脑膜炎奈瑟氏菌及其检测方法
脑膜炎奈瑟菌肺炎疾病详解
疾病名：脑膜炎奈瑟菌肺炎英文名：neisseria meningitidis pneumonia缩写：别名：脑膜炎萘瑟氏菌肺炎；脑膜炎双球菌肺炎疾病代码：ICD：A39.8概述：脑膜炎奈瑟菌(neisseria meningitidis)主要引起流行性脑脊髓膜炎，至于脑膜炎奈瑟菌肺炎，有不少人认为是继发于脑膜炎奈瑟菌败血症的一种少见的化脓性迁徙合并症。
实际上，1907 年首次报告后，已有许多资料表明脑膜炎奈瑟菌可作为原发性下呼吸道感染的致病菌，引起原发性脑膜炎奈瑟菌肺炎。
该菌又称脑膜炎双球菌，为需氧革兰阴性球菌，普通培养基上不生长，选择性培养基利于痰标本中脑膜炎奈瑟菌的分离和鉴定。
根据菌体荚膜层的多糖，目前至少可分 13 种血清型。
其中A.B.C.X.Y.Z 和W-135 型在临床上日趋重要。
据统计资料分析，过去 10 余年中在普通人群及医院内人群中，引起呼吸系统感染的血清型为Y 型和W-135 型，其传播途径主要通过飞沫直接从空气传播，呼吸道感染了流感病毒或腺病毒的人群更具有易感性。
其病理改变为渗出性化脓性炎症，沿肺泡或支气管肺泡分布，个别呈大叶浸润甚至肺组织坏死和脓肿形成。
流行病学：人类是惟一的传染源，病原菌存在于患者或带菌者的鼻咽部，带菌者对周围人群的危险性大于病人。
在非流行期间人群带菌率不到 5%，但最近有资料认为人群带菌率可高达5%～15%。
在流行期间人群带菌率显著增高，可达50%~ 100%。
在年青人集中的人群中如军队、学校等处，脑膜炎奈瑟菌感染极易引起流行。
脑膜炎奈瑟菌所致呼吸系疾病是在本世纪初被认识的，尤其是在1918～1919 年流感流行期间，脑膜炎奈瑟菌是重要的呼吸道病原菌。
此后，由脑膜炎奈瑟菌引起的肺炎很少有报道。
直至70 年代，随着细菌检测技术的进步，有关脑膜炎奈瑟菌肺炎的报道才不断增多，如Y 型脑膜炎奈瑟菌肺炎曾在某军事基地有过暴发流行。
据统计资料分析，过去 10 余年中，在普通人群及医院内人群中，引起呼吸系统感染的血清型为Y 型和W-I35 型，其传播途径主要通过飞沫直接从空气传播。
脑膜炎奈瑟菌实验室检测操作规范详解知识
附件7 脑膜炎奈瑟菌实验室检测操作规范一、脑膜炎奈瑟菌鉴定程序和标准1、 脑膜炎奈瑟菌细菌鉴定程序脑膜炎奈瑟菌的鉴定通常是通过在CAP 和BAP 上生长物通过革兰染色镜检和生化反应检测以确定是否为脑膜炎奈瑟菌，在此基础上再通过脑膜炎奈瑟菌分群诊断血清进行血清分群。
图xx 脑膜炎奈瑟菌鉴定程序2、 脑膜炎奈瑟菌感染确诊实验室检测疑似流脑病例具有以下实验室检测结果之一，即可确诊：1. 培养：自脑脊液或血液标本中分离到脑膜炎奈瑟菌。
2. 乳胶凝集检测：采用乳胶凝集检测试剂盒，脑脊液标本乳胶凝集检测结果BAP,CAP 生长物革兰氏染色为阴性双球菌氧化酶反应阳性，进行生化鉴定 阴性，非脑膜炎奈瑟生化鉴定（糖氧化）Glu Mal Lac Suc＋ ＋ － －阳性，为脑膜炎奈瑟菌进行血清分群 阴性，非脑膜炎奈瑟菌A 、B 、C 、H 、I 、K 、L 、W135、X 、Y 、Z 、Z ´(29E)不同血清群阳性，目前Bio-Rad乳胶凝集检测试剂盒能检测A群、B群、C群和W135/Y群脑膜炎奈瑟菌感染。
3.PCR检测：脑脊液标本或血液标本PCR扩增特异性脑膜炎奈瑟菌DNA 片段阳性。
通过ctrA基因扩增，鉴定脑膜炎奈瑟菌，通过扩增orf-2、sia D(B)、sia D(C)、sia D(Y)、sia D（W135）等基因片段鉴别不同的血清群，或通过Real-time PCR检测出特异性基因片段阳性。
4.血清IgG抗体滴度4倍增高：恢复期血清抗体滴度较急性期4倍增高。
二、脑膜炎奈瑟菌标本接种培养（一）脑脊液标本1．脑脊液标本预处理脑脊液标本送到实验室后，应立即离心，2000rpm，20min，用巴斯德吸管吸取上清，进行乳胶凝集实验检测抗原。
离心后的沉淀进行剧烈振荡或充分混合。
取1滴沉淀准备革兰染色，1滴划线接种原始培养基。
（注意:如果获得的脑脊液不足1mL则不进行离心，直接用其进行革兰染色和涂板培养）。
脑膜炎奈瑟菌肺炎(脑膜炎萘瑟氏菌肺炎,脑膜炎双球菌肺炎)
脑膜炎奈瑟菌肺炎（脑膜炎萘瑟氏菌肺炎，脑膜炎双球菌肺炎）简介脑膜炎奈瑟菌肺炎是一种由奈瑟菌（又称为萘瑟氏菌或双球菌）引起的感染疾病，通常表现为脑膜炎和肺炎症状。
奈瑟菌是一种革兰氏阴性细菌，可以引起严重的传染病，包括脑膜炎、败血症和肺炎等。
本文将介绍脑膜炎奈瑟菌肺炎的病因、临床表现、诊断和治疗等方面内容。
病因脑膜炎奈瑟菌是导致脑膜炎奈瑟菌肺炎的致病菌，主要通过空气飞沫传播，感染途径包括呼吸道、伤口或接触感染者的分泌物等。
奈瑟菌在一些特定人群中很常见，例如婴幼儿、老年人和免疫系统较差的个体更容易感染。
临床表现脑膜炎奈瑟菌肺炎的临床表现各异，主要症状包括高热、头痛、呼吸困难、嗓子痛、咳嗽、乏力、恶心呕吐等。
严重感染可能导致谵妄、昏迷，甚至危及生命。
诊断诊断脑膜炎奈瑟菌肺炎需要进行病史询问、体格检查和实验室检查。
其中，脑脊液检查、血液培养、呼吸道分泌物培养等是常用的诊断方法。
影像学检查如X射线、CT扫描等可帮助评估肺部是否受累。
治疗脑膜炎奈瑟菌肺炎的治疗主要包括抗生素治疗、对症治疗和支持疗法。
抗生素通常选择针对奈瑟菌有效的药物，如头孢哌酮/舒巴坦、大环内酯类药物等。
对症治疗包括降温、保持充分水分、控制呼吸等。
在重症患者中，可能需要进行呼吸机辅助通气或其他支持治疗。
预防预防脑膜炎奈瑟菌肺炎的措施包括接种疫苗、保持良好的个人卫生习惯、避免接触感染者的呼吸道分泌物、及时治疗感染等。
对于易感染群体，如老年人、儿童和免疫系统较差者，更需要加强预防措施。
结语总的来说，脑膜炎奈瑟菌肺炎是一种严重感染疾病，对治疗和预防都提出了挑战。
及时的诊断和治疗对于降低病情严重程度和减少并发症的发生至关重要。
公众应增强对该疾病的认识，尤其是在疫情期间要注意保持个人卫生，避免接触感染源，有效预防脑膜炎奈瑟菌肺炎的发生。
奈-瑟-菌-属(Neisseria)
2、此菌易耐药，治疗应彻底。
Terms of Microbiology
Neisseria N.meningitidis Meningococcus N.gonorrhoeae Gonococcus
奈瑟菌属 脑膜炎奈氏菌 脑膜炎球菌 淋病奈氏菌 淋球菌
临床表现
潜 伏 期 1 － 10 天，一般为 2 － 3 天
普通型 暴发型
败血症 型
约占全部病例旳90% 起病急骤，病情凶险， 如不急救常二十四小时内死亡 主要见于成人
脑膜炎奈瑟菌 （N.memingitidis)
临床表现
一般型
1。上呼吸道感染期 多数病人无明显症状，
部分病人有咽炎。
2。败 血 症 期
防治原则：
治疗－首选青霉素、 磺胺类药，理由是 轻易透过血脑屏障
淋 球 菌（Gonococcus)
中国性病报告
中国性病麻风病控制中心旳龚向东说： “我国正式公布数字与实际旳性病发病数 大约20倍左右差距，估计起码有1000万 例以上”.
淋 球 菌（Gonococcus)
中国性病报告
1990年上海召开第一次性病大会上，教 授夏国美悲观地指出：“消灭性病是不可 能旳,控 制也是不可能旳，要做到旳是降低 发病率，但也不一定能做到”。
脑膜炎奈瑟菌 （N.memingitidis)
流行病学
易感人群
男女发病率大致相等。大城市发病分散， 以 2岁下列发病率最高；中小城市则以 2 － 4 岁或5 － 9岁旳年龄组发病率最高；而偏僻 山区则一旦传染源介入，常引起点状暴发， 15岁以上发病者可占总发病率旳二分之一以 上且一户二人或二人以上发病者也不少见。
脑膜炎奈瑟菌体外敏感性试验报告
脑膜炎奈瑟菌体外敏感性试验第二次报告试验材料1.菌株来源：中国CDC送检的22株脑膜炎奈瑟菌，原始编号1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，222.送检时间：2005年2月10日试验方法a)琼脂稀释法：严格按临床实验室标准化研究所〔CLSI/NCCLS〕2005年推荐的指南进行，培养基为含5%羊血的Mueller-Hinton 琼脂b)试验的抗生素种类：i.治疗用药组：青霉素，氨苄西林，头孢曲松，头孢噻肟，美洛培南，氯霉素，ii.预防用药组：阿奇霉素，米诺环素，环丙沙星，左氧氟沙星，TMPco(甲氧苄啶/磺胺甲恶唑)和利福平。
c)敏感性判定折点：2005年2月12日，通过Email从美国Teresa Stitely, Manager (Focus Bio-Inova,Inc.) 和CLSI/NCCLS委员Thomsons教授获得2005年CLSI/NCCLS推荐的脑膜炎奈瑟菌最新判定标准。
见表1表1. CLSI/NCCLS 2005年推荐的12种抗生素对脑膜炎奈瑟菌的判定折点（ug/ml）结果试验结果分两部分1.12种抗生素对22株脑膜炎奈瑟菌的体外抗菌活性，MIC试验结果见表2，2. 12种抗生素对22株脑膜炎奈瑟菌的MIC（ug/ml）分布的柱状图，见图形所示表2. 12种抗生素对22株脑膜炎奈瑟菌的体外抗菌活性结果抗生素判定折点耐药％中介％敏感％MIC50MIC90MIC(ug/ml)平均值MIC 范围(ug/ml)治疗用药组敏感≤耐药≥Penicillin G（青霉素G）0.06 0.5001000.0160.0320.0210.016 – 0.032 Ampicillin（氨苄西林）0.12 2001000.0160.0160.0170.016 – 0.032 Meropenem（美洛培南）0.25 －001000.0160.0160.0160.016 – 0.016 Ceftriaxone（头孢曲松）0.12 －001000.0160.0160.0160.016 - 0.016 Cefotaxime（头孢噻肟）0.12 －001000.0160.0160.0160.016 – 0.016 Chloramphenicol（氯霉素） 2 8001000.510.623.5 – 1预防用药组Minocycline（米诺环素） 2 －001000.1250.250.1510.125 - 0.25 Azithromycin(阿奇霉素) 2 －001000.0320.0320.030.016 – 0.25 Rifampin（利福平）0.5 2001000.0320.0640.0280.004 - 0.125 Levofloxacin (左氧氟沙星)0.032 0.12572.7027.30.250.250.1040.008 – 0.25 Ciprofloxacin（环丙沙星）0.032 0.12572.7027.30.1250.1250.0490.004 – 0.125 Trimethoprim/Sulfamethoxazol（甲氧苄啶/磺胺甲恶唑，TMPco）0.125 0.51000024 2.5820.5 - 128敏感耐药治疗用药敏感耐药治疗用药敏感不敏感治疗用药敏感不敏感治疗用药敏感耐药治疗用药敏感不敏感治疗用药预防用药敏感耐药敏感不敏感预防用药预防用药敏感不敏感敏感不敏感预防用药敏感耐药预防用药敏感耐药预防用药敏感不敏感敏感不敏感结 论中国CDC 送检的22株脑膜炎奈瑟菌体外敏感试验结果：按临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的治疗用药组和预防用药组进行分析总结：治疗用药组：青霉素，氨苄西林，美洛培南，头孢曲松，头孢噻肟和氯霉素，在体外表现出高度敏感，未发现耐药的菌株。
医院微生物室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
医院微生物室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
l、标本采集以无菌方法采集脑脊液2～5ml，盛于无菌瓶中送检。
2、直接检查脑脊液可直接涂片、革兰染色或抗酸染色等，然后镜检。
无色透明的脑脊液，应作离心取沉淀物涂片、染色镜检。
3、检验步骤：
3.1、一般细菌涂片检查除结核性脑膜炎外，由其它细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液明显混浊，可直接涂片，革兰染色镜检。
无色透明的脑脊液，应离心后涂片、染色、镜检，根据染色及形态特征可初步提示细菌的种类。
结核分枝杆菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物(3000r／min。
30min)作抗酸染色。
新型隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色。
3.2、分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血平板、巧克力平板，巧克力平板应置
- 1 -
于CO 2环境中35℃培养18～24小时。
脑脊液也可直接注入血培养瓶。
4、检验程序 脑脊液
直接涂片
分离培养 （取离心沉淀）
不染色标本 染色标本 血平板、巧克力 沙氏培养基 （5%CO 2环境） 血平板
动力试验 革兰染色 抗色染色
墨汁染色 脑膜炎奈瑟菌
脑膜炎奈瑟菌
A T
B Expression ATB 鉴定药敏试条 鉴定药敏试条
5、脑脊液培养常见病原菌
革兰阳性菌革兰阴性菌
金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟菌
A、B群链球菌卡他布兰汉菌
肺炎链球菌流感嗜血杆菌
结核分支杆菌肠杆菌科菌种
产单核李斯特菌脑膜败血性黄杆菌
新型隐球菌假单胞菌
白色念珠菌
2。
脑膜炎奈瑟球菌NmeningitidisPPT课件
细菌突破血脑屏障
脑脊髓膜
化脓强直
8
免疫力
儿童免疫力弱(6个月-2岁半)， 发病率高 免疫力，以体液免疫为主
9
（三）微检
标本：采集注意（见前） 2、直接涂片染色：中性粒细胞查到G-肾形双球
菌——初步诊断 若无菌发现，但中性粒C增多，也怀疑 ∵此菌易自溶，抵抗力低，菌易消失。 （四）防治原则
极大
4
荚膜多糖的性质
抗吞噬 是抗原，引起体液免疫 在脑膜炎病人的脊髓液中可检测 作为抗原制作成疫苗
5
所致疾病
传播方式—飞沫airborne droplets 传染源—病人或带菌者carrier
6
病菌
↓
鼻咽部繁殖（免疫力强多无症状或上炎，获免疫力）
免疫力低者
菌血症或败血症（内毒素引发症状）
仅1%—2%
营养要求高（巧克力色培养基“chocolate”agar）
专性需O2，5%—10% CO2中生长更佳 2
抵抗力 很弱(体外难存活,室温3h死亡) 怕冷怕干燥 送检标本保温、保湿迅速 易自溶
3
（二）致病性与免疫性 1、致病物质 菌毛(粘附) 荚膜多糖(抗吞噬antiphagocytic) 内毒素（endotoxin主要）:血管损伤
脑膜炎奈瑟球菌
N meningitidis
1887年发现,引起全球性疾病
所致疾病： 流行性脑脊髓膜炎meningitis(流脑) 今年我国发病率0.5-1/10万
1
（一）生物学性状 1、形态与染色
肾形kidney beans，成双排列in pairs， 凹面相对 G- (gram-negative) 新分离出的菌株 荚膜capsule、菌毛 2、培养性状
临床微生物学检验：肠球菌奈瑟菌和卡他莫拉菌
生物学特性和实验室检查
淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae)形态特征
• 形态：肾形或咖啡豆状。 • 排列：凹面相对、成双
排列。 • 特殊结构：幼龄菌可有荚膜及菌
毛。 • 染色：革兰阴性。 • 脓液中位于中性粒细胞内。 • 慢性淋病常位于细胞外。
淋病奈瑟菌
淋病奈瑟菌培养特征
• 最适 pH 7.4-7.6 。 • 最适温度 35-37℃。
排列。
▪ 特殊结构：无芽胞和荚膜，
少数菌株有稀疏鞭毛。
▪ 染色性：革兰阳性。
培养特性
兼性厌氧菌 最适生长温度 35℃ ，
大多数可在 10－45℃ 范围内生长。 营养要求不高。 血平板：灰白色圆形凸 起，多不溶血或有α 溶血菌落。 麦康凯 ：较小、稍干 燥、粉红色菌落 。
粪肠球菌
生化特征
1. 关于淋球菌不正确的说法是
A 人是唯一的自然宿主 B 有菌毛
C 抵抗力弱
D 碳水化合物中仅分解葡萄糖
E 镜检是确定诊断的依据
2．A群链球菌与其它链球菌的主要鉴别试验是
A CAMP试验
B 菊糖发酵试验
C Optochin敏感试验
D 杆菌肽敏感试验
E 新生霉素敏感试验
3．能产生自溶酶的细菌是
A 葡萄球菌和肺炎链球菌 B 肺炎链球菌
• 触酶、氧化酶均为阳性。 • DNA酶（+） • 硝酸盐还原试验（+）。 • 水解三丁酸甘油酯。 • 不分解任何糖类和氨基酸蛋白质
类物质。
卡他莫拉菌DNA酶（+）
相关种属间的区别
奈瑟菌属和卡他莫拉菌及相关菌属的鉴别
细菌
细菌形态 氧化酶 触酶 葡萄糖
奈瑟菌属
双球菌/球杆 +
流行性脑脊髓膜炎的病因治疗与预防
流行性脑脊髓膜炎的病因治疗与预防流行性脑脊髓膜炎（epidemiccerebrospinalmeningitis）流脑是由脑膜炎双球菌引起的化脓性脑膜炎。
致病菌通过鼻咽侵入血液循环，形成败血症，最终局限于脑膜和脊髓膜，形成化脓性脑脊髓膜病变。
主要临床表现为发热、头痛、呕吐、皮肤瘀伤、颈部强直等脑膜刺激。
脑脊液呈化脓性变化。
1.脑膜炎球菌属于奈瑟氏菌，是革兰阴性球菌，呈卵圆形，常成对排列。
这种细菌只存在于人体内，可以从带菌者的鼻咽、患者的血液、脑脊液和皮肤瘀伤中检测出来。
脑脊液中的细菌在中性粒细胞中很常见，只有少数在细胞外。
普通培养基不易生长，在含有血液、血清、渗出物和卵黄液的培养基中生长良好，一般为5%～10%二氧化碳生长得更好。
这种细菌对寒冷、干燥和消毒剂非常敏感。
它很容易在体外死亡，细菌可以形成自己的溶解酶，所以它必须在收集标本后立即接种疫苗。
2、病原菌从鼻咽侵入人体。
如果人体免疫力强，可以迅速杀灭病原菌或成为带菌状态；如果体内缺乏特异性杀菌抗体或细菌毒性强，细菌可以从鼻咽粘膜进入血液，发展为败血症，进而累及脑脊髓膜，形成化脓性脑脊髓脑炎。
3.败血症期间，细菌经常侵入皮肤血管内壁，引起栓塞、坏死、出血和细胞浸润，导致瘀斑或瘀斑。
由于血栓形成、血小板减少或内毒素作用，内脏出血程度不同。
4.暴发性败血症是一种特殊类型，过去被称为华-佛氏综合征曾被认为是由双侧肾上腺皮质出血和坏死引起的急性肾上腺皮质衰竭。
已证明肾上腺皮质功能大多未衰竭，在发病机制中不起主要作用，脑膜炎球菌脂多糖内毒素可引起微循环障碍和内毒素性休克，进而导致播散性血管凝血（DIC）它的主要病理基础。
5.暴发性脑膜脑炎的发生和发展也与内毒素有关。
Ⅲ免疫球蛋白、补体和脑膜炎球菌抗原沉积也可能在发病机制中发挥一定作用，如免疫球蛋白、补体和脑膜炎球菌抗原沉积。
脑膜炎球菌主要引起隐性感染。
据统计，60%—70%.无症状带菌者约300%深呼吸感染和出血型%典型流脑病人的潜伏期为1-10天，一般为2-3天。
微生物学检验奈瑟菌属卡他布兰汉菌属
培养检查
增菌培养：血液、脑脊液接种增菌液，5 ％CO2培养。 分离培养：将增菌培养物转种巧克力色 平板，置5％CO2环境，35℃培养18～24 小时 可疑菌落：观察菌落特征，取可疑菌落 涂片染色镜检，作盐水自凝试验，盐水 中无自凝。
鉴定试验
形态染色：革兰阴性、肾形、成双排列 氧化酶（+） 触酶（+） 糖代谢试验：发酵葡萄糖、麦芽糖 生长特性试验：生长温度、营养需求 血清学鉴定与分群：可与相应诊断血清 发生凝集
肠道杆菌
是一大群生物学性状相近的革兰 阴性杆菌。
与医学关系密切的肠道杆菌
正常菌群
埃希菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 枸橼酸菌属
致病菌
致病性大肠埃希菌 志贺菌属 沙门菌属 耶尔森菌属
肠道杆菌共同特性
形态染色：均为革兰阴性杆菌，无芽孢， 有菌毛，多数有鞭毛，少数有荚膜 培养特性：需氧、兼性厌氧；营养要求 不高；光滑型菌落； 生化反应： ☆氧化酶－；触酶＋；硝酸盐还原试验＋ 发酵葡萄糖 ☆非致病菌多数分解乳糖，致病菌多数不 分解乳糖
快速鉴定试验
荧光抗体法 荧光素-流脑抗体 +待检物－－荧光
（直接法）
流脑抗体 +待检物 +羊抗兔荧光抗体－－荧光
（间接法）
间接血凝试验 流脑多糖抗原致敏红细胞 +待检血清 反向血凝试验 流脑抗体致敏红细胞 +标本中可溶性流脑抗原
鉴定依据
形态染色：革兰阴性球菌成双排列 菌落典型：光滑型，易乳化，盐水中无 自凝 生化反应： 氧化酶＋、触酶发酵葡萄糖、麦芽糖 生长条件：普通培养基不生长、 血清学：与相应分群血清凝集
生化反应
氧化酶试验阳性 分解葡萄糖、麦芽糖、不分解蔗糖
脑膜炎奈瑟菌诊断标准
脑膜炎奈瑟菌诊断标准
脑膜炎奈瑟菌诊断标准如下：
1、血液检查：由于脑膜炎奈瑟菌可引起脑膜炎，脑膜炎会改变血液中的白细胞、血小板和凝血活动指标。
2、尿检：如果尿中存在可疑的细菌阳性，可能提示患者某种病毒或细菌感染，包括橡桃枝状杆菌。
3、颅脑CT扫描：颅脑CT扫描可以检测出脑膜炎奈瑟菌感染的体征，主要表现为脑室增宽、脑血管扩张、脑室内有炎性改变的小块体。
4、脑脊液检查：脑脊液检查可以检测脑脊液中的孢子和细菌，以确定脑膜炎奈瑟菌的存在。
5、颅脑MR：MR可以更准确的检测出脑膜炎奈瑟菌的感染情况，MR影像也可以比CT扫描更准确地捕捉脑内的改变，如软脑膜、静脉网和血管扩张。
微生物检验实验室奈瑟菌属标准操作规程
微生物检验实验室奈瑟菌属标准操作规程1. 概述奈瑟菌属是一群触酶、氧化酶试验均阳性的革兰阴性球菌，包括脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、解乳糖奈瑟菌、灰色奈瑟菌、粘液奈瑟菌等11个种，临床上以脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌最为重要。
2.标本类型血液、脑脊液、分泌物、痰、穿刺液、脓液标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阴性双球菌，肾形或咖啡豆状，，常成双排列，凹面相对。
色的似露滴状菌落。
3.3生化反应：氧化酶、触酶试验阳性；分解葡萄糖和麦芽糖，不分解蔗糖、甘露醇及乳糖；尿素酶、吲哚及硝酸盐还原试验均为阴性。
3.4鉴别要点：3.4.1本菌特征：革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶试验阳性，分解葡萄糖、硝酸盐还原试验阴性。
3.4.2奈瑟菌与相似菌的鉴别；见表5-37。
表5-37 奈瑟菌与相似菌鉴别的关键性试验注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%~89%菌株阳性。
3.4..3 淋病奈瑟菌和卡他莫拉菌的鉴别淋病奈瑟菌分解葡萄糖，硝酸盐还原试验阴性，而卡他莫拉菌则相反。
两者虽可根据标本来源加以区分，但并非绝对，因为通过性行为，卡他莫拉菌也可引起尿道炎，而淋病奈瑟菌也能引起咽炎，应引起注意。
涂片不典型，作淋病奈瑟菌培养，同时作普通培养，有细菌生长可排除淋病奈瑟菌。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。
3.5.2氧化酶试验参见《触酶试验标准操作规程》3.5.3鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析脑膜炎奈瑟菌对青霉素、磺胺类、链霉素和金霉素敏感。
产酶株引起感染应考虑用头孢曲松或头孢噻肟替代。
检出B-内酰胺类酶阳性的淋病奈瑟菌则提示青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药。
7.临床意义脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部，通过飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。
15-16421 脑膜炎奈瑟菌A群探针法qPCR(不含内参)
得 1E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分
震荡 1 分钟，得 1E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分
一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为 PC。
另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容，
也可以选购 tjs.bio 的免提取核酸释放剂。
三、Probe qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上
的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳
性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 6 号管中加入 5 μL 1E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，
震荡 1 分钟，得 1E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10 μL 上步所得第 4 号稀释液再加上
鉴别试验(ELISA法)SOP
鉴别试验（ELISA法）SOP1.目的1.1采用ELISA法鉴别A、C群脑膜炎球菌结合疫苗。
证明含有A群脑膜炎球菌多糖、C 群脑膜炎球菌多糖及B群脑膜炎球菌外膜蛋白。
1.2A、C群脑膜炎球菌结合疫苗中含有A群脑膜炎球菌多糖、C群脑膜炎球菌多糖及B 群脑膜炎球菌外膜蛋白。
1.3用A、C群脑膜炎球菌结合疫苗预包酶标板，加入适当浓度的A群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清、C群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清和B群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清后进行抗原抗体反应，A群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清、C群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清和B群脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清分别与包被在酶标板上的A群脑膜炎球菌多糖、C群脑膜炎球菌多糖及B群脑膜炎球菌外膜蛋白抗原结合，充分洗涤后，加入羊抗兔HRP结合物。
1.4同时设阴性对照（鉴别A多糖时用C偶联原液做阴性对照、鉴别C多糖时用A偶联原液做阴性对照，鉴别B蛋白时用A、C多糖做阴性对照）及空白对照，以阴性对照平均吸光度值+3SD为cutoff值，检测结果为阳性可判定A、C群脑膜炎球菌结合疫苗中含有A群脑膜炎球菌多糖、C群脑膜炎球菌多糖及B群脑膜炎球菌外膜蛋白。
2.范围本标准适用于A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的鉴别试验。
3.定义无4.职责4.1QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3质量总监负责批准本规程。
4.4QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程》6.材料6.1仪器及设备：MK3酶标仪；移液器，规格20-200µl、100-1000µl，20-300µl八通道移液器；37℃培养箱（房）、医用纱布、卫生纸；中试管、量筒、烧杯、三角瓶、试剂瓶、容量瓶、吸管、离心管；酶标板，96孔；电子天平。
6.2试剂及配制（见《免疫原性试验SOP》）包被液： 0.05mol/L CB溶液，pH9.6A、C群脑膜炎球菌结合疫苗（稀释浓度：分别含A、C多糖各5µg/ml，即4倍稀释）。
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围脑脊液培养。
3.标本3.1标本类型脑脊液。
3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。
脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。
因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本未用无菌试管留取。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。
根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。
必要时可作生化反应进一步鉴定。
6.2分离培养6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。
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脑膜炎奈瑟氏菌及其检测方法
一、脑膜炎奈瑟氏菌
脑膜炎奈瑟氏菌（学名Neisseria meningitidis），又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌，是一种革兰氏阴性菌，主要寄居在人体鼻咽部，可通过飞沫传播。
人感染脑膜炎奈瑟氏菌将引起败血症或流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）。
（1）败血症：该菌自鼻咽部侵入，进入血循环致人体发病。
其释放内毒素引起皮肤瘀点、瘀斑为局部施瓦茨曼反应，激活补体，血清炎症介质明显增加，较其他革兰阴性菌强5-10倍，也较其他内毒素更易激活凝血系统，因此在休克早期便出现弥散性血管内凝血，及继发性纤溶亢进，进一步加重微循环障碍、出血和休克，最终造成多器官功能衰竭。
（2）行性脑脊髓膜炎：该细菌侵犯脑膜，进入脑脊液，释放内毒素等引起脑膜和脊髓膜化脓性炎症及颅内压升高，出现惊厥、昏迷等症状。
严重脑水肿时形成脑疝，可迅速致死。
二、脑膜炎奈瑟氏菌检测方法
1.直接涂片检查
（1）瘀血斑：刺破瘀斑血印片，或血膜片，干燥固定后革兰染色阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初诊。
（2）脑脊液：取脑脊液离心后沉淀物涂片，干燥固定后革兰染色，若发现中性粒细胞内或胞外革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，结合临床可确诊。
2.细菌培养法
将标本葡萄糖肉汤增菌培养液，直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板，置于5%-10%CO2环境中，35℃培养18-24小时后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1-2mm的小菌落，经涂片证实为革兰阴性双球菌，并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。
3.生化鉴定
主要通过氧化酶、糖类发酵以及培养生长特点进行。
①细菌形态呈肾形；
②氧化酶试验阳性；
③触酶试验阳性；
④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；
⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。
4.血清凝集法
根据荚膜多糖可将脑膜炎奈瑟氏菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群，其中A、B、C群最为多见，约占90%。
关于血清凝集法用的诊断血清方面，推荐天津生物芯片公司生产的脑膜炎奈瑟氏菌全套诊断血清产品。
这套产品除了包含脑膜炎奈瑟氏菌菌10个常见血清群的诊断血清。
详情如下：
5.核酸扩增法
核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放
大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。
【相关试剂推荐】。