植物蛋白提取方法研究进展

植物蛋白提取方法研究进展

研究简介：

本方法介绍了植物样本常见的几种蛋白的提取方法。

使用方法：

一、BBproExtra植物总蛋白提取

1.组织样本：

1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，

混匀后置冰上备用。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg鲜嫩植物组织样本剪碎，采用以下一

种方法处理：

i.加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。

ii.置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液A。

iii.加入500ul提取液A直接置冰上研磨。

3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1小时。

4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

2.细胞样本：

1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，

混匀后置冰上备用。

2、细胞用PBS洗涤2次。

3、加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。

4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

3.冻存样本：

1、冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。

2、冻存细胞样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。

3、在4℃，12000rpm以上条件下离心15分钟。

4、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

二、BBproExtra植物膜蛋白提取

1、每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎，置于研钵中用液氮

研磨。（没有液氮也可直接置冰上研磨即可）

3、研磨后加入500ul提取液，混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2-3小时。

4、将提取液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。

5、在上清中加入10ul抽提液B，充分混匀。

6、在37℃水浴10分钟。

7、在37℃ 1000×g离心5分钟。

8、小心吸取管底部大约50ul液体。

9、用稀释液稀释该溶液，即得膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进行定

量，调整相应的浓度用于下游实验。

三、BBproExtra植物核蛋白

1.提取液制备：每500ul预冷的核蛋白提取液A和200ul提取液B中分别加入2ul

蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎，采用以下一种方

法处理：

i.加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。

ii.置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液A。

iii.加入500ul提取液A直接置冰上研磨。

3.高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，100×g力条件下离心1分钟。

4.收集上清，弃沉淀。

5.将上清在4℃，800×g力条件下离心1分钟。

6.弃上清，收集沉淀。

7.在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。

8.置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。

9.在4℃，16000×g条件下离心10分钟。

10.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

11.将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。

四、BBproExtra植物质膜

1、每500ul质膜提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2、取200mg植物组织样本剪碎，置于研钵中用液氮研磨。（没有液氮也可直接置冰上

研磨即可）

3、研磨后加入500ul提取液，混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2-3小时。

4、将提取液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。

5、在上清中加入10ul抽提液B，充分混匀。

6、在37℃水浴10分钟。

7、在37℃ 1000×g离心5分钟。

8、此时溶液分为2层，移除上层，小心吸取下层管底部大约50ul液体。

9、用50-150ul稀释液稀释该溶液，即得质膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA

方法进行定量，调整相应的浓度用于下游实验。

相关产品：

植物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-31051 50 / 100 T 600 / 1000 BBproExtra TM植物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-31081 50 / 100 T 900 / 1600 植物组蛋白提取试剂盒BB-31171 50 / 100 T 800 / 1500 植物蛋白提取试剂盒BB-3124 50 / 100 T 600 / 1000 植物根茎蛋白提取试剂盒BB-31241 50 / 100 T 600 / 1000 BBproExtra TM植物膜蛋白提取试剂盒BB-3152 50 / 100 T 800 / 1500 植物跨膜蛋白提取试剂盒BB-31521 50 / 100 T 800 / 1500 植物核蛋白提取试剂盒BB-3154 50 / 100 T 600 / 1000 植物质膜蛋白提取试剂盒BB-3155 50 / 100 T 800 / 1500 植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒BB-3167 50 / 100 T 600 / 1000 植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3169 50 / 100 T 600 / 1000 植物线粒体蛋白提取试剂盒BB-3172 50 / 100 T 600 / 1000 植物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3173 50 / 100 T 800 / 1500 植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒BB-3175 50 / 100 T 800 / 1500 叶绿体蛋白提取试剂盒BB-3179 50 / 100 T 600 / 1000 植物膜蛋白/叶绿体蛋白提取试剂盒BB-31791 50 / 100 T 800 / 1500 植物胞质蛋白提取试剂盒BB-3180 50 / 100 T 600 / 1000 植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3183 50 / 100 T 600 / 1000 叶绿体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31836 50 / 100 T 700 / 1000 植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3184 50 / 100 T 800 / 1500 植物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31841 50 / 100 T 800 / 1500

其他种属蛋白提取：

蛋白提取

BB-3101 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒

BB-3102 BestBio贝博生物核蛋白提取试剂盒

BB-3103 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒

BB-3104 BestBio贝博生物膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒

BB-31042 BestBio贝博生物细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒

BB-3105 BestBio贝博生物磷酸化蛋白提取试剂盒

BB-31051 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白提取试剂盒

BB-3106 BestBio贝博生物活性蛋白提取试剂盒

BB-3108 BestBio贝博生物磷酸化蛋白富集试剂盒

BB-31081 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白富集试剂盒

BB-3109 BestBio贝博生物糖蛋白富集试剂盒

BB-3111 BestBio贝博生物膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

BB-3112 BestBio贝博生物核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

BB-3113 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒

BB-3114 BestBio贝博生物细胞跨膜蛋白提取试剂盒

BB-3115 BestBio贝博生物细胞核蛋白提取试剂盒

BB-31152 BestBio贝博生物组织核蛋白提取试剂盒