4-洁净区微生物监测与控制方案

采样时为滤膜特性, 培养时滤膜融化到培养基 中消失

材质：水溶性凝胶 截留率 :
原理： 深层过滤
细菌：99.9995% for Bacillus subtilis 病毒：99.94% for T3 coli phages
A/B 级 浮游菌采样 – 凝胶膜过滤法
优势 使用凝胶膜可以有效保护微生 物 “绝对”截留 不论微生物数量多或少，均可 达到很好的捕获效果 可连续采样，持续动态监测 非常适合在A\B级洁净区、隔 离器中使用，降低假阴性风险 可配合使用各种不同的培养 基 “一天一片”
影响培养基的因素1：

the performance of media prepared in a laboratory or by a manufacturer is highly dependent on preparation and storage conditions. 实验室制备的或者生产商制备的培养基的性能很 大程度度上取决于培养条件和存贮条件。
每种用于环境监测的培养基，包括用于回收特 定类型微生物的培养基必须进行促生长能力的 评价（无菌检查<71>）
培养基质量控制3：
Of particular concern is the use of aseptically prepared sampling media. .
特别关注的是使用无菌制备的培养基。
培养条件的选择3：

Longer incubation may recover known contaminants growing slow. 较长的培养时间可能检出生长缓慢的污染微生物。
培养基质量控制1：

Because different media types may have different preparation requirements (e.g., heating, additives, and pH adjustment), it is important to follow these instructions to ensure preparation of acceptable media quality. 由于不同的培养基类型可能有不同的配制要求（例如，加 热、添加剂，和pH值调节），重要的一点是需要遵守其提 供的配制指示以保证配制出的培养基质量。
洁净区微生物监测与控制方案
Microbial Monitoring and Control Solution in Clean Rooms
柴海毅 chi8266@163.com
Topic 主题：
1. Microbial Monitoring Solution 环境监测解决方案 2. Selection and Quality control of the medium 培养基的选择及质量控制
通常，不需要监测专性厌氧菌，因为其在环境 空气中不可能存活。
培养条件的选择1：

Typically, incubation temperatures in the ranges of approximately 20°–35° have been used with an incubation time of not less than 72 hours. for general growth media such as SCDM.But by means absolute. 对通用培养基，如SCDM，通常的培养温度在20-35℃之 间，时间不少于72小时。但并不绝对。
只要有可能，应通过湿热，辐射或其他合适的 方法对培养基及其包装材料进行最终灭菌。如 果必须使用制备的培养基，分析员必须在带入 洁净室之前对所有采样培养基进行预培养和目 检。
《中国药典》2015年版 四部
附录: 9203 “药品微生物实验室质量管理指导原则”
……
用于环境监测的培养基须特别防护，最好要 双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的 培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防 止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的 结果。
如果要延长存贮时间，培养基碟应放在密封的包 装或容器中以减少水分损失。
“中国药典” 2015年版四部 9203 微生物实验室质量管理指导原则

……如置冰箱保存，一般不超过1周，且应密闭包 装，若延长保存期限，保存期需经验证确定。
培养基的质量控制3：pH值

The pH of each batch of medium should be confirmed after it has cooled to room temperature (20 –25 ) by aseptically withdrawing a sample for testing. Refrigerated purchased media should be allowed to warm up to ambient room temperature if it is to be checked for pH confirmation. A flat pH probe is recommended for agar surfaces, 每个批次培养基在冷却到室温后（20-25℃），应采用无菌 方式取样检测pH值；冷冻的采购来的培养基应在升温至室 温后检测pH值。建议对培养基平面采用扁平的pH探头，
培养基质量控制4：
Wherever possible, sampling media and their wrappings should be terminally sterilized by moist heat, radiation, or other suitable means. If aseptically prepared media must be used, analysts must carry out pre-incubation and visual inspection of all sampling media before introduction into the clean room.
可以在这些培养基中加入添加剂使之克服或减 少消毒剂或抗生素的影响。
培养基3：
Manufacturers should consider the specific detection of yeasts and molds. If necessary, general mycological medຫໍສະໝຸດ Baidua such as Sabouraud’s, modified Sabouraud’s, or inhibitory mold agar can be used.
环境微生物监测法规标准
Recommended limits for microbial contamination 建议的微生物污染限度 Class 级别
Airmonitoring 空气取样 CFU/m3
Settle Plates (ø 90 mm) 90mm沉降皿 CFU/4h
Contact Plates (ø 55 mm) 55mm接触皿 CFU/Plates
培养基质量控制2：
The ability of any media used in environmental monitoring, including those selected to recover specific types of organisms, must be evaluated for their ability to support growth, as indicated in <71>..
C/D 级环境监测应用案例 ：
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3
Just connect the BACTairTM culture media plate to the AirPort sampler
Start sampling
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6
A/B 级环境监测应用案例 ：
Topic 主题：
1. Microbial Monitoring Solution 环境监测解决方案 2. Selection and Quality control of the medium 培养基的选择及质量控制
USP 1117

[NOTE—Failed growth-promotion test results may not be used to negate positive test results. ] 注：促生长试验失败可能会导致阳性检测为阴性。
USP36 1117

Before prolonged storage, agar plates should be placed into a sealed package or container to retard moisture loss.
培养条件的选择2：

In the absence of confirmatory evidence, microbiologists may incubate a single plate at both a low and a higher temperature. Incubating at the lower temperature first may compromise the recovery of Gram-positive cocci that are important because they are often associated with humans. 如果没有足够的保证，一个培养皿可以在较低或较高的温 度下都进行培养。首先在低温下进行培养，确保比较重要 的与人类密切相关的革兰氏阳性球菌的生长。
培养基1：
A general microbiological growth medium such as soybean–casein digest medium (SCDM) is suitable for environmental monitoring in most cases because it supports the growth of a wide range of bacteria, yeast, and molds.
生产者应该关注霉菌和酵母菌的检测，如有必 要，可以使用沙氏、改良沙氏或含抑制性的霉 菌琼脂等普通的真菌培养基。
2015年版《中国药典》9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则 ……当监测结果有疑似真菌或考虑到 季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖 琼脂培养基（SDA）。

培养基4：
In general, monitoring for strict anaerobes is not performed, because these organisms are unlikely to survive in ambient air.
监测方法怎样选择？
C/D 级浮游菌采样 -撞击法
优势 使用简单 使用方便: 采样时微生物 撞击到培养基上，采样后 可直接培养 劣势 培养皿可能会失水 无法100%截留,假阴性风 险 影响层流环境 采样头消毒风险 最终数据需要校正
采样头开多少个孔才能100%截留？
一次性采样头？
A/B 级 浮游菌采样 – 凝胶膜过滤法
一般的微生物培养基如胰酪大豆胨琼脂培养基 （ SCDM ）因为能使细菌、酵母菌和霉菌生长， 适合大多数条件下的环境监测。
培养基2：
This medium can be supplemented with additives to overcome or to minimize the effects of sanitizing agents or of antibiotics.
Glove Print 5 fingers 手套（5个手指） CFU/glove
A B C D
<1 10 100 200
<1 5 50 100
<1 5 25 50
<1 5 -
监测过程中的风险与控制：

针对不同洁净区选择合适的测试方法，避免假阴性。 如果设备采样头需要消毒，应避免假阳、阴性风险。 提供足够的空气交换，减少或消除人员干预。 培养基选择及质量控制（TSA、SDA）。 按SOP定期进行环境监测。