实验一 细菌形态学检查
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内容
复红酒精溶液(A液) 鞣酸水溶液(B液) 钾明矾溶液(C液)
规格
20 ml 20 ml 20 ml
主要成分
品红 鞣酸 钾明矾
工作液过滤瓶
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用 工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
芽胞染色-染液规格
石碳酸复红液 脱色液
20 ml 20 ml
碱性品红 乙醇
碱性美蓝液
20 ml
亚甲蓝
芽胞染色-染色步骤与方法
真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。 2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。 3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在 消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。 6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后， 关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
形态学检查的意义
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
结核涂片
淋球菌涂片
显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调
香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经 空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰
镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）
形态学检查的方法
不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法
不染色标本检查法1
压片法（压滴法）
1. 用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央
2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察
不染色标本检查法2
悬滴法
染色标本检查法
染色基本步骤：
将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗
碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
实验操作
每组一套菌种：
葡萄球菌：革兰阳性球菌
大肠埃希菌：革兰阴性杆菌
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。 2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。
5． 细菌特殊结构的染色与观察。
【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项：
涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
脱色过度：革兰阳性菌
革兰阴性菌
18~24 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照Baidu Nhomakorabea
特殊染色（示教）
鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色
鞭毛染色-套组内容及规格
涂片：
干燥：室温自然干燥
固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 染色：革兰染色 镜检
革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min；
c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30 s，自然干燥后镜检
革兰染色-结果与注意事项
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系 取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使
用
鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥
复红酒精溶液(A液) 鞣酸水溶液(B液) 钾明矾溶液(C液)
规格
20 ml 20 ml 20 ml
主要成分
品红 鞣酸 钾明矾
工作液过滤瓶
鞭毛染色-工作液配制
根据使用量将A液、B液、C液等比例混合，并置于工 作液过滤瓶内，混合均匀静置2 h 后方可使用 工作液2~8 ℃ 约可保存2~3天
鞭毛染色-玻片的处理
鞭毛染色-操作方法
滴加工作液于玻片上，染色10~15 min 将玻片微倾斜，用蒸馏水一滴滴冲洗干净 将玻片直立使水分流尽，自然晾干，镜检 结果：菌体及鞭毛均为红色
芽胞染色-染液规格
石碳酸复红液 脱色液
20 ml 20 ml
碱性品红 乙醇
碱性美蓝液
20 ml
亚甲蓝
芽胞染色-染色步骤与方法
真菌：孢子 变形杆菌：鞭毛染色（示教） 枯草杆菌：芽胞染色（示教）
革兰染色
生物安全
1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口 罩。 2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在 指定的操作区。 3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在 消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。 5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地 面等处，应立即报告老师及时适当处理。 6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后， 关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
形态学检查的意义
细菌鉴定的重要手段，有助于细菌的初步分群 是决定采用何种生化反应的重要提示 初步诊断
结核涂片
淋球菌涂片
显微镜的使用
先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜 粗调 + 微调
香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经 空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃 相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物 像清晰
镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）
形态学检查的方法
不染色标本检查法 染色标本检查法 特殊染色检查法
不染色标本检查法1
压片法（压滴法）
1. 用接种环分别取细菌2~3环，置于洁净载玻片中央
2. 轻轻覆上盖玻片 3. 油镜下观察
不染色标本检查法2
悬滴法
染色标本检查法
染色基本步骤：
将有芽胞细菌制成涂片，自然干燥后加热固定 滴加石碳酸复红液于涂片上，并弱火加热，使染液冒
蒸气约5 min，冷后水洗，并用脱色液脱色2 min，水 洗
碱性美蓝复染30 s，水洗，干后用油镜镜检 结果：芽胞呈红色，菌体呈蓝色
实验操作
每组一套菌种：
葡萄球菌：革兰阳性球菌
大肠埃希菌：革兰阴性杆菌
【实验目的】
1． 掌握临床微生物实验室规则，生物安全及其它注 意事项。 2． 掌握显微镜油镜的使用和保护。 3． 熟悉显微镜的结构和各部分的功能。 4． 不染色和各种染色标本的显微镜观察。
5． 细菌特殊结构的染色与观察。
【实验内容】
光学显微镜的使用 不染色标本的检查 革兰氏染色和细菌基本形态观察 细菌特殊结构染色和观察
结果判断：紫色为革兰阳性菌、红色为革兰阴性菌 注意事项：
涂片不宜过厚 固定不宜过热 脱色是关键：脱色不够：革兰阴性菌 革兰阳性菌
脱色过度：革兰阳性菌
革兰阴性菌
18~24 h 菌龄最佳 已知金葡与大肠作为阳性和阴性对照Baidu Nhomakorabea
特殊染色（示教）
鞭毛染色 芽胞染色 荚膜染色
鞭毛染色-套组内容及规格
涂片：
干燥：室温自然干燥
固定：杀死细菌; 使菌体与玻片粘附; 菌体蛋白变性易着色 染色：革兰染色 镜检
革兰染色-基本步骤
a)初染：结晶紫 1 min； b)媒染：碘液 1 min；
c)脱色：95%乙醇
至无紫色脱落为止； d)复染：石碳酸复红 30 s，自然干燥后镜检
革兰染色-结果与注意事项
鞭毛染色成功与否，与玻片的洁净度有非常密切的关 系 取新的载玻片，先用洗洁精清洗干净后，再浸泡在 3%盐酸酒精2天以上，使用时从酸性酒精中取出，并 用纯水冲洗干净，再以干净纱布擦干或自然干燥后使
用
鞭毛染色-涂片的制备
将菌种接种在肉汤管中，经24 h 37℃孵育后离心， 倒掉上清液，用接种环沾取沉淀物一环置于玻片的一 端，并将玻片倾斜，使菌液自然流动至玻片的另一端， 室温下自然干燥