食品中EDTA盐的测定(食品安全国家标准)

食品安全国家标准

食品中乙二胺四乙酸盐的测定

1 范围

本标准规定了固相萃取柱净化、液相色谱法测定食品中乙二胺四乙酸盐含量。

本标准适用于果酱、果脯、腌渍的蔬菜罐头、除番茄沙司外的蔬菜泥（酱）、坚果与籽类罐头、八宝粥罐头、复合调味料、饮料中乙二胺四乙酸二钠和复合调味料中乙二胺四乙酸二钠钙的测定。

2 原理

试样用水提取，提取液加入三氯化铁衍生，经混合型阴离子（PXA）固相萃取柱净化，液相色谱检测，外标法定量。复合调味料测出乙二胺四乙酸盐的三氯化铁衍生物总量后，不加三氯化铁测定乙二胺四乙酸二钠钙含量，根据两者结果确定乙二胺四乙酸二钠的含量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2008规定的三级水。

3.1试剂

3.1.1甲醇：色谱纯。

3.1.2盐酸：纯度36%~38%。

3.1.3磷酸：纯度不小于85%。

3.1.4甲酸：纯度不小于98%。

3.1.5四丁基溴化铵：纯度不小于99%。

3.1.6乙酸钠：纯度不小于99%。

3.1.7三氯化铁：纯度不小于99%。

3.2 试剂配制

3.2.1三氯化铁溶液：称取0.54 g三氯化铁（3.1.7），溶于90 mL水中，加入0.10 mL盐酸（3.1.2），转移到100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。

3.2.2 5%甲酸甲醇水溶液溶液：取5mL甲酸、20mL甲醇用水定容至100mL。

3.2.3四丁基溴化铵-乙酸钠混合溶液：称取6.45 g四丁基溴化铵（3.1.5）、2.46 g乙酸钠（3.1.6），加1000 mL水超声溶解，加入磷酸调节pH至

4.0。

3.3 标准品

3.3.1乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）标准品：CAS登录号6381-92-6，纯度不小于99%。

3.3.2乙二胺四乙酸二钠钙（C10H14N2O8Na2Ca）标准品：CAS登录号62-33-9，纯度不小于99%。

3.4 标准溶液配制

3.4.1乙二胺四乙酸二钠标准溶液：准确称取适量的乙二胺四乙酸二钠（3.3.1）标准品，用水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得浓度为10 mg/ mL的标准储备溶液，此溶液转移至储液瓶中4 ℃下储存。

3.4.2乙二胺四乙酸二钠标准系列溶液：吸取100 μL乙二胺四乙酸二钠标准溶液（3.4.1）加水稀释成浓度为1mg/mL的标准中间溶液。再用水将标准中间溶液稀释为0.5μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL的系列标准工作液。

3.4.3乙二胺四乙酸二钠钙标准溶液：准确称取适量的乙二胺四乙酸二钠钙（3.3.2）标准品，用水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得浓度为10 mg/ mL的标准储备溶液，此溶液转移至储液瓶中4 ℃下储存。

3.4.4乙二胺四乙酸二钠钙标准系列溶液：吸取100μL乙二胺四乙酸二钠钙标准溶液（3.4.3）加入900μL水稀释成浓度为1mg/mL的标准中间溶液。再用水将乙二胺四乙酸二钠钙标准中间溶液稀释为1.0μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL的系列标准工作液。

4 仪器和设备

4.1液相色谱仪：配紫外检测器。

4.2 电子天平：感量0.1 mg、0.01 g。

4.3离心机: 不低于7500 rpm。

4.4旋涡混合器。

4.5超声波清洗机。

4.6 pH计：精度为0.01。

4.7螺旋盖聚丙烯离心管：15 mL、50 mL。

4.8玻璃具塞比色管：50 mL。

4.9 24孔固相萃取装置。

4.10微孔滤膜：0.22μm，有机系。

4.11混合阴离子（PXA）固相萃取柱：150mg/6mL或相当者。

5 试样制备与保存

5.1 试样制备

5.1.1 固体样品

样品用组织捣碎机粉匀浆，混合均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

5.1.2 液体样品

含果粒样品需榨汁机匀浆混合均匀后，装入洁净容器内密封并做好标识。碳酸饮料取500g于1000mL烧杯中，在70℃水浴中边加热边搅拌，去除部分二氧化碳，冷却至室温后，装入洁净容器内密封并做好标识。

5.2 试样保存

试样于-18℃冰箱内保存。

注：制样和样品保存过程中，应防止样品受到污染和待测物损失。

6 分析步骤

6.1 乙二胺四乙酸盐总量测定

6.1.1 提取

称取试样5.0 g，置于50mL离心管中，加入25 mL水，涡旋混匀，超声20min，7500rpm离心5min，取上清液置于50mL玻璃比色管中。剩余残渣重复提取一次，离心后合并上清液，加水定容至50mL。吸取5mL上清液于15mL离心管中，待衍生化。

6.1.2 衍生

向上述提取溶液中加入0.5 mL三氯化铁溶液，涡旋混匀1min，超声20 mim，7500 rpm离心5min，待净化。

6.1.3 净化

依次用5mL 甲醇、5mL 水活化PXA 柱，将待净化液（6.1.2）全部上样过柱，依次用5mL 水、5mL 甲醇淋洗，抽干，用5mL 5%甲酸甲醇水溶液（3.2.2）洗脱，抽干，收集洗脱液定容至5mL ，过滤，供液相色谱仪测定。

6.2 乙二胺四乙酸二钠钙测定

6.2.1 提取

称取试样5.0 g ，置于50mL 离心管中，加入25 mL 水，涡旋混匀，超声20min ，7500rpm 离心5min ，取上清液置于50mL 玻璃比色管中。剩余残渣重复提取一次，离心后合并上清液，加水定容至50mL 。吸取5mL 上清液于15mL 离心管中，待净化。

6.2.2 净化

依次用5 mL 甲醇、5 mL 水活化PXA 柱，将待净化液（6.2.1）全部上样过柱，依次用5 mL 水、5 mL 甲醇淋洗，抽干，用5 mL 5%甲酸甲醇水溶液洗脱，抽干，收集洗脱液定容至5mL ，过滤，供液相色谱仪测定。

6.3 仪器参考条件

6.3.1 色谱柱：Diamond Plus C18柱，250 mm （长度）×4.6 mm （内径），粒度5.0μm ，或相当者；

6.3.2 流动相: 甲醇:四丁基溴化铵-乙酸钠混合溶液（3.2.3）=15 : 85；

6.3.3 流速：0.8 mL/min ；

6.3.4 柱温：35℃；

6.3.5 波长：254 nm ；

6.3.6 进样量：10 µL 。

6.4 标准曲线的制作

6.4.1乙二胺四乙酸盐总量测定

取150 µL 乙二胺四乙酸二钠标准工作液（3.4.2）于50 mL 玻璃具塞比色皿中，加入25 mL 水和1.0 mL 三氯化铁溶液，涡旋混匀1min ，超声20 mim ，冷却至室温后，用水定容至刻度。将衍生所得标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，乙二胺四乙酸二钠衍生物的标准色谱图见附录A 中图A.1。

6.4.2乙二胺四乙酸二钠钙含量测定

将乙二胺四乙酸二钠钙系列标准工作液（3.4.4）分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，乙二胺四乙酸二钠钙的标准色谱图见附录A 中图A.2。

6.5 试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中乙二胺四乙酸二钠衍生物或乙二胺四乙酸二钠钙的浓度，平行测定次数不少于两次。

6 分析结果的表述

6.1 除复合调味料外其它试样

试样中乙二胺四乙酸盐含量按式（1）计算：

1000

10001⨯⨯=m V

c X (1)