O抗原的提取
o抗原名词解释
o抗原名词解释
O抗原是一个与细菌细胞壁结构密切相关的名词。
它通常是指某些革兰氏阴性细菌细胞壁外膜上的特异性多糖链，这种多糖链是细菌的抗原决定簇，能够诱导机体产生免疫应答。
在细菌的分类和鉴定中，O抗原具有重要作用，是血清学分型的基础。
此外，O抗原还与细菌的毒力、致病性以及免疫逃避机制等密切相关。
在疫苗研发和免疫学检测中，O抗原是重要的研究对象。
例如，伤寒沙门氏菌的O抗原是伤寒疫苗的主要成分之一。
在临床诊断中，通过检测患者样本中的O抗原，可以快速诊断某些细菌感染。
值得注意的是，O抗原因在不同细菌种类和菌株之间具有高度的特异性，因此，它是细菌分类和鉴定的重要依据之一。
在我国的微生物学研究、公共卫生和疾病预防控制等领域，对O抗原的研究和应用具有重要意义。
细菌脂多糖提取试剂盒原理
细菌脂多糖提取试剂盒原理1. 背景介绍细菌脂多糖（LPS）是一种存在于细菌外膜上的复杂分子，由脂质部分（脂A）和多糖部分（O抗原、核心多糖和内核多糖）组成。
LPS具有重要的生物学功能，如参与免疫应答、致病性等。
因此，提取和检测LPS对于研究细菌学、免疫学以及临床诊断具有重要意义。
细菌脂多糖提取试剂盒是一种用于从细菌中提取LPS的试剂盒。
其基本原理涉及到以下几个步骤：样品处理、裂解、去除杂质、纯化和浓缩。
2. 基本原理2.1 样品处理首先，需要将待测样品进行处理。
样品可以是培养基中的细菌悬液，也可以是体液样品（如血液、尿液等）中的细菌。
对于培养基中的细菌悬液，可以直接使用；而对于体液样品，需要先对样品进行预处理，如离心去除细胞、沉淀等。
2.2 裂解裂解是将细菌的外膜破坏，释放出LPS的重要步骤。
通常使用热处理或化学方法进行裂解。
•热处理：将样品加热至高温，使细菌外膜结构破坏，LPS释放出来。
这种方法简单易行，但可能会导致LPS的部分降解。
•化学方法：使用化学试剂（如EDTA、SDS等）处理样品，使细菌外膜破坏。
这种方法相对较温和，并能够更好地保护LPS的完整性。
2.3 去除杂质在裂解后，需要对样品中的杂质进行去除。
这些杂质可能包括蛋白质、核酸、小分子化合物等。
去除杂质可以通过离心沉淀、滤过等方法实现。
•离心沉淀：通过高速离心使颗粒物沉淀到底部，上清液中含有较纯的LPS。
•滤过：使用微孔过滤器（如0.45μm滤膜）将颗粒物截留下来，上清液中含有较纯的LPS。
2.4 纯化和浓缩经过去除杂质后，可以进行LPS的纯化和浓缩。
这一步骤的目的是提高LPS的纯度和浓度。
•纯化：使用亲水性树脂、离子交换树脂等吸附剂对样品进行柱层析，将LPS 吸附到柱子上，洗脱其他杂质。
这样可以得到较纯的LPS。
•浓缩：通过透析或浓缩方法将溶液中的水分去除，使得LPS的浓度增加。
3. 细菌脂多糖提取试剂盒原理细菌脂多糖提取试剂盒通常包括了上述基本原理中所涉及到的各个步骤所需的试剂和材料。
致病性大肠埃希氏菌及其检验
致病性：（1）致 病因素
LT与ST的比较
特性
分子量 耐热性 免疫原性 B亚单位受 体
致病机理
不耐热肠毒素
耐热肠毒素
较大，73000
较小，1500-5000
不耐热
耐热
有
无
肠黏膜GM1神经节苷酯 肠黏膜GM1神经节苷酯
活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，
细胞内cAMP含量升高， 细胞内cGMP含量升高，
原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。 大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因 伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带 核心的、有金属光泽的深紫色的（龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌 落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典 型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。 有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、 湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。
革兰氏阴性杆菌
革兰氏 阳性杆 菌
大肠杆菌扫 描电镜照片源自大肠杆菌 透射电镜 照片大肠杆菌革兰氏染色照片
大肠杆菌平 板菌落照片
一、埃希氏菌属生物学特性
生化特性
一．可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或 迟缓发酵乳糖；
二．不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致; 三．本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。 四．不产生H2S，不液化明胶，不分解尿素;
二、致病性大肠埃希氏菌的检验
（二）、分离培养
将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦 康凯或伊红美兰琼脂平板上。 2、于36±1℃培养 18—24小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按 划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵 的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。
间接凝集实验及致敏红细胞制备方法
间接凝集实验及致敏红细胞制备方法将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上，然后与相应的抗体结合，也可出现颗粒载体的凝集现象，称为间接凝集反应。
间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高，可用于微量抗体或抗原的检查。
一、间接血球凝集实验间接血球凝集实验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。
将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面，此时红血球即称为“致敏红血球”。
这种致敏的红血球具有细菌的抗原性，与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。
间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的多糖物质浸出，去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。
但如系蛋白质时则用来吸附的红血球需先用鞣酸予以处理。
（一）材料1、抗原—伤寒杆菌O抗原2、免疫血清：伤寒杆菌O901免疫兔血清3、25%绵羊红血球悬液，生理盐水，试管吸管等（二）方法1、“O”抗原的制备：将每毫升100亿的伤寒杆菌“O”菌悬液，置100℃水浴中2小时，离心沉淀吸取上清夜，分装无菌试管，放4℃冰箱备用。
2、致敏红血球悬液制备：取一定稀释度的抗原加等量2.5%绵羊红血球悬液，混合后放37℃水浴箱中，每隔15分钟取出振摇一次，共经2小时。
然后取出，用生理盐水洗涤3次，而配制成0.5%悬液即成。
3、实验步骤：（1）小试管9只标好号码于试管架上。
（2）第1管加入0.9毫升生理盐水，其余各管各加入0.5毫升。
（3）以吸管吸取已加热灭菌的免疫血清0.1毫升加入第1管，混匀后吸取0.5毫升注入第2管，同样第2管的血清与盐水混匀后吸取0.5毫升注入第 3管。
如此依次稀释直至第8管。
自第8管吸出0.5毫升弃去。
第9管不加血清作对照。
（4）于每管加入0.5毫升已经致敏的0.5%绵羊红血球悬液，混匀后放入37℃水浴中2小时后观察结果。
凡最高血清稀释度的免疫血清试管中呈现完全血凝者，即为该血清的间接血清效价。
二、致敏红细胞的制备（一）直接法1、取10%双醛固定的红细胞悬液1ml，离心沉淀后，将压积细胞悬于0.1mol/L、pH4.0醋酸缓冲液5ml中。
抗o试验名词解释
抗o试验名词解释
O抗体试验：
1. 什么是O抗体试验：O抗体试验（也被称为O抗原试验）是一种医学测试，用于检测某种特定的免疫系统细胞（称为O抗体或O血型抗体）是否在人体血液中存在。
它通常用于检测O血型，身体对血液转换和移植手术中出现的交叉反应，以及医疗工作者是否需要特殊措施来对待疾病暴露的患者。
2. O抗体试验的原理：O抗体试验是基于血液学测定，其实质是在血液样本中，使用标记抗原与抗体结合反应（ELISA）或流式细胞仪（FACS）来检测抗体类型。
在这种类型的试验中，所测量的是抗原（如O、B、A或D）结合抗体（IgG、IgM或其他类型）的能力。
3. O抗体试验的用途：O抗体试验常用于确定血液类型，检测疾病暴露或身体对血液转换或移植手术的反应，同时为医疗工作者提供针对不同血型的护理指导。
抗体试验也可以用于监测疾病活动，以更好地评估治疗的进展，例如在系统性红斑狼疮（SLE）中降低活动性反应和预防可能出现的反复状况。
4. O抗体试验的准备&准确性：O抗体试验不需要特殊的准备，而且本身也是比较简单的试验，大多时候会采用一次性的血液采集装置以保
证血液的完整和准确。
应用ELISA法，O抗体试验的准确性非常高，
它在检测抗原的测定方面可再现性较佳，使用的标准样品也可保证结
果的一致性。
5. O抗体试验的不足：O抗体试验的不足在于不能检测出全部血型反应，原因是人体血液中抗体可能随着时间有所变化，因此只有大量的采集
和考察才能确定真正的血型分类，但这样会非常耗时且费用也会提升，所以O抗体测试在一定程度上无法完全代替大量采集研究。
综合性实验三、抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定
西安医学院教案（专业课程）课程名称临床免疫学与检验班级检本1008 专业，层次检验，本科教师武永红专业技术职务讲师授课方式（大，小班，实习）实验学时9学时授课题目（章，节）抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011教学目的：1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价，2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。
教学内容：1.细菌培养与免疫原的制备2.“O”和抗“H”血清的制备3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教学方法：启发式教学；讲授重点内容。
教具：板书示教教学重点、难点：1. 间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教研室审阅意见（教研室主任签名）年月日教学内容教学手段时间分配抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定（一）细菌培养与免疫原的制备（二）“O”和抗“H”血清的制备（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价（一）细菌培养与免疫原的制备伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板→生理盐水菌液（100℃水浴制备O抗原，甲醛处理制备H抗原）（二）“O”和抗“H”血清的制备Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清O/H抗原的免疫程序：日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径1 1 皮内五点注射8 1.5 耳静脉注射15 1.5 耳静脉注射22 1.5 耳静脉注射放血方法：颈动脉采血试血方法：试管凝集试验（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
大肠杆菌O抗原定型血清标定用抗原的制备
大肠杆菌O抗原定型血清标定用抗原的制备张媛;王秀丽;刘博;张磊;李建;彭国瑞;辛凌翔;蒋玉文【摘要】为研制用于标定大肠杆菌菌体抗原(0抗原)单因子定型血清效价的抗原,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(02)、CVCC1350(07)、CVCC1414 (074)为菌种,经条件优化确定了抗原制备的工艺.检测结果表明,当菌液调整至OD600nm值为0.147±0.026时,各型抗原的浓度为1×109CFU/mL,将其热处理后制备成反应抗原.按此吸光值各自制备3批抗原,3批抗原与血清的凝集价均分别一致,分别达到211 (02)、212(07)及29(074).用180种大肠杆菌O抗原单因子定型血清对制备的抗原进行检测,制备的抗原仅与其对应型的血清发生特异性反应,与其余179种血清均不发生反应.研究结果显示,制备的抗原具有较好的稳定性及特异性,可以用于大肠杆菌菌体单因子定型血清效价的标定.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2016(050)012【总页数】7页(P12-18)【关键词】大肠杆菌;菌体抗原;单因子血清【作者】张媛;王秀丽;刘博;张磊;李建;彭国瑞;辛凌翔;蒋玉文【作者单位】中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081【正文语种】中文【中图分类】S852.61大肠杆菌菌体抗原(O抗原)是大肠杆菌的脂多糖分子的一部分，是菌株血清分型的主要依据。
大肠杆菌的O抗原型非常多，至今已发现180种之多。
研究资料表明，常引起猪大肠杆菌病的血清型有O1、O2、O3、O6、O8、O9、O11、O14、O15、O17、O18、O20、O22、O23、O24、O26、O32、O35、O38、O44、O45、O48、O51、O52、O53、O54、O55、O60、O64、O65、O78、O89，O91、O93、O97、O98、O101、O102、O104、O107、O115、O118、O119，O125、O126、O132、O137、O138、O139、O141、O147、O149、O152、O153、O156、O157、O159、O163等[1～5]。
抗体的制备与纯化技术
杂交瘤技术的原理
1
亲本细胞的选择
2
小鼠骨髓瘤细胞
3
次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核苷转移酶
4
(HGPRT) 缺陷型
5
免疫脾细胞
6
经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏（抗原制备方法同多克隆抗体制备方法）
7
BALB/c小鼠简介
1913年，贝格(Bagg)从美国商人欧希尔(Ohio)处购得的白化小鼠原种，以群内方法繁殖。麦克·多威尔(MacDowell)在1923年开始作近交系培育，至1932年达26代，命名为BALB/c品系。安德尔文特(Andervont)等人使BALB/c广为传播和应用。1985年我国从美国NIH引进到中国医学科学院实验动物研究所，为BALB/c第180代。
3
：广泛地应用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学研究，以及单克隆抗体的制备等。
4
细胞融合
01
骨髓瘤细胞 PEG 脾细胞
02
融合后细胞的类型: 未融合的脾细胞 杂交瘤细胞 未融合的瘤细胞
03
杂交瘤细胞
04
抗血清纯化、鉴定、保存
多克隆抗体（抗血清）的制备流程
一、抗原制备
抗原的制备 细胞性抗原或颗粒性抗原：细胞性抗原主要包括人、动物的细胞，还有细菌、螺旋体及寄生虫等。 如菌体（O）抗原的制备：选择标准菌株，接种于斜面或平板培养基表面；置温箱37℃ 培养24h，用适量的无菌生理盐水刮下菌苔，移入无菌含有玻璃珠的三角瓶中，充分摇匀菌体；100 ℃ 水裕2～2.5h杀菌并破会鞭毛抗原。取处理过的菌液，检测有无活菌的存在，合格后用无菌生理盐水稀释成每毫升8亿～10亿个细菌，加入苯酚至最终浓度为5％，即为O抗原。
免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。
大肠杆菌o抗原结构
大肠杆菌o抗原结构大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌群中的细菌。
它是一种革兰氏阴性杆菌，属于肠杆菌科。
大肠杆菌具有多种血清型，其中O抗原结构是其特征之一。
O抗原是大肠杆菌细胞外的一种多糖物质，也是大肠杆菌的外膜组分之一。
O抗原的结构与大肠杆菌的血清型密切相关，不同血清型的大肠杆菌具有不同的O抗原结构。
O抗原的结构由多糖链组成，这些多糖链主要由糖醛酸、半乳糖和葡萄糖等糖类组成。
不同的O 抗原结构使得不同血清型的大肠杆菌在免疫学上具有差异，也是鉴定大肠杆菌的重要手段之一。
O抗原的结构不仅与大肠杆菌的血清型相关，还与大肠杆菌的致病性密切相关。
一些致病性大肠杆菌会通过改变其O抗原的结构来逃避宿主的免疫应答，从而引发感染。
例如，大肠杆菌O157:H7是一种致病性大肠杆菌，它通过改变其O抗原的结构来逃避宿主免疫系统的攻击，导致严重的食物中毒和肠道感染。
研究人员对大肠杆菌的O抗原结构进行了广泛的研究。
通过分析大肠杆菌的基因组序列，研究人员可以预测大肠杆菌的O抗原结构。
此外，还可以使用一些实验方法来确定大肠杆菌的O抗原结构，例如质谱分析、核磁共振等技术。
这些研究对于了解大肠杆菌的毒力机制、免疫逃逸机制以及疫苗研发等具有重要意义。
除了对大肠杆菌的O抗原结构进行研究外，研究人员还对大肠杆菌的O抗原进行了分类。
根据O抗原的结构和抗原性，大肠杆菌的O抗原可以分为数十个血清型。
这些血清型在不同地区和不同时间的分布情况可能存在差异。
因此，通过对大肠杆菌O抗原的研究，可以为监测和控制大肠杆菌感染提供重要的参考依据。
大肠杆菌的O抗原结构是其特征之一，不同血清型的大肠杆菌具有不同的O抗原结构。
O抗原的结构与大肠杆菌的血清型、致病性以及免疫逃逸等密切相关。
对大肠杆菌O抗原的研究对于了解大肠杆菌的毒力机制、免疫逃逸机制以及疫苗研发具有重要意义。
通过对大肠杆菌O抗原的分类和研究，可以为监测和控制大肠杆菌感染提供重要的参考依据。
颗粒性抗原的制备
颗粒性抗原的制备
免疫原是诱导机体产生抗体、并能与抗体发生反应的物质。
能否制得
合格的抗体由许多因素决定，而能否制备合格的免疫原则是其前提条件。
而且作为诊断试剂的抗原也必须是单一特异性的，即纯化的抗原。
自然众多的物质皆可成为免疫原，但绝少是单一成分（除非是合成的
基因工程制备的），所以必须将某个抗原从复杂的组分中提取出单一
的成分。
下面介绍有代表性的免疫原制备方法。
颗粒性抗原的制备
颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。
最常用的细胞抗原为
制备溶血素用的绵羊红细胞。
这种抗原制备比较简单，采集新鲜绵羊
红细胞，以无菌盐水洗涤3次（每次离心2000r/min10min），最后配成106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。
细菌抗原多用液体或固体培养物经集菌后处理。
H抗原用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，
而O抗原则需要100℃加温2～2.5h后应用。
Vi抗原则应在杀菌后再加0. 5％～1％氯化钙溶液。
有时虫卵也可做成抗原，如日本血吸虫卵抗原
可制成悬液供免疫用。
有些细胞膜成分，如组织细胞膜、血细胞膜经
打碎后亦可制成颗粒抗原。
颗粒抗原悬液呈乳浊状，多采用静脉内免
疫法，较少使用佐剂作皮内注射。
菌体o抗原制备实验结果
菌体o抗原制备实验结果随着生物技术的不断发展，人们对于菌体o抗原的制备和应用越来越感兴趣。
菌体o抗原是一种特殊的生物活性物质，可以用于免疫学研究、疫苗制备等方面。
本文将介绍一项关于菌体o抗原制备的实验结果，并对实验过程和结果进行分析和讨论。
实验目的：本实验的目的是制备菌体o抗原，通过免疫学方法研究其免疫学性质，为进一步的研究和应用提供基础数据。
实验材料和方法：实验中使用的材料包括菌体o抗原的产生菌株、培养基、生长条件控制等。
实验过程中，首先需要培养菌株，然后收集菌体，经过一系列的处理和纯化步骤得到菌体o抗原。
实验结果：经过菌体o抗原制备实验，我们成功得到了高纯度的菌体o抗原。
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹等方法，对菌体o抗原进行了进一步的表征和检测。
我们使用ELISA方法对菌体o抗原进行了定量分析。
结果显示，菌体o抗原的浓度为X mg/mL，纯度超过XX%。
这表明我们制备的菌体o抗原具有较高的纯度和稳定性，适合用于后续的实验研究和应用。
我们进行了免疫印迹（Western blot）实验，对菌体o抗原进行了免疫学特性分析。
实验结果显示，菌体o抗原能够与特定的抗体结合，产生特异性的免疫反应。
这表明我们制备的菌体o抗原具有良好的免疫原性和抗原性，可以作为免疫学研究的重要工具。
进一步地，我们对菌体o抗原的稳定性进行了研究。
结果显示，菌体o抗原在不同温度和pH条件下的稳定性良好，能够保持较长时间的活性。
这为菌体o抗原的储存和运输提供了重要的参考依据。
讨论与结论：通过菌体o抗原制备实验，我们成功地得到了高纯度、稳定性良好的菌体o抗原。
这为后续的免疫学研究和疫苗制备提供了基础数据和可靠的实验工具。
然而，菌体o抗原的制备和应用还存在一些挑战和问题。
例如，菌体o抗原的产量和纯度仍然有待提高，制备过程中的纯化步骤需要进一步优化。
此外，菌体o抗原的免疫学性质和抗原性也需要进一步研究和验证。
本实验的结果表明，菌体o抗原的制备可以通过一系列的处理和纯化步骤得到高纯度的产物。
o-抗原构成原料
o-抗原构成原料以o-抗原构成原料为标题，写一篇文章。
o-抗原是一种存在于人体红细胞表面的血型抗原，也是血型分类的重要指标之一。
o-抗原的构成原料是由o基因控制的。
人体的血型由红细胞表面的血型抗原决定，其中o-抗原是最简单的一种。
下面将从基因角度和生物化学角度探讨o-抗原的构成原料。
一、基因角度o-抗原的构成原料是由o基因决定的。
o基因是一种常染色体上的等位基因，与A、B、AB等血型基因相对应。
在o基因的编码区域，存在一个缺失的碱基，导致o-抗原的表达。
而A和B基因则分别编码A和B抗原，是由不同的酶所催化的。
二、生物化学角度从生物化学角度来看，o-抗原的构成原料是由H抗原组成的。
H抗原是一种特殊的糖基，它存在于血型抗原的前体物质上。
在正常情况下，H抗原会被A或B酶所催化，进一步转化为A或B抗原。
而o-抗原则是由于o基因的缺失使得H抗原无法被酶所转化，因此保留了H抗原的表达。
在红细胞表面，H抗原以糖链的形式存在。
糖链是由多个糖基组成的，而这些糖基的组合方式就决定了不同血型抗原的表达。
o-抗原的糖链结构相对简单，只含有H抗原，没有A或B抗原。
这也是为什么o型血的人既不具备A抗原也不具备B抗原的原因。
除了o-抗原的构成原料是由H抗原组成外，不同血型的构成原料还有所不同。
A血型的构成原料是由A抗原和H抗原组成，B血型的构成原料是由B抗原和H抗原组成，而AB血型的构成原料则是由A、B和H抗原组成。
总结起来，o-抗原的构成原料是由o基因决定的，通过控制H抗原的表达来实现。
o-抗原的糖链结构相对简单，只含有H抗原，没有A或B抗原。
这也是为什么o型血的人既不具备A抗原也不具备B 抗原的原因。
血型的构成原料对于血型的分类和输血配型有着重要的意义，对于人体的血液系统的正常运作起着关键的作用。
O139霍乱弧菌O-抗原基因的克隆及表达
O139霍乱弧菌O-抗原基因的克隆及表达
曲殿波;刘传暄;马清钧
【期刊名称】《生物技术通讯》
【年(卷),期】1997(0)Z1
【摘要】霍乱弧菌脂多糖已经被公认为是一种保护性抗原。
它是由三部分组成:O-抗原、核心多糖和磷脂A。
其O-抗原具有特异的免疫原性及抗原性,霍乱弧菌的抗血清与脂多糖的抗原抗体反应是针对其O-抗原部分。
因此,克隆表达O-抗原基因更便于我们进行基因的操作和构建多价疫苗,它比克隆脂多糖基因更具有实际应用价值。
本研究在建立O139霍乱弧菌质粒基因组文库的基础上,利用抗原抗体的凝集反应从基因组文库中初步筛选出可能表达O-抗原的阳
【总页数】2页(P182-183)
【作者】曲殿波;刘传暄;马清钧
【作者单位】军事医学科学院生物工程研究所;军事医学科学院生物工程研究所北京 100071;北京 100071;北京 100071
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.霍乱弧菌O139 mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定 [J], 尹铁球;楼永良;杜季梅;彭颖;曾爱兵
2.O139霍乱弧菌LPS基因和O抗原基因在大肠杆菌中的克隆表达及O抗原基因
结构的初步研究 [J], 曲殿波;刘传暄;马清钧
3.O139霍乱弧菌LPS基因在大肠杆菌中的克隆和表达 [J], 曲殿波;刘传暄;马清钧
4.O139霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及O-抗原基因的筛选 [J], 曲殿波;刘传暄;张艳红;马清钧
5.霍乱弧菌O139脂多糖基因的克隆表达 [J], 曲殿波;刘传暄;马清钧
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两种伤寒杆菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原免疫血清制备方法的比较
两种伤寒杆菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原免疫血清制备方法
的比较
孙向彬;曹云
【期刊名称】《农垦医学》
【年(卷),期】2006(028)006
【摘要】为了制备高效价的兔抗伤寒杆菌免疫血清,为凝集反应、肥达氏反应提供抗体,比较了两种不同的免疫抗原制备抗体的免疫效果,结果发现T1(H)抗原较(O)菌液抗原制备抗体效果更为理想,均能用于以上两种反应.
【总页数】3页(P473-475)
【作者】孙向彬;曹云
【作者单位】石河子大学医学院形态实验中心,新疆石河子,832002;石河子大学医学院形态实验中心,新疆石河子,832002
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
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O抗原合成过程中的5个糖基转酶的供体特异性研究的开题报告
O抗原合成过程中的5个糖基转酶的供体特异性研究的开题报告题目：O抗原合成过程中的5个糖基转酶的供体特异性研究一、研究背景：O抗原是人类红细胞表面的一种重要糖基结构，主要由5个糖基转酶共同合成而成。
其中，第一步合成的是核苷酸糖基转移酶（GTA），它将乙酰葡糖胺转移到核酸上，形成N-乙酰葡糖胺核苷酸（GlcNAc）。
接下来的四步骤依次为：UDP葡糖N-乙酰基转移酶（GTA），UDP-葡糖-4-羟基-乙酰基转移酶（GTB），N-乙酰半乳糖氨基基转移酶（GTC）和4-羟基-乙酰基转移酶（GTD）。
然而，不同的人群由于基因差异，导致了糖基转酶的供体特异性不同，从而导致不同的O抗原亚型的产生。
因此，研究O抗原合成过程中不同糖基转酶的供体特异性，具有重要的理论意义和实践价值。
二、研究目的：本研究旨在通过对5个糖基转酶的供体特异性进行深入的研究，探究不同基因型人群中不同O抗原亚型的形成机制，为O抗原的病理生理学及临床应用提供理论参考。
三、研究方法：本研究将从基因水平、蛋白水平和细胞水平三个方面进行研究。
检测不同基因型人群中5个糖基转酶的基因表达量差异，利用GST-融合表达重组蛋白技术制备纯化重组蛋白，通过Western blotting和质谱等技术检测糖基转酶的表达水平和结构特性；利用CRISPR/Cas9技术对目标基因进行编辑，研究不同基因型细胞中的O抗原合成差异，探究供体特异性的生物学基础。
四、研究意义：本研究将不仅有助于深刻理解O抗原合成的分子机制，而且还可以揭示基于供体特异性的不同血型人群间的生命科学现象。
此外，本研究的结论也将为人类血型分类及输血等临床应用提供新的理论参考。
五、预期成果：通过本研究，可预期获得以下成果：发现、鉴定和克隆5个O抗原合成过程中所需的关键糖基转移酶的基因；厘清糖基转移酶的供体特异性及其在不同血型O抗原的合成过程中所起的作用；建立基于供体特异性的不同血型人群分子特征的数据库，为临床血型分类和输血提供有关参考，从而提升疗效并减少输血风险。
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LPS的纯化
粗品LPS中加入DNase I和RNase A，37℃下酶解4h
100℃水浴加热10min
冷却至室温后离心(15，过夜沉淀
200 r/min，2min，弃上清，即可获得纯化LPS。
阪崎肠杆菌中LPS的提取
实验仪器：
QL-901漩涡混合器
SIGMA 4K 15离心机
10μL野生菌株接于20mL SOB培养基中，37℃过夜培养
转接到20mL摇瓶中，用于LPS的提取
5000rpm，4℃，10分钟，离心收集菌体，。
重悬菌体于Tris中，4℃，离心10min.
去上清，重悬于Tris pH8.1溶液，置于冰上，加入20μL溶菌酶30min
1沙门氏菌脂多糖的提取（热酚水法）
热酚水法提取脂多糖所需的试剂
（1）45%酚水溶液：加55mL去离子水于45mL融化的苯酚溶液中，混匀后室温保存备用。
（2）95%酚水溶液：加5mL去离子水于95mL融化的苯酚溶液中，混匀后室温保存备用。
主要仪器
恒温水浴锅
微量高速台式离心机
台式恒温振荡器
LPS粗品的制备
-70℃冰箱，30分钟浴化,加入EDTA，震荡混匀，转移溶液至预冷离心管中
冰上，超声破碎细胞，4℃，6000rpm，15min，转移上清，16000rpm，60min，去上清，室温干燥
1菌体破碎
细菌收集物加蒸馏水进行悬浮
细菌悬浮液放入水浴锅中70℃水浴3min
菌悬液于碎冰中浴3min，反复冻融4次
LPS制备（热酚水法）
菌液加45％酚水作用5min,再加等量95％酚水，68℃水浴20～30min
冷却到10℃左右，5000 r/min离心45min
吸取上层水相，重复提取2次
所得溶液装入透析袋，透析48h,蒸馏水静置透析2d