聚凝胺交叉配血操作规程

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1.目的：

是一种快速、简便检测红细胞不完全抗体的方法，可应用交叉配血试验、抗体筛选和抗体测定等。

2.要求：

要求全科人员能够熟练掌握原理及操作。

3.原理：

聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的负电荷，从而缩短红细胞间的正常距离，通过正负电荷的作用，借助离心作用引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的，当红细胞与血清在低离子介质孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在凝聚和凝集外表上是不能区分的，再加入枸橼酸钠重悬液，使枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上的正电荷中和，重悬后，非特异性凝聚现象消失，而真正存在的凝集不消失。

4.材料与试剂

4.1待检血清（或已知血清），待检2%~5%红细胞悬液（或2%~5%已知抗原红细胞）

4.2 聚凝胺试剂盒（市售）：

5.操作：

5.1 取一支试管，加入待检血清2滴或（已知血清1滴）。

5.2 加2%~5%待检红细胞（或2%~5%已知红细胞）1滴。

5.3加按要求稀释的LIM液0.6ml（或12滴），混匀，置室温至少1分钟（时间长效果好）。

5. 4 加Polybrene试剂1滴，混匀后1000g ,离心15~60秒。

5.5 轻摇观察由Polybrene引起的红细胞非特异性凝集,若未见红细胞凝集则需重做。

5.6 加入1滴重悬液轻摇看结果：由Polybrene引起的非特异性凝集应在1分钟

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内完全散开，若是由免疫性抗体引起的凝集反应则不会完全散开。★

5.7阳性对照试剂代替待检血清按同样的步骤进行质控试验，结果应为“1+”的弱凝集。

6、附注

6.1 若红细胞中含有较多血清或血浆则需用盐水洗涤细胞一次。

6.2 加Polybrene试剂时只需加1滴，多加Polybrene可能导致重悬液无法充分解散非特异凝集,出现假凝集;如果使用肝素抗凝的血浆配血需多加1滴Polybrene试剂以中和肝素。

6.3冷凝集处理：在室温较低时（<15℃）使用Polybrene方法试验，冷凝集会因Polybrene方法而加强，建议使用LIM配制的红细胞悬液加待检血清直接离心进行盐水对照试验，如果在盐水法试验中发现有冷凝集，则可将Polybrene试验结果置37℃1分钟后再判读，这时较弱的冷凝集会散开，真凝集会有所减弱，但不会完全散开；或者在室温致敏1分钟后用温盐水（45℃左右）三洗，做间接抗球蛋白试验。

7、相关文件

7.1《中国输血技术操作规程》

8、相关表单

8.1 CB—001青海省血液中心血型参比实验室免疫血液学研究

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