肿瘤标志物检测原理和常见问题分析讲义
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类风湿因子本质是一种免疫球蛋白，可以特异性的识别自身IgG的Fc部分， 属于一种自身抗体。主要存在形式为IgM RF（约占80%）及IgG RF。 RF产生原因有（1）人体IgG在物理因素下其抗原性发生变化持续刺激免疫 系统；（2）免疫功能紊乱；（3）遗传因素。
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
5.反应过程简介
准备工作
恢复到室温、校准品复溶、重悬微球
第一步反应
A液 25ul+ 样本 10ul+ B液 37℃反应5min
第二步反应
+C液 25ul 37℃反应60min
终止反应
+D液 100ul 振荡混匀，读数，计算浓度
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
2517颗微球信号值数据点图
0
1600
3200
4800
6400
信号值（MFI）
每个符号最多表示 33 个观测值。
8000
9600
11200
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
CV%
25.0% 20.0% 15.0% 10.0%
5.0% 0.0%
0
抽样量与变异系数趋势图(理论抽样)
50
100
150
200
250
300
抽样量
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 7.获得信号值
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 8.剂量反应曲线
样本2
样本1
Y5=b5x5+a5 Y4=b4x4+a4
Y3=b3x3+a3 Y2=b2x2+a2 Y1=b1x1+a1
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 核心反应原理
4.肿瘤标志物检测试剂盒组成
① 反应缓冲液（A液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ② PE标记混合抗体溶液（B液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ③ 校准品：6瓶，0.2ml/瓶，分别为：CAL1-CAL6。 ④ 微球混悬液（C液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ⑤ 终止液（D液）：1瓶，15ml/瓶。 ⑥ AFP HOOK 指示微球溶液（H液）：1瓶，250ul/瓶。（仅限含AFP指标） ⑦ 说明书：1份。 ⑧ 封板纸：2张。 ⑨ 96孔反应板：1块。 ⑩ 光盘（读数模板+计算模板）
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-准确度、正确度、精密度
1.准确度 2.正确度 3.精密度
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-不精密度补充说明
95%置信区间
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合率、阴性符合率） 试验方法和金标准比较2*2列联
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
•2.肿瘤标志物临床应用
高危人群筛查 肿瘤辅助诊断 疗效评价
复发监测及预后
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
3.方法学原理：双抗夹心免疫学方法
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 4.肿瘤标志物物试剂盒组成
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
uc(y)
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
实施
uc(y)
国际科学组织， WHO国际赋值方案
计 国际约定校准
量
品
学
溯
源 g)制造商工作
校准品
i)制造商产品校 准品
常规样本
结果
国ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ科学组 织，WHO
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量 程序
j)终端用户常规测量 程序
ML
ML
ML
ML 制造商和 （或）终端
表 目前已知肿瘤标志物有国际标准（国际约定校准）的指标
二、结果不一致原因分析
表 无国际标准标志物溯源情况
二、结果不一致原因分析
二、结果不一致原因分析
图 不同方法学胃蛋白酶I检测的系统误差，因为缺乏国际 标准，导致系统间存在显著的差异：
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
• 癌反应
细胞及组 织
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
•1.肿瘤标志物定义： 肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指恶性
肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成分泌或是 由机体对肿瘤细胞反应而产生和（或）升高的，可 预示肿瘤存在的一类物质。存在于血液、体液、细 胞或组织中。
. 参考文献：肿瘤标志物的临床应用建议 中华检验医学杂志2012年2月第35卷第2期 P103
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 2.不同免疫检测方法检测肿瘤标志物结果差异原因分析
（1）计量学溯源问题
上梁不正下梁歪
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
a)CGPM的SI单位定义
c) 一级校准品
计
量
学
e) 二级校准品
（3）HAAAs（HAMA）干扰 (human anti-animal antibodies,HAAAs)
A液 消 除 干 扰 样 本 效 果 图 （ 干 扰 类 型 ： 类 风 湿 因 子 ）
指标名称
CEA CYFRA21-1
F-PSA AFP NSE
CA125 T-PSA CA242 free-β-hCG
0
加A液处理 不加A液
5000
10000
15000
Luminex信号值
20000
25000
二、结果不一致原因分析
肿瘤标志物检测原理和常 见问题分析
本次讲解内容
肿瘤标志物概述及试剂检测原理 结果不一致原因分析
常见问题答疑
背景
图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构成，数据引自“中国卫生统计年鉴•2011”
背景
•目前对肿瘤最有效的措施： 早发现，早治疗
图像诊断
• •
CT 核磁共振
• 免疫学指标 化学诊断 • 血清学
溯
源
g)制造商工作校
准品
i)制造商产品校 准品
常规样本
b)一级参考测量程序
d)二级参考测量程序
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量程 序
j)终端用户常规测量 程序
结果
实施
BIPM,NMI,AR ML
NMI,ARML
NMI,ARML, ML
ML ML ML ML 制造商和 （或）终端
用户 终端用户 终端用户
用户 终端用户 终端用户
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
实施
uc(y)
计 量
g)制造商工作 校准品
学
溯 i)制造商产品校
源
准品
常规样本
结果
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量 程序
j)终端用户常规测量 程序
ML
ML
ML
ML 制造商和 （或）终端
用户 终端用户 终端用户
二、结果不一致原因分析
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
5.反应过程简介
准备工作
恢复到室温、校准品复溶、重悬微球
第一步反应
A液 25ul+ 样本 10ul+ B液 37℃反应5min
第二步反应
+C液 25ul 37℃反应60min
终止反应
+D液 100ul 振荡混匀，读数，计算浓度
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
2517颗微球信号值数据点图
0
1600
3200
4800
6400
信号值（MFI）
每个符号最多表示 33 个观测值。
8000
9600
11200
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 6.独特的抽样技术
CV%
25.0% 20.0% 15.0% 10.0%
5.0% 0.0%
0
抽样量与变异系数趋势图(理论抽样)
50
100
150
200
250
300
抽样量
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 7.获得信号值
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 8.剂量反应曲线
样本2
样本1
Y5=b5x5+a5 Y4=b4x4+a4
Y3=b3x3+a3 Y2=b2x2+a2 Y1=b1x1+a1
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 核心反应原理
4.肿瘤标志物检测试剂盒组成
① 反应缓冲液（A液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ② PE标记混合抗体溶液（B液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ③ 校准品：6瓶，0.2ml/瓶，分别为：CAL1-CAL6。 ④ 微球混悬液（C液）：1瓶，2.5ml/瓶。 ⑤ 终止液（D液）：1瓶，15ml/瓶。 ⑥ AFP HOOK 指示微球溶液（H液）：1瓶，250ul/瓶。（仅限含AFP指标） ⑦ 说明书：1份。 ⑧ 封板纸：2张。 ⑨ 96孔反应板：1块。 ⑩ 光盘（读数模板+计算模板）
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-准确度、正确度、精密度
1.准确度 2.正确度 3.精密度
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-不精密度补充说明
95%置信区间
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合率、阴性符合率） 试验方法和金标准比较2*2列联
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
•2.肿瘤标志物临床应用
高危人群筛查 肿瘤辅助诊断 疗效评价
复发监测及预后
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
3.方法学原理：双抗夹心免疫学方法
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理 4.肿瘤标志物物试剂盒组成
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
uc(y)
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
实施
uc(y)
国际科学组织， WHO国际赋值方案
计 国际约定校准
量
品
学
溯
源 g)制造商工作
校准品
i)制造商产品校 准品
常规样本
结果
国ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ科学组 织，WHO
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量 程序
j)终端用户常规测量 程序
ML
ML
ML
ML 制造商和 （或）终端
表 目前已知肿瘤标志物有国际标准（国际约定校准）的指标
二、结果不一致原因分析
表 无国际标准标志物溯源情况
二、结果不一致原因分析
二、结果不一致原因分析
图 不同方法学胃蛋白酶I检测的系统误差，因为缺乏国际 标准，导致系统间存在显著的差异：
二、结果不一致原因分析
（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰
• 癌反应
细胞及组 织
一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理
•1.肿瘤标志物定义： 肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指恶性
肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成分泌或是 由机体对肿瘤细胞反应而产生和（或）升高的，可 预示肿瘤存在的一类物质。存在于血液、体液、细 胞或组织中。
. 参考文献：肿瘤标志物的临床应用建议 中华检验医学杂志2012年2月第35卷第2期 P103
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 1.基本概念-相关性
二、结果不一致原因分析 2.不同免疫检测方法检测肿瘤标志物结果差异原因分析
（1）计量学溯源问题
上梁不正下梁歪
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
a)CGPM的SI单位定义
c) 一级校准品
计
量
学
e) 二级校准品
（3）HAAAs（HAMA）干扰 (human anti-animal antibodies,HAAAs)
A液 消 除 干 扰 样 本 效 果 图 （ 干 扰 类 型 ： 类 风 湿 因 子 ）
指标名称
CEA CYFRA21-1
F-PSA AFP NSE
CA125 T-PSA CA242 free-β-hCG
0
加A液处理 不加A液
5000
10000
15000
Luminex信号值
20000
25000
二、结果不一致原因分析
肿瘤标志物检测原理和常 见问题分析
本次讲解内容
肿瘤标志物概述及试剂检测原理 结果不一致原因分析
常见问题答疑
背景
图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构成，数据引自“中国卫生统计年鉴•2011”
背景
•目前对肿瘤最有效的措施： 早发现，早治疗
图像诊断
• •
CT 核磁共振
• 免疫学指标 化学诊断 • 血清学
溯
源
g)制造商工作校
准品
i)制造商产品校 准品
常规样本
b)一级参考测量程序
d)二级参考测量程序
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量程 序
j)终端用户常规测量 程序
结果
实施
BIPM,NMI,AR ML
NMI,ARML
NMI,ARML, ML
ML ML ML ML 制造商和 （或）终端
用户 终端用户 终端用户
用户 终端用户 终端用户
二、结果不一致原因分析
物质
校准 赋值
程序
实施
uc(y)
计 量
g)制造商工作 校准品
学
溯 i)制造商产品校
源
准品
常规样本
结果
f)制造商选定测量程 序
h)制造商常设测量 程序
j)终端用户常规测量 程序
ML
ML
ML
ML 制造商和 （或）终端
用户 终端用户 终端用户
二、结果不一致原因分析