检验科甲胎蛋白的测定

ELISA 测定甲胎蛋白（AFP）操作规程

1、检验目的

检测血清AFP主要是用于原发性肝癌、生殖系统肿瘤等恶性肿瘤的诊断或者鉴别诊断，可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估，另外还可作为唐氏综合症、早期胎儿先天性畸形及肝癌高发区的普查指标。

2、方法原理

采用ELISA双抗体夹心法，向抗AFP抗体包被的聚苯乙烯反应板微孔加入待检样本，再加酶标记抗AFP抗体，加入酶底物显色，用终止液终止反应，测定吸光度值，测定光密度，查标准曲线，计算待测样本中AFP含量。

3、性能指标

此方法快速简便、特异性强，检测灵敏度0.5ng/ml。

4、操作方法：

（1）样品孔加入待测血清50ul。

（2）封板，置37℃孵育20min。

（3）洗版（机洗），选择洗涤5次程序，拍干。

（4）每孔加入酶标抗体血清，置37℃孵育20min。

（5）洗板，选择洗涤5次程序洗板后拍干。

（6）每孔加显色剂A液、B液各一滴，充分混匀，封板，置37℃孵育10min。

（7）用酶标仪读数，数值取波长450nm，先用空白孔校零，然后读

取各孔OD值。

5、质控

每次试验设阴性、阳性各两孔，并设空白对照1孔，随常规标本一起检测。

6、注意事项：

1.实验前，试剂先平衡至室温。

2.结果判定需在反应终止后10 min内完成。

3.不同批号试剂不能混用。

4.本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

7、结果计算：

样品A值≤20 ng/ml 标准品孔A值为阴性。

样品A值≥40 ng/ml 标准品孔A值为阳性。

样品A值＞20 ng/ml且＜400 ng/ml 标准品孔A值为弱阳性。

8、正常值：≤20ng/ml。