含磷量测定方法
总磷测定标准方法
总磷测定标准方法
总磷是水样经消解后将各种形态的磷转变成正磷酸盐后测定的结果，以每升水样含磷毫克数计量。
其测定标准方法可以参考《水质总磷的测定钼酸铵分光光度法》（GB 11893-89）。
该方法的原理是在中性条件下用过硫酸钾使试样消解，将所含磷全部氧化为正磷酸盐。
在酸性介质中，正磷酸盐与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色的络合物。
具体操作步骤如下：
1. 取适量水样于消解瓶中，加入5.00 mL 过硫酸钾溶液，消解至溶液透明。
2. 将消解后的水样冷却至室温，加入1.00 mL 抗坏血酸溶液，
3.00 mL 钼酸铵溶液，摇匀，静置15 min。
3. 使用分光光度计，在700 nm 波长处，以水作参比，测定吸光度。
4. 根据标准曲线计算水样中总磷的浓度。
该方法适用于地表水、污水和工业废水的总磷测定，检出限为0.01 mg/L。
在实际操作中，应注意试剂的纯度和保存条件，以及消解和测定的操作细节，以确保结果的准确性。
钼锑抗法测定磷含量
钼锑抗法测定磷含量实验原理用钼锑抗分光光度法测定磷。
在一定酸度和锑离子存在的情况下，磷酸根与钼酸铵形成锑磷钼混合杂多酸，它在常温下可迅速被抗坏血酸还原为钼蓝，在 650nm 波长下测定。
实验的适宜酸度为 0.28 ～0.38mol ?L-1 H2 SO4，适宜温度为 20～ 60℃，显色时间为30～ 60min，可稳定 24h，含磷 5× 10-6～ 2× 10-4 %范围内符合线性关系。
仪器和用具10 支 25mL比色管； 0.5mL、1mL、 5mL、 10mL吸量管；分光光度计；移液管、容量瓶等；材料和试剂过硫酸钾1+1 硫酸：浓硫酸与蒸馏水的体积比为1:1 混匀抗坏血酸溶液：100g/L（10%）钼酸盐溶液 :13g 钼酸铵 ( (NH 4) 6Mo 7O24·4H2O) 溶于 100ml 蒸馏水， 0.35g 酒石酸锑钾1（KSbC 4 H4O7· H2 O）溶于 100ml 蒸馏水。
在不断搅拌的情况下把钼酸铵徐徐加到300ml 1+12硫酸中，加酒石酸锑钾溶液混匀。
磷酸盐储备溶液： 110℃干燥2h 的磷酸二氢钾0.2197g 溶于水，移入 1000ml 容量瓶中，加5mL 1+1 硫酸定容至 1000mL。
此时浓度为 50μ g/mL磷酸盐标准溶液：吸取 10mL磷酸盐储备液至250mL容量瓶中，定容至250mL。
此时浓度为 2μ g/mL实验步骤1、标准曲线的绘制：0ml 、0.5mL、1.0mL、3.0mL、5.0mL、取 7 支25mL比色管，分别加入磷酸盐标准溶液10.0mL 、15.0mL，加水定容至刻度。
此时系列标准液浓度为：0、 0.04 、 0.08 、0.24 、0.4 、 0.8 、 1.2 μ g/mL。
2、消解（将磷转变为正磷酸盐）在上述比色管中加入0.04g 过硫酸钾，旋紧盖子，置于消解器内120℃消解 30min，取出冷却。
磷测定原理
磷测定原理
磷测定原理是通过测定样品中磷元素的含量来确定磷的数量。
常用的方法有分光光度法、原子荧光光谱法、火焰光度法等。
其中，分光光度法是在特定的波长下，用分光光度计测量样品溶液的吸光度，并通过比色计算出磷的含量。
原子荧光光谱法则是将样品溶液转化为气态，在高能激发下，磷原子产生的荧光强度与其浓度成正比，从而确定磷的含量。
火焰光度法是将样品溶液喷入高温火焰中，燃烧后形成高温火焰，促使磷原子激发发射特征光谱，通过光度计测量其发射光谱强度，进而计算出磷的含量。
这些方法都需要严格控制样品的前处理过程，以确保准确测定磷的含量。
同时，由于磷元素在样品中的含量常常较低，因此还需要使用标准曲线等校正方法来提高测量准确度。
总的来说，磷测定原理是通过不同的测定方法对样品中磷元素进行测量，以确定磷的含量。
这些方法在实际应用中具有一定的选择性和敏感性，能够满足不同领域对磷测定的需求。
土壤中磷的测定(全磷、速效磷)
、HCO-
3、CO2-
3等阴离子有利于吸附态磷的交换，因此，碳酸氢钠不仅适用于石灰性土壤，也适用于中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待测液用钼锑抗混合显色剂在常温下进行还原，使黄色的锑磷钼杂多酸还原成为磷钼蓝进行比色。
操作步骤：
1.称取通过18号筛(孔径为1mm)的风干土样5g(精确到0.01g)于200ml三角瓶中，准确加入0.5mol/L碳酸氢钠溶液100ml,再加一小角勺无磷活性碳，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30分钟(振荡机速率为每分钟150—180次)，立即用无磷滤纸干过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。最初7～8ml滤液弃去。
0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。
在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。
结果计算
全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106
)×100
式中：
显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；
2SO
4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。
5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。
6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。
2016-2017年含磷量测定（总结）
含磷量测定油剂中常含有磷酸酯盐，通过磷的元素定量分析可间接推算磷酸盐含量。
1、容量法（1）原理含磷有机化合物用湿法氧化生成磷酸根，加钼酸铵试剂生成磷钼酸铵沉淀。
沉淀用标准碱溶液溶解，过量的碱用标准酸回滴，根据消耗的碱量可计算样品中磷的百分含量。
(NH4)3PO4·12MoO3·2HNO3+28NaOH→Na2HPO4+2NaNO3+12Na2MoO4+3NH3+16H2O（2）试剂：硝酸—硫酸混合液[取50mL浓硫酸，慢慢地加入50mL浓硝酸（比重1.42）中]、50%硝酸铵溶液、0.2mol/L硝酸标准溶液、0.2mol/L氢氧化钠标准溶液、钼酸铵试剂、酚酞指示剂。
钼酸铵试剂配制方法如下：分别配制两种溶液：a. 取100g钼酸铵，溶于500mL3mol/L氨水中；b. 取400mL浓硝酸，用水稀释到1L。
使用时将1体积a与2体积b混合。
（30步骤：称取0.2~0.3g试样，，放在500mL梨形烧瓶中，小心加入10mL 硝酸—硫酸混合液，然后用小火加热，直到红棕色的二氧化氮气体停止放出为止。
然后用滴液漏斗一滴一滴地再加入10mL硝酸—硫酸混合液，继续加热，直到烧瓶里的液体变在无色或呈很淡的黄色为止。
放冷，小心地加入60mL 水，沸煮5~10分钟，将亚硝酰硫酸分解掉。
将全部液体转移到锥形瓶中，加入150mL水和100mL50%硝酸铵溶液，在水浴中加热到70~80℃，加入稍过量的钼酸铵试剂（每0.01g加入30mL钼酸铵试剂），振荡，放置10min。
用定量滤纸过滤，用冷水充分洗涤到无酸性。
将沉淀和滤纸一起转入锥形瓶中，用玻璃棒搅碎滤纸，加入过量0.2mol/L氢氧化钠标准溶液，根据样品中磷含量的多少，氢氧化钠标准溶液可加入30~40mL。
振荡使沉淀溶解，沸煮15min，直到蒸汽不能使红色石蕊试纸变蓝为止。
放冷，用水稀释到150mL，加6~8滴酚酞指示剂，用0.2mol/L硝酸标准溶液滴定到终点。
肥料中的磷〔总量〕化学分析方法
肥料中的磷〔总量〕化学分析方法
1.固体样品的浸提法：
（1）样品的准备：将肥料样品研磨至粉末状，并过筛得到均匀颗粒
大小的样品。
（2）浸提液的准备：根据不同的测定方法，可以选择不同的浸提液。
常用的浸提液有氢氧化钠溶液、盐酸和硝酸混合液等。
（3）浸提操作：将已经准备好的样品与浸提液按一定的比例加入浸
提瓶中，使用回流加热或振荡浸提器进行浸提操作。
浸提温度和时间的设
定需根据具体的方法而定。
（4）过滤和淘洗：将浸提液通过滤纸过滤，收集滤液。
滤液中的固
体残渣需要用适量的浸提液进行淘洗，以确保完全提取。
（5）浸提液的稀释：将滤液稀释至适宜的浓度，以便后续的化学分析。
2.液体样品的直接测定法：
（1）样品的准备：将液体肥料样品进行适当的搅拌和混合，以获得
均匀的样品。
（2）测定液的准备：根据不同的化学分析方法，可以选择不同的测
定液。
常用的测定液有显色试剂（比如黄色酸性含磷试剂）等。
（3）测定操作：将准备好的样品与测定液按一定的比例混合，在一
定的条件下反应一段时间，使得磷和测定液发生显色反应。
（4）测定结果的读取：将测定后的溶液与标准溶液进行比色，使用分光光度计或比色计测定样品的吸光度或颜色强度。
无论是固体样品的浸提法还是液体样品的直接测定法，在进行磷（总量）的化学分析时，应注意以下几点：
-样品的制备要均匀，以确保取得准确的测定结果。
-每个测定步骤都要严格控制条件，如浸提温度、浸提时间、测定液的浓度等，以确保分析结果的准确性和可重复性。
-选择适当的标准溶液进行比色或测量吸光度，以获得准确的浓度测定结果。
总磷量的测定-分光光度法
总磷量的测定分光光度法1.原理将试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色［(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3］络合物，在波长420nm下进行比色测定。
2.试剂2.1盐酸：1+1 水溶液2.2硝酸2.3高氯酸2.4钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加水200mL加热溶解，冷却后再加入250mL硝酸，另称取钼酸铵25g，加水400mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容1000mL。
避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。
2.5磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为的磷标准液。
3.仪器和设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2分样筛：孔径0.42mm(40目)。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4分光光度计：可在420nm下测定吸光度。
3.5比色皿：1.0cm。
3.6高温炉：可控温度在（550±20）℃。
3.7瓷坩埚：50mL。
3.8容量瓶：50、100、1000mL。
3.9移液管：1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml。
3.10三角瓶：250mL。
3.11凯氏烧瓶：125、250mL。
3.12可调温电炉：1000W。
4.试样制备4.1取有代表性试样2kg，用四分法将试样缩分至200g，粉碎过0.42mm孔筛，装入样品瓶中，密封保存备用。
5.测定步骤5.1试样的分解5.1.1干法（不适用于含磷酸氢钙［Ca（H2PO4）2］的饲料）称取试样2g（精确至0.0001g）于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入高温炉，在550℃灼烧3h（或测粗灰分后继续进行），取出冷却，加入10mL盐酸溶液和硝酸数滴，小心煮沸约10min，冷却后转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
5.1.2湿法称取试样2g（精确至0.0001g）于凯氏烧瓶中，加入硝酸30mL，小心加热煮沸至黄烟逸尽，稍冷，加入高氯酸10mL，继续加热至高氯酸冒白烟（不得蒸干），溶液基本无色，冷却，加水30mL，加热煮沸，冷却后，用水转移至100mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
食品中总磷的测定
食品中总磷的测定《GB/T5009.87-2003食品中磷的测定》中规定了测定各类食品中总磷的办法有分光光度法和原子汲取光谱法。
以下介绍分光光度法测定食品中的总磷(依据GB/T5009.87-2003第一法)。
1.原理食物中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与结合形成。
此化合物被、还原成蓝色化合物——钼蓝。
用分光光度计在波长660mm处测定钮蓝的吸光值，以定量分析磷含量。
2.试剂 (1)：相对密度1.84。
(2)高氯酸-硝酸消化液：1+4混合液。
(3)15%硫酸溶液：取15ml硫酸缓缓加入到80mL水中混匀，冷却后用水稀释至100mL。
(4)溶液：称取0.5g铝酸铵[(NH3)6Mo7O2·4H2O]，用15%硫酸稀释至100mL。
(5)对苯二酚溶液：称取0.5g对苯二酚于100mL水中，使其溶解，并加入一滴浓硫酸(减缓氧化作用)。
(6)溶液：称取20g于100mL水中，使其溶解。
此溶液需于试验前暂时配制，否则可使钼兰溶液变浑浊。
(7)100ug/mL磷标准储备液：精确称取在105℃下干燥的(优级纯)0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
此溶液每1mL含100ug 磷。
(8)10ug/mL磷标准用法液：精确吸取10mL磷标准储备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
此溶液每1mL 含10ug磷。
3.仪器 (1)试验室常用设备。
(2)分光光度计。
4.操作步骤 (1)试样处理称取各类食物的匀称干试样0.1～0.5g，或湿试样2～5g于100mL凯氏烧瓶中，加入3mL硫酸、3mL高氯酸-硝酸消化液，置于消化炉上。
瓶中液体初为棕红色，待液体变为无色或微带黄色清澈液体时，即消化彻低。
将溶液放冷，加20mL水，赶酸。
冷却，转移至l00mL容量瓶中，用水多次洗涤凯氏烧瓶，洗涤液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。
此溶液为试样测定液。
取与消化试样同量的硫酸、高氯酸-硝酸消化液，按同一办法做空白溶液。
土壤中磷含量的测定
土壤中磷含量的测定（比色法）一、现阶段测定土壤中磷含量主要方法有如下几种：（一）中性和石灰性土壤速效磷的测定 (0.5mol/L NaHCO3法)石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。
一般用碳酸盐的碱溶液。
由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。
同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、 CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。
（二）酸性土壤速效磷的测定方法A(0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl法)NH4F--HCI法主要提取酸溶性磷和吸附磷，包括大部分磷酸钙和一部分磷酸铝和磷酸铁。
因为在酸性溶液中氟离子能与三价铝离子和铁离子形成络合物，促使磷酸铝和磷酸铁的溶解：3NH4F+3HF+AlPO4一H3PO4+(NH4)3AlF63NH4F+3HF+FePO4一H3PO4+(NH4)3FeF6溶液中磷与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，在一定酸度下被SnCl2还原成磷钼蓝，蓝色深浅与磷的浓度成正比。
（三）酸性土壤速效磷的测定方法B0.05mol/L HCl-0.025mol/L ( 1/2H2SO4 )法本法特别适用于固定磷较强的酸性土壤。
如土壤有机质含量较低，pH小于6.5，阳离子交换量小于100 cmol/kg的土壤。
本法不仅适用于酸性土壤速效磷的测定，也能用以测定其酸性土壤速效磷的测定方法B 0.05mol/L HCl-0.025mol/L ( 1/2H2SO4 )法他有效养分。
（四）土壤有机磷的分离测定方法原理：土壤经550℃灼烧，使有机磷化合物转化为无机态磷，然后与未经灼烧的同一土样，分别用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液浸提后测定磷量，所得结果的差值即为有机磷。
含磷量测定方法
2.4 实验方法2.4.1 超声波工艺的研究称取菜籽油25g于150mL的三角瓶中，在超声频率为40KHz的频率下，一定的超声时间、超声功率、超声温度及加水量进行超声波水化脱胶，结束后静置0.5h，然后在2000r/min下离心20min，得到水化脱胶油。
2.4.2 含磷量的测定油脂样品与金属氧化物氧化时，试样中的磷成为磷酸盐，加酸溶解而得磷酸根，在加入钼酸盐后生成磷钼酸盐，磷钼酸盐被还原而产生钼蓝，其颜色深浅与油脂中磷脂含量成正相关，由此可进行比色定量。
该法具有简便、准确、灵敏度高的特点。
在已离心好的油脂中，取上层油脂于小烧杯中，用电子天平称取5g油于30mL 的坩埚中，每个称取三个平行，各加入0.25g氧化锌。
炭化：用电炉进行脱胶油灰化的过程中，有几点要注意：（1）先小火炭化，控制电炉在400W—500W之间，如果火候过大，油与氧化锌会剧烈反应，油往外溅出，即炭化初期，控制好火候是非常关键的一步。
（2）待脱胶油的颜色变成黑色时，小心加大火候，到达一定温度时会燃烧，燃烧结束后，油开始慢慢的起泡，起泡时控制好火候很关键，尽量不让泡沫溢出，如有气泡溢出，则对实验的最终结果影响较大。
（3）待泡沫消去，加大火候，15min后把电炉开到最大，待坩埚中的物质变为灰白色时，炭化完成。
把炭化好的试样小心移入灰化炉中，在550～600℃的高温下灼烧至完全灰化，灼烧2.5h，取出冷却至室温，加入1：1盐酸5mL溶解灰分，并加热微沸5min，冷却，将溶解液过滤注入25mL容量瓶中，用热水（50℃-60℃）冲洗坩埚3-4次，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和滤液至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氢氧化钙沉淀全部溶解后，再加2滴，用水稀释至刻度，摇匀即可。
2.4.2.1 比色用移液管吸取被测液2mL注入25mL比色管中，加入钼酸铵溶液2mL、亚硫酸钠溶液1mL、对苯二酚溶液1mL，然后加水稀释至刻度，加塞、摇匀。
静置0.5h 后，去塞，用分光光度计在波长660nm下，用3cm比色皿，按测定标准液的方法测定其吸光值，记录数据[4]。
土壤中全磷测定
土壤中全磷测定土壤全磷分析土壤全磷测定要求把无机磷全部溶解，同时把有机磷氧化成无机磷，因此测定的第一步是样品分解，第二步是溶液中磷的测定。
一、HClO4–H2SO4消煮，钼蓝比色法1.方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的H2SO4和强氧化剂HClO4作用，分解成正磷酸盐而进入溶液。
在一定酸度下，正磷酸根与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，在还原剂的作用下形成“钼蓝”，使溶液呈蓝色。
蓝色深浅与磷的含量成正比，可用分光光光度法于700nm处测定。
2.仪器设备分光光度计消煮炉3.试剂（1）浓H2SO4；（2）70%～72%HClO4；（3）2,4-二硝基酚指示剂：0.2g 溶于100 mL水中；（4）4 mol?L-1氢氧化钠溶液；（5）钼锑储存溶液；a浓硫酸153 mL缓缓倒入400 mL水中，b10g 钼酸铵溶于60℃ 300 mL水中，a倒入b中，加入100 mL 5g·L-1的酒石酸锑钾溶液，用水定容摇匀，贮存于棕色试剂瓶中。
（6）钼锑抗显色剂：100 mL钼锑储存溶液中加1.5g抗坏血酸，现配现用。
（7）磷标准贮存溶液（ρ=100 mg·L-1)，0.4390g 磷酸二氢钾（105℃烘2h）溶于100 mL水中，加入5mL硫酸，定容至1L；（8）磷标准溶液（ρ=5.00mg·L-1)，磷标准贮存溶液准确稀释20倍。
4.操作步骤（1）样品消煮称取100目土样0.3～1 g于50 mL消化管中→ 加少量水润湿后加浓硫酸8mL，摇匀→ 加70～72%高氯酸10滴，摇匀，管口加一个小漏斗→ 加热消煮，至溶液开始转白后继续消煮20min→ 冷却后用水洗入100 mL容量瓶中→ 定容摇匀→ 静置过夜取上清液或用干燥的无磷滤纸过滤。
（同时做空白试验）（2）溶液中磷的比色测定移取澄清液或滤液2～10 mL于50ml容量瓶中→ 加水至约30 mL→ 加二硝基酚指示剂2滴→ 用4 mol?L-1 NaOH调节pH至溶液刚呈黄色→ 加钼锑抗显色剂5 mL→ 定容，摇匀→ 半小时后（高于15℃）于700nm处比色测定标准曲线分别移取5.00mg·L-1磷标准溶液0、1、2、3、4、5mL于50mL 容量瓶中，同上操作，以吸光度为纵坐标，磷浓度为横坐标绘制工作曲线。
实验六 磷脂中含磷量的测定
一、实验目的
• 掌握磷脂中磷含量测定的原理和方法。
二、实验原理
• 磷脂经提取消化后分解成无机磷酸盐，根 据无机磷酸盐与钼铵作用生成磷钼酸铵， 再经还原形成钼蓝，在700nm，用分光光度 法测定其含量。
三、仪器、试剂与药品
• 可见紫外分光光度计；无水磷酸二氢钠(基 准物)；消化剂（硫酸，高氯酸）；显中磷的含量。
四、实验操作
• 1、对照品溶液的制备：取以115℃干燥至 恒重的无水磷酸氢二钠对照品适量，精密 称取，加水溶解至定量稀释制成每1ml含 0.04 mg磷的溶液即得。
• 2、供试品的制备：取卵磷脂约0.03g，精密 称定，加25 ml氯仿-甲醇（5：1），萃取， 过滤。
• 3、磷标准曲线制备：准确吸取磷标准使用液0、0.1、0.15、 0.2、0.25、0.3mL，加水至0.3 ml，分别加消化剂0.4 ml ， 依次加入4ml显色剂摇匀，70度水浴10分钟后，在分光光 度计700nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度对磷含量 绘制标准曲线。 • 4、供试品测定：取两支试管，一只准确吸取供试品测定 液0.25 ml，另一只加同量的氯仿-甲醇溶液，分别加消化 剂0.4 ml ，电炉上消化至无色（约10－30 min，一定将完 全消化，否则测定出结果偏低)，冷却后，都加水0.3 ml ， 显色剂4 ml摇匀，70度水浴10 min，冷却后在分光光度计 700 nm波长处测定吸光度。以测出的吸光度在标准曲线上 查得未知液中的磷含量。
生物材料中总磷量测定——比色法
生物材料中总磷量测定——比色法一、目的应用比色法测定生物材料中的总磷量。
二、原理生物体中有许多含磷化合物，如核酸、磷脂、ATP等。
磷的测定方法很多，有重量法、比浊法、比色法等。
微量而准确的定磷方法常常是生物化学研究中必需的。
比色法具有准确、微量、快速的特点，被广泛应用于生物化学工作中。
磷测定的原理是：有机含磷物质与浓硫酸(同时加入少量硫酸铜-硫酸钾催化剂)共热，使变成无机磷酸，此过程称为消化。
在酸性条件下无机磷酸与钼酸根形成磷钼酸复离子，在还原剂作用下磷钼酸复离子被还原成深蓝色的钼蓝。
磷含量愈高，则形成的钼蓝物质亦多，蓝色就愈深。
应用分光光度计在660毫微米处可以测得此深蓝色溶液的光密度(OD)值，通过与已知浓度的标准磷溶液所测得的OD₆₆₆值相比较，就能得到所测样品中磷的含量。
核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)中都含磷酸。
根据分析，纯的核酸含磷量为9%。
如从核酸样品中测到总磷量，就可计算出样品中核酸的量。
例如某核酸样品测得磷为1毫克，那么此样品中就有11毫克核酸。
生物有机磷材料中有时含有无机磷杂质，要用定磷法来测定该有机磷物质的量时，必须分别测定该样品的总磷量(样品经消化后所测得的含磷量)以及样品中的无机磷含量(样品不经消化而直接测得的含磷量)。
将总磷量减去无机磷量即为该有机磷物质的含磷量。
本实验测定RNA制品中的含磷量，由于样品纯度较高，不必测定无机磷含量，仅测总磷量就可以。
三、实验材料，仪器和试剂1、实验材料RNA溶液：在分析天平上精确称取RNA，以0.1N氢氧化钠配成5毫克/毫升的溶液。
2、仪器移液管、容量瓶、试管、72型分光光度计、电热恒温水浴箱、温度计。
3、试剂磷酸盐标准溶液：准确称取预先在105₆下烘至恒重的磷酸二氢钾(KH₆PO₆,分析纯)0.4389克,以蒸馏水定容至100毫升即成含磷为1毫克/毫升的标准溶液。
使用时将该液再稀释100倍，此稀释液含磷量是10微克/毫升。
植物组织中无机磷含量的测定【范本模板】
目的意义磷参与植物体内多种代谢，促进碳水化合物的合成、转化和运输，施磷对提高作物产量和品质有明显的效果。
通过本实验掌握植物体内磷含量测定的方法及其原理. 一、实验原理测定磷含量的方法主要有磷钼蓝比色法(适宜含磷量较低)和钒钼黄比色法（适宜含磷量较高）等。
可直接用于植物组织可溶性磷的测定.如用于植物材料全磷含量测定，需将材料用浓H2SO4—H202消煮转化为可溶性磷。
1．磷钼蓝比色法在适宜的酸性条件下,磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸按，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在650 nm处有最大吸收蜂，其颜色深浅与含磷量成正比,可直接比色测定。
2．钒钼黄比色法待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，溶液黄色的深浅与磷酸含量成正比，生成物在440nm波长有吸收高峰.可用比色法定量磷。
此法的优点是黄色稳定，对显色条件要求不十分严格,操作简便,干扰物少，灵敏度较低,工作范围随选用的吸收波长而异.选用波长(nm）400nm 440nm 470nm 490nm测磷工作范围(mg/g) 0.75—5。
5 2。
0-15 4—7 7—20二、材料、设备及试剂1．材科玉米、接骨木、瓜类、葡萄等幼苗；各种植物的根、茎、叶、种子及全株过60—80目筛干粉.2．设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、小纸等.3．试剂（1)2.5%钼酸铵溶液称取（NH4）2M o O4鸣’25g用蒸馏水溶解并定容至1000ml.（2）10mg/L磷标准液精确称取烘至恒重的分析纯KH2PO40。
4398g加蒸馏水溶解定容至1000m1，摇匀；取此液10ml定容至100ml即为10mg/L磷标准液。
(3)10％抗坏血酸溶液（现用现配)。
‘（4）定磷试剂按下列顺序及比例将各试剂混合即成。
蒸馏水、6mol/L硫酸、2。
5％钼酸铵、10％抗坏血酸按2:1:1:1(体积比)混合，贮于棕色瓶内。
若变为棕黄色即不能使用。
实验五饲料中磷的测定(精) 文档预览
•八、注意事项
1. 波长420nm； 2. 比色皿要洗净、擦干； 3. 721的盖子要盖严。
九、测定记录
样品名称 或编号
饲料中磷含量测定记录表
W
a
V 1
V 2
P(%)
分析人：
年月日
•十、思考题
1.掌握实验的意义、原理和步骤。 2.了解常用饲料的含磷量。
2. 提取（溶解）：同钙的测定。
•六、操作过程
3. 样本磷的测 定 准确吸取待测液10mL于25ml比色管中， 加5mL显色剂，摇匀，缓慢加水定容至刻度， 盖塞、摇匀，静止10min 以上，以空白试 剂 液（蒸馏水加显色剂液）为参比，在420nm 波长下测样本的光密度（T），并由标准曲 线查出样本的含磷量。
+N4 H +N4 H
3
3NO
3
因样本中的含磷量与溶液的颜色呈正 相关，由此用比色法即可测出。
•四、仪器设备
721-型分光光度计； 容量瓶：250mL； 烧杯：250mL； 移液管：10mL、5mL； 具塞比色管：25mL。
•五、化学试剂
1.硝酸：化学纯。
2.钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵（分析纯）1.25g， 加硝酸250mL。另取钼酸铵（分析纯）25g，加蒸馏 水400mL使之溶解。在冷却条件下将后者倒入前者的 溶液，并加蒸馏水稀释至1000mL，摇匀备用。
实验五 饲料中磷的测定
•一、目的
掌握饲料中磷的测定方法。
•二、方法
分光光度法
采用钼黄法 另有钼蓝法
•三、原理
在酸性溶液中，样本中的磷与偏钒酸 铵和钼酸铵形成可溶性的磷—钒—钼酸铵 黄色复合物。其反应式：
HV(++N1O43 PH64OHN44)H23O++1P86O4H(2NNHH44
总磷测定方法
总磷在天然水和废水中，磷几乎都以各种磷酸盐的形式存在，它们分为正磷酸盐，缩合磷酸盐（焦磷酸盐、偏磷酸盐和多磷酸盐）和有机结合的磷酸盐，它们存在于溶液中，腐殖质粒子中或水生生物中。
天然水中磷酸盐含量较微。
化肥、冶炼、合成洗涤剂等行业的工业废水及生水污水中常含有较大量磷。
磷是生物生长的必需的元素之一。
但水体中磷含量过高（超过0.2mg/L）可造成藻类的过量繁殖，直至数量上达到有害的程度（称为富营养化），造成湖泊、河流透明度降低，水质变坏。
1．方法的选择水中磷的测定，通常按其存在的形式，而分别测定总磷、溶解性正磷酸盐和总溶解性磷，如下图所示消解2．样品的采集和保存总磷的测定，于水样采集后，加硫酸酸化至PH≤1保存。
溶解性正磷酸盐的测定，不加任何试剂。
于2—5℃冷处保存，在24h内进行分析。
水样的预处理采集的水样立即经0.45µm微孔滤膜过滤，其滤液可溶性正磷酸盐的测定。
滤液经下述强氧化剂的氧化分解，测得可溶性总磷。
取混合水样（包括悬浮物），也经下述强氧化剂分解，测得水中总磷含量。
（一）过硫酸钾消解法仪器（1）医用手提式高压蒸汽消毒器或一般民用压力锅（1—1.5kg/cm2）。
（2）电炉，2kw。
（3）调压器、2kvA（0—220v）（4）50ml（磨口）具塞刻度管。
试剂5%（m/V）过硫酸钾溶液：溶解5g过硫酸钾于水中，并稀释至100 ml。
步骤（1）吸取25.00 ml混匀水样（必要时，酌情少取水样，并加水至25 ml，使含磷量不超过30µg）于50 ml具塞刻度管中，加过硫酸钾溶液4 ml，加塞后管口包一小块纱布并用线扎紧，以免加热时玻璃塞冲出。
将具塞刻度管放在大烧杯中，置于高压蒸汽消毒器或民用压力锅中加热，待锅内压力达1.0kg/cm2 （相应温度为120℃）时，调节电炉温度使保持此压力30min后，停止加热，待压力表指针将至零后，取出放冷。
（2）试剂空白和标准溶液系列也经同样的消解操作。
有效磷的测定方法
有效磷的测定方法方法1、钼锑抗比色法解磷菌发酵菌液（用什么培养基？？）经离心处理后，取上清液，用2，4．二硝基酚作为指示剂加入1．2滴，上清液中可溶性磷酸盐可与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，于适宜波长处进行比色测定，根据标准曲线计算出有效磷的含量，通过有效磷的浓度大小表示微生物溶磷能力的高低。
1、实验所用溶液(1)钼锑抗贮存液的制备首先量挑硫酸153ml(p=约1.84g/ml)缓缓地流入约400ml蒸馏水中，烘烤、加热。
然后称取lo.0g钼酸铵溶约60℃的300m1水中，加热。
然后将上述硫酸溶液缓缓重新加入此钼酸铵溶液中，再重新加入5g/l酒石酸锑钾溶液100ml，最后用水吸收至ll，兴于棕色瓶中，摆于阴暗处留存。
(2)钼锑抗炎显色剂准确称量抗坏血酸1.5g，溶于looml钼锑抗贮存液中。
此溶液必须现配现用，有效期为1d.(3)磷标准溶液(5mg/l)准备工作称取0.439g磷酸二氢钾在105℃烘箱中研磨2h后加热，溶200ml水中，加人5m1硫酸(p约1．84g/ml)，转至ll容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线，即为磷标准液100mg/l。
挑此溶液精确吸收20倍即为5mg/l磷标准溶液，此溶液不必长摆。
2、工作曲线的绘制分别吸取5mg/l磷标准溶液0、2、4、6、8、10、12ml于50m1容量瓶中，加水稀释大约至20m1，加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀后定容，即得0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mg/l磷标准系列溶液，在室温20℃-25℃下放置4h后，以0mg/l磷标准液为对照溶液，其余磷标准溶液与待测液同时比色，并记录在该峰值下的吸光度。
以测得的吸光度为纵坐标，磷浓度(mgl)为横坐标，绘制成工作曲线。
3、菌液的制备在300ml三角瓶中分别重新加入50m1培养基，121℃杀菌20min。
无菌操作，每瓶互连已经活化的待测菌种，不注射菌种的做为空白对照，放在30℃挥床上，160r／min震荡培育5d~7d后，抽出测量有效率磷含量。
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含磷量测定方法 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
实验方法
2.4.1 超声波工艺的研究
称取菜籽油25g于150mL的三角瓶中，在超声频率为40KHz的频率下，一定的超声时间、超声功率、超声温度及加水量进行超声波水化脱胶，结束后静置，然后在2000r/min下离心20min，得到水化脱胶油。
2.4.2 含磷量的测定
油脂样品与金属氧化物氧化时，试样中的磷成为磷酸盐，加酸溶解而得磷酸根，在加入钼酸盐后生成磷钼酸盐，磷钼酸盐被还原而产生钼蓝，其颜色深浅与油脂中磷脂含量成正相关，由此可进行比色定量。
该法具有简便、准确、灵敏度高的特点。
在已离心好的油脂中，取上层油脂于小烧杯中，用电子天平称取5g油于30mL的坩埚中，每个称取三个平行，各加入0.25g氧化锌。
炭化：用电炉进行脱胶油灰化的过程中，有几点要注意：
（1）先小火炭化，控制电炉在400W—500W之间，如果火候过大，油与氧化锌会剧烈反应，油往外溅出，即炭化初期，控制好火候是非常关键的一步。
（2）待脱胶油的颜色变成黑色时，小心加大火候，到达一定温度时会燃烧，燃烧结束后，油开始慢慢的起泡，起泡时控制好火候很关键，尽量不让泡沫溢出，如有气泡溢出，则对实验的最终结果影响较大。
（3）待泡沫消去，加大火候，15min后把电炉开到最大，待坩埚中的物质变为灰白色时，炭化完成。
把炭化好的试样小心移入灰化炉中，在550～600℃的高温下灼烧至完全灰化，灼烧，取出冷却至室温，加入1：1盐酸5mL溶解灰分，并加热微沸5min，冷却，将溶解液过滤注入25mL容量瓶中，用热水（50℃-
60℃）冲洗坩埚3-4次，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和滤液至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氢氧化钙沉淀全部溶解后，再加2滴，用水稀释至刻度，摇匀即可。
2.4.2.1 比色
用移液管吸取被测液2mL注入25mL比色管中，加入钼酸铵溶液2mL、亚硫酸钠溶液1mL、对苯二酚溶液1mL，然后加水稀释至刻度，加塞、摇匀。
静置后，去塞，用分光光度计在波长660nm下，用3cm比色皿，按测定标准液的方法测定其吸光值，记录数据[4]。
2.4.2.2 绘制标准曲线
取10支25mL比色管，编成0、l、2、3、4、5、6、7、8、9共l0个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液0、l、2、4、6、8、10、12、14、16mL，再在各比色管内分别加人钼酸铵溶液2mL、亚硫酸钠溶液1mL、对苯二酚溶液1mL，然后分别加水稀释至刻度，加塞、摇匀。
静置后，用分光光度计在波长660nm下，用3cm比色皿，以0号管内之溶液作空白调节吸光值至0位，分别测定各比色管溶液的吸光值。
以吸光值为横坐标，以磷的含量为纵坐标绘制标准曲线[4]。
2.4.3 磷含量的计算
根据被测液的吸光值在标准曲线查得磷含量 (P)后，可以按以下公式计算试样中的磷含量：
式中：
P ——标准曲线查得的磷量 (mg/kg) ；
——比色时所取的被测液体积(mL) ；
V
1
——样品灰化后稀释的体积(mL) ；
V
2
m ——试样质量(g) 。
2.4.4 准确性实验
某一分析方法的准确度，可通过测定标准试样的误差，利用加标实验来计算回收率，以误差或回收率来判断。
在回收试验中，加入已知量的标准物的样品，称加标样品，未加标准物的样品称为未知样品，在相同条件下用同种方法对加标样品和未加标样品进行磷脂含量的测定，按下列公式计算出加入标准样品的回收率：
式中：P%——加入标准物质的回收率
m——加入标准物质的量
——加标样品的测定值
m
1
——未标样品的测定值
m
2
精炼率的计算
称取原油25g，根据超声工艺的操作过程进行磷脂与油的分离，取上层油脂，称得质量为m，根据以下公式计算油的精炼率：
式中：
m—原油的质量（g）
m
—脱脂油的质量（g）
1。