对照标准内毒素

内毒素（大肠杆菌0113：H10）

对照标准内毒素（CSE）

标准内毒素对照液可用于鲎试剂准备对照组或用于高温去热原研究。重组前存放在2-8℃。下面将会介绍高温去热原的使用方法。

注意：对照标准内毒素瓶看起来是空的。近距离检视，可见每只瓶内有网状内毒素。如果有任何关于制作和使用对照标准内毒素的问题，请联系CAPE GOD联合有限公司。

试验材料：

1.标准内毒素对照，0.5微克/瓶，（批号#E0005）

2.鲎试剂检测用水。用于注射或冲洗用（无菌）的无菌水或其他可用作鲎试剂检查用水的

水。（参见裂解物包装插页）。

3.刻度为5ml的一次性无菌吸管。

4.石蜡膜“M”®。（美国国家容器）

5.稀释管（用高温或无菌的去热原玻璃试管，一次性聚苯乙烯塑料）

*用鲎试剂试验对一次性用品进行内毒素杂质和干扰物（吸附和/或可萃取的）测试。

试验步骤：

1）去除金属瓶盖和瓶塞。

2）在瓶内注入鲎试剂检查用水。推荐使用体积为5ml.但不同体积可用于达到设计的存液浓度。

a.用吸管进行重组，先打开瓶塞混入足够空气打破真空，后去除瓶塞加入鲎试剂检查用水。

用石蜡膜封口。

3）剧烈摇晃试管一分钟，5-10分钟内移到室温下30-60分钟。

4）重组对照标准内毒素置于2-8℃下不超过四个星期。不能冷冻。

5）第一次稀释前摇晃对照标准内毒素30秒，然后制作适量的设计用浓度。此稀释液可用于三种存液浓度的十倍稀释液（用5ml重组时为100ng/ml）。连续两倍稀释液可用于检测鲎试剂敏感度或者为浊度法和显色基质法制作适当的稀释液。稀释过程中需振荡。效价

给定的对照标准内毒素的效价由特定批次的鲎试剂与最近美国食品与药品管理局和美国药典的参照标准内毒素测定。效价是用来转换对照标准内毒素单位ng/ml 到EU/ml.可参见CAPE GOD联合有限公司的效价试验证明。详见顾客服务和网址.提出要求时请提供对照标准内毒素和鲎试剂检测试剂的产品批号。

有效去热原指导方法

推荐使用两种方法使用对照标准内毒素，批号E0005和E0125，来指导去热原步骤。以下是AB两种方法（重组或去除）。

方法A

1)去除每只瓶标签、金属锯齿封口和瓶塞，用双层铝锡泊纸封住瓶口。

2)留至少两只瓶做为阳性对照组。

3)放置供试瓶到高温炉中备用有效性测试。

4)在去热原的最后阶段，收集好瓶子用于试验。

5)根据插页的背面指导方法进行重组过程和对照。

6)根据插页，检测所有未知瓶子，包括溶解物。

7)计算出对照组合试验组的内毒素减少率（用对照组浓度除以实验组浓度）。若算出的值

是1000或大于1000，那加热器达到了3-log或者是更多的减少。

方法B

1)根据页面背后的步骤重组一只瓶子

2)加入极少剂量的对照标准内毒素稀释液到材料中用于去热原。加入大量备用试剂至

少去除3log.考虑任何稀释液加入到恢复增加的内毒素和任何没有吸收的内毒素此容器中。至少包含两只恢复对照组。

3)将材料根据步骤去热原

4)用最小剂量的鲎试剂检查用水从材料中恢复对照标准内毒素。

5)照上法测试鲎试剂检查用水。

6)照A法中的第七步计算出内毒素的减少量。

**注意：去热原的步骤和有效性已经发表在一些论文中，部分可见文献参考。