而引起的病毒感染的第 一阶段。
2020/10/28
➢ 病毒吸附分两步进行（可逆吸附与不可逆吸附）：
✓不可逆吸附的特点:
• 具有特异性：受细胞表面的特定受体和病毒 的吸附蛋白决定
• 解吸的病毒不再具备感染性(正粘病毒和副粘
病毒除外)
并非所有的病毒都有这2个阶段
2020/10/28
• 吸附蛋白（virus attachment protein, VAP)
：病毒表面能识别特异细胞受体的结构蛋 白。主要是壳体蛋白或包膜糖蛋白
2020/10/28
➢ 原代细胞：应用胰酶等分散剂将动物组织 消化成单个细胞悬液，适当洗涤以后，加 入营养液，使其贴附于玻璃瓶壁上，并生 长增殖。
➢ 继代细胞：将已长成单层的原代细胞消化 分散成单个细胞再进行培养获得的细胞。
2020/10/28
epithelial
fibroblastic
2020/10/28
2020/10/28
1)呼肠孤病毒，无囊膜病毒，但有两层二十面体对 称壳体，并不发生完全的脱壳
以内吞方式进入细胞后，吞噬泡与溶酶体结合形成 次级溶酶体，病毒外壳中近50%的壳体被溶酶体中的 蛋白酶水解，余下的壳体与病毒核心形成亚病毒颗 粒，病毒基因组的转录均在亚病毒颗粒内进行。
2020/10/28
浮，分装于细胞冻存管中。 4.置4℃ 2h，-20℃ 2h，-70℃过夜，然后置于液氮中长期保存
。 ——或在液氮气相中过夜，然后置于液氮中长期保存。 ——或置于液氮气相中，按5min 1cm的速度逐渐往下降，直至
动物病毒学重点知识点
动物病毒学重点知识点为什么病毒必须在活的敏感细胞内才能生长繁殖?答:因为:1病毒本身没有合成蛋白质的场所一核糖体,故必须借助宿主细胞的核糖体合成蛋白质;2由于病毒缺乏完整而又必须的酶,故必须借助细胞的某些酶才能复制;3只有敏感细胞上才有病毒的受体,病毒与受体结合后才能进入细胞内生长繁殖。
简述病毒复制的基本过程。
答:病毒复制的基本过程为:1吸附,即病毒颗粒与细胞膜的受体发生相互作用后病毒颗粒特异性地吸附于宿主细胞表面;2穿入,病毒吸附于宿主细胞膜后以各种不同的方式进入细胞,此即穿入;3脱壳,病毒在宿主细胞内脱去核壳,病毒核酸随后进入细胞的一定部位;4病毒大分子的生物合成,病毒基因组进入宿主细胞后,一方面表达与合成病毒复制过程中所必需的结构蛋白和非结构蛋白,另一方面进行复制合成子代病毒核酸;5装配与释放,病毒核酸与壳体蛋白合成完毕后,在细胞核内或胞浆内装配成熟为病毒颗粒(核衣壳),此即子代病毒体,然后子代病毒体以不同方式从感染细胞中释放到细胞外环境。
简述病毒鉴定的基本原则。
答:鉴定病毒的基本原则包括:根据病毒的生物学特性如病毒的形态、大小与结构等加以鉴定;根据病毒的宿主范围及受染宿主的症状加以鉴定;根据病毒的理化性质如核酸的类型及其对理化因素的抵抗能力等加以鉴定:根据病毒的血清学反应加以鉴定。
流感病毒的快速诊断方法有哪几种?答:(1)免疫方法检测标本中抗原如IFA、EIA及放射免疫技术均可检测培养物及标本中的抗原。
(2)分子杂交检测病毒RNA。
(3)RT-PCR检测培养物及标本中流感病毒RNA,并能进行病毒分型及分亚型。
(4)免疫电镜技术。
目前最常用的培养病毒的方法是细胞培养。
根据细胞来源和性状的不同可分为三类:(1)原代细胞:新鲜组织经胰酶消化后形成单细胞，加入培养液后37?培养，数日可贴壁长成单层细胞，即为原代细胞培养。
原代细胞经胰酶消化后再传一次即为次代细胞培养。
原代细胞培养可用于多种病毒分离和疫苗的制备。
禽源冠状病毒感染情况概述
禽源冠状病毒感染情况概述庄青叶;陈继明;王楷宬【摘要】Based on epidemiological investigation,surveillance,gene analysis of coronaviruses in birds in the world,coronavirus infections and the related diseases in avian were summarized in this paper. Avian-origin coronavirus has a very complex population with abundantdiversity,involving viruses in Gammacoronavirus and Deltacoronavirus at least. Avian infectious bronchitis virus existed and was endemic in almost all chicken-producing countries. Turkey coronavirus,duck coronavirus,goose coronavirus,pigeon coronavirus were already detected in avian and some of these were pandemic. A few other Deltacoronavirus were only detected in wildfowl .%以国内外对冠状病毒在禽类中的流行病学调查、监测和基因分析等研究报道为基础，从病毒分类学角度，对各“种”冠状病毒在禽类中的感染情况和引起的相关疾病进行简要概述。
全球在禽类中发现的冠状病毒种类较多，至少涉及丙型和丁型冠状病毒属。
其中，鸡传染性支气管炎病毒几乎在全球所有养鸡国家中存在，并呈地方性流行；火鸡冠状病毒、鸭冠状病毒、鹅冠状病毒、鸽冠状病毒也在禽类中被发现，部分病毒已在禽群中流行；其他丁型冠状病毒属病毒仅在少数野鸟中被发现。
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四、病毒鉴定
（一）病毒提纯
病毒提纯
化学法
离心法
层析法
硫酸铵沉淀法
超速离心法
离子交换层析法
聚乙二醇沉淀法
密度梯度离心法
亲和层析法
氯仿去脂法
（二）形态特征观察：电镜
1、透射电镜观察：提纯浓缩
2、扫描电镜观察
（三）病毒理化特性鉴定
理化特性 鉴定
核酸类型
有无囊膜
抗酸性
浮密度
G+C克分 子%
DNA或 RNA
第二章 病毒分离鉴定技术
一、取材
取病毒存在较多的部位，如：粪、血、肝、脾
等。
无菌污染的直接检测，有菌污染的加双抗
1000~2000单位/ml处理或过滤除菌。
二、检查包涵体
存在的细胞种类
存在位置：胞浆或胞核。
染色性：
三、病毒分离
1、接种实验动物或本动物 2、禽胚接种 3、单层细胞接种:原代细胞、传代细胞
（五）血清学鉴定
1、已知抗体鉴定病毒抗原 补体结合反应 中和实验 对流电泳 琼脂扩散 ELISA 荧光抗体技术 血凝和血凝抑制 2、已知病毒抗原测定血清抗体及效价
（六）病毒分子生物学鉴定
分子生物学鉴定
聚合酶链反应
核酸杂交
DNA芯片
DNA病毒
RNA病毒
DNA杂交
PCR
RT-PCR
RNA杂交
套式PCR
（五）番鸭细小病毒
危害1－3周龄番鸭，又名“三周病”。 症状和病变与小鹅瘟相似。
（六）牛细小病毒
引起犊牛腹泻。
该病毒具有细小病毒属的特性，但血凝特性较
强，可凝集多种动物的红细胞。该病毒不与本属
的其他病毒发生交叉血清学反应。
病毒可在胎牛肾细胞上生长，可用胎牛肾细胞
从粪便中分离病毒，以血凝实验和中和实验鉴定。
MDV
（三）禽传染性喉气管炎病毒
鸡传染性喉气管炎。
咳嗽、气喘、流涕、呼吸困难。
喉头、气管出血，炎性分泌物。
9－12日龄鸡胚尿囊膜接种分离病毒。
鸡传染性喉气管炎活疫苗免疫。
鸡传喉病毒（ILTV）
ILT
（四）鸭瘟病毒
1、病毒特征：引起鸭的鸭瘟，急性热性败血症。在 核内核衣壳直径 95~105 nm 。在胞浆中形成囊膜 后的直径为160~180，为球形的成熟病毒颗粒。在 鸭胚或鸭胚成纤维细胞上生长，引起细胞病变。 2、诊断 ⑴病毒分离：鸭胚尿囊腔接种。 ⑵病毒鉴定：中和实验、琼扩、ELISA 3、免疫：鸭瘟弱毒疫苗、鸭瘟鸭肝炎二联弱毒苗。 保护期可达一年。
犬细小病毒
（二）猫全白细胞减少症病毒
原名猫瘟热病毒。主要感染猫科动物，如猫、水貂、
虎、豹、狮，怀孕最后2周的胎猫及出生后2周的猫崽最
易感。 以高热、呕吐、白细胞严重减少、肠炎特征。病毒仅 在4OC对猴、猪红细胞有凝集作用，能在猫肾、肺、睾 丸细胞上生长。用上述细胞分离病毒，进行HA－HI实
验诊断（用猪红细胞）弱毒苗和灭活苗。
猫全白细胞减少症病毒
（三）猪细小病毒
引起猪繁殖障碍，公猪繁殖力下降，母猪流产、 死产、胎儿畸形，是由于病毒经胎盘传递给胎儿 引起， 。 HA－HI实验检测胎儿组织悬液中病毒，用豚鼠 红细胞。 可用弱毒苗或灭活苗免疫。
（四）鹅细小病毒
小鹅瘟。雏鹅急性肠炎以及肝肾心等实质器官 炎症。 与本属其他病毒无血清交叉反应。 对环境的抵抗力较强。 在鹅胚、鸭胚上生长，用鹅胚分离病毒，进行 病毒中和实验，也可用电镜观察病毒。 用小鹅瘟灭活苗免疫母鹅，使雏鹅获得较高水 平的母源抗体而获得保护。小鹅瘟血清、小鹅瘟 卵黄抗体可用于预防和治疗
2、诊断
⑴取材：新鲜病变组织或羽毛囊
⑵鸡胚培养：6日龄鸡胚卵黄囊接种、在绒毛尿囊膜上形
成病变。
⑶病毒中和实验
⑷琼脂扩散：标准血清检测羽毛囊中病毒抗原。
3、免疫
可用HVT冻干疫苗（火鸡疱疹病毒）预防。
马立克病毒
MDV
MDV的双核衣壳颗粒
MDV
神经肿大
心肿瘤结节、腺胃肿大
MDV
肾脏肿大
心、肺、肝、脾上肿瘤结节
内容提要
第一章
病毒概论
个体微小、无细胞结构、只含一种核酸(RNA或
DNA），专性细胞内寄生。
一、病毒大小：纳米（nm），20－300nm 。电
镜观察。大部分病毒能通过细菌滤器。
二、病毒形态
（一）砖形：痘病毒
（二）弹形：狂犬病病毒
（三）球形：大多数人畜病原病毒
（四）杆形：大多数植物病毒
（五）蝌蚪形：寄生于细菌的病毒，又称噬菌体。
1、疱疹病毒甲亚科 伪狂犬病毒
疱疹病毒科
禽传染性喉气管炎病毒 马立克氏病毒
鸭瘟病毒
2、疱疹病毒乙亚科
3、疱疹病毒丙亚科
二、共同特征
1、形态：病毒球形，大小约150nm。核酸为单分子
双股线状DNA，衣壳20面体立体对称，有囊膜。 2、致病特点 通过交配、舔等密切霎触而传染。 持续感染、代代相传、周期性排毒。
转录出mRNA，翻译成蛋白质。 转录出mRNA，是翻译出蛋白质的关键。 DNA病毒转录mRNA： 单股正股RNA病毒：自身RNA作为mRNA。 双股 RNA 病毒、单股负股 RNA 病毒：依赖自身 携带的RNA依赖的RNA聚合酶，形成mRNA。
病毒核酸合成
（四）病毒粒子装配
核酸芯髓外装上蛋白质衣壳，形成核衣壳。
各种病毒的形态和大小
大肠杆菌噬菌体
大肠杆菌噬菌体
大肠杆菌噬菌体
三、病毒结构与化学组成
（一）核酸芯髓：由核酸组成，一种病毒只含一种
核酸，或DNA，或RNA，有单链或双链。
（二）蛋白质衣壳：按一定规则排列的壳粒组成，
壳粒排列规则有：螺旋对称；二十面体立体对称。 核酸芯髓与衣壳统称核衣壳。 （三）有的病毒核衣壳外有脂蛋白囊膜，有的囊膜 上有许多突出物，称囊膜粒。有囊膜的病毒对乙 醚、氯仿敏感。
第二节
圆环病毒科
鸡传染性贫血病病毒 一、病毒特征 病毒球形，大小约22nm，基因组为单分子线状 单股DNA，20面体立体对称，无囊膜。 二、致病性 鸡传染性贫血病。红细胞生成减少而贫血，血 液稀薄如水，凝集缓慢。 三、诊断 直接免疫荧光抗体技术或中和实验。
鸡传染性贫血病毒
第五章 反转录病毒
第一节 反转录病毒科的分类及特性 第二节 禽白血病／肉瘤病毒 第三节 慢病毒属
三、重要动物病毒
（一）伪狂犬病病毒 1、一般特征：多种动物的伪狂犬病。表现流产、神经症状。 大小约 120~200 。在神经细胞核内形成包涵体。可在猪、
牛、羊等肾细胞上生长，并形成空斑病变。
2、诊断 ⑴动物实验：家兔皮下注射，接种部位表现奇痒。 ⑵分离培养：猪、兔肾细胞或鸡胚培养。 ⑶免疫诊断：对流免疫电泳、荧光抗体技术、 ELISA
氯仿处理
酸性环境 处理
密度梯度 离心
单股或双 股
乙醚处理
（四）病毒感染单位测定
病毒感染单位 测定 空斑试验 空班形成单位 /ml（CFU） 终点稀释法
细胞法
鸡胚法
动物法
半数感染量 （TCID50）
半数致死量 （ELD50）
半数感染量 （EID50）
半数致死量 （LD50）
半数感染量 （ID50） 半数反应量 （RD50）
3、少数畜禽病毒，装配后不释放，称为病毒潜在感染。不
排毒，可维持数年。受外界因素影响才排毒，出现症状， 称为慢病毒。
病毒繁殖
六、病毒干扰现象和干扰素
（一）干扰现象：一种病毒感染畜禽细胞后，能产生抑制另 种病毒感染的作用，使另种病毒不能再感染，称为病毒干 扰现象。病毒干扰的原因有三： 1、两种病毒吸附时需要细胞膜上相同受体。 2、一种病毒复制时使用了细胞组成成份。 3、一种病毒在细胞内产生了干扰素。
第一节
一、分类
反转录病毒科的分类及特性
反录病毒科
甲型反录病毒属
乙型反录病毒属
丙型反录病毒属
丁型反录病毒属
慢病毒属
泡沫病毒属
禽白血病病毒
牛白血病病毒
人免疫缺陷病毒
马传染性贫血病毒 梅迪／维士那病毒
二、共同特性
病毒球形，大小约80－100nm。
基因组为核酸与蛋白质的复合物，呈螺旋对称 状。基因组为二倍体，由单分子线状的正股单股 RNA组成。衣壳20面体立体对称。有囊膜。 含反转录酶。反转录酶同时具有RNA依赖的
（三）对乙醚、氯仿敏感性 有囊膜的病毒，对乙醚、氯仿敏感；无囊膜病毒可用 其提纯。 （四）核酸分子量 相同或相近病毒，核酸分子量也相同或相近。 （五）浮密度 提纯病毒悬浮于某种事先制成一定密度梯度液体（氯 化铯或蔗糖）表面，底部密度大，上部密度小。超速离 心后，病毒存在于液体的某一层中，该层溶液密度称为 病毒浮密度。大于1小于2，不同病毒浮密度不同。
DPV：核内无囊膜病毒与胞浆有囊膜病毒
第三节
一、共同特征
腺病毒科
病毒球形、80－100nm，20面体立体对称，无 囊膜。 可凝集动物红细胞。 二、主要病毒
（一）犬传染性肝炎病毒：引起犬传染性肝炎。表 现急性肝炎症状。可用ELISA、HA－HI、中和实 验诊断。犬腺病毒2型弱毒苗预防。
（二）鸡减蛋综合症病毒：引起鸡减蛋综合症，表现产蛋
二、形态
砖形、大小约250nm*250nm*200nm、线状双股DNA、 核衣壳复合对称、有囊膜。 三、抵抗力：不强。 四、致病性：皮肤伤口或蚊虫叮咬感染。常见有鸡痘、猪 痘、绵羊痘。 五、诊断：鸡胚尿囊膜上生长，形成痘斑。同种动物单层 细胞（肾、胚胎、睾丸细胞）上良好生长。
鸡痘病毒
第二节
一分类
套式RT-PCR
斑点杂交
原位PCR
原位杂交
荧光定量PCR
第一节