流式胞内染色步骤
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一、surface marker染色
1、收获细胞，用1%BSA /PBS 1ml洗涤一次（1500rpm，10min），倾倒后滤纸吸干管口液体。
2、加入预先配置好的surface marker抗体混合液（溶于50ul 1%BSA
/PBS），用枪轻轻吹打充分混匀，4度孵育30分钟。
3、1%BSA /PBS 1ml洗涤一次（1500rpm，10min），倾倒后滤纸吸干管口液体。
二、Intracellular Staining的步骤
1、Fix/permeabilizatioin Buffer（ebioscience）固定破膜剂
2、固定：加入IC Fix/Perm Buffer 100ul 后，混匀，室温孵育20分钟
3、用1x Perm Wash Buffer 1ml洗涤1次（2000rpm，10min），倾倒后滤纸吸干管口液体。
4、破膜：加入1x Perm Wash Buffer 1ml，混匀，4度孵育45分钟。
5、离心（2000rpm，10min），倾倒后滤纸吸干管口液体。
6、加入细胞因子抗体（溶于50ul 1x Perm Wash Buffer），4度孵育45分钟。
7、最后再用1xPerm Wash Buffer 1ml洗一次，倾倒后，加入适量300ul PBS 重悬细胞。