血友病诊治进展PPT讲稿
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F8 基因第1内含子内的Int1h-1序列，与基因外2个 高度同源序列（Int1h-2、Int1h-3）之一发生染色体内 的同源重组
导致F8 基因不能合成正常FⅧ
2020/9/28
11
血友病A发病机制
FⅧ由位于X染色体长臂末端Xq28的F8 基因编码合成
内含子1 倒位突变 2%~5％为重型
基因缺陷 每个血友病A家系含基因缺失、
血友病B型 (FⅨ缺乏) 1/30000～1/25000
A型血友病比B型更
常见，约占血友病总数 的80%-85%
2020/9/28
2
自发性出血倾向，伴 随终身，婴幼儿期容 易出现瘀伤
合理的治疗提高了存 活到65岁以上的病人 数（国外）
负重关节、肌肉、 口腔、皮肤黏膜 或内脏的自发性 出血
外伤或手术时过量 出血
基因缺陷 (类型复杂、无明显突变热点)
FⅨ合成障碍
内源性凝血活酶生成障碍
出血
2020/9/28
13
血友病基因诊断方式
• 直接基因诊断 • 间接基因诊断
2020/9/28
14
血友病A直接基因诊断
检测方法：Southern 印迹法（Southern blot）
长链PCR（long-distance polymerase chain reaction LD-PCR）
2020/9/28
17
血友病B直接基因诊断
F9 基因直接检测——直接核酸测序法 F9 基因拷贝数变异检测方法：
Accu-Copy 多重荧光竞争PCR 法 实时荧光定量PCR 多重连接依赖的探针扩增技术
2020/9/28
18
血友病B间接基因诊断
多重PCR多态性遗传连锁分析： 西方人群在MseI、BamHⅠ、XmnⅠ、TaqⅠ、MnlⅠ、
液相色谱多重PCR（liquid chromatography-quantitative multiplex PCR）
多重连接依赖的探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe
amplification）
AccuCopy 多重荧光竞争PCR
2020/9/28
15
反向PCR（inverse polymerase chain reaction I – PCR）
改良后的LD-PCR
双步PCR法，分别对Int1h-1与Int1h-2片段扩增分析
F8 基因拷贝数变异的检测
外显子电泳条带缺失推测大片段缺失
实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）
血友病诊治进展课件
血友病（hemophilia，HA ）
定义
特征
类型
X染色体连锁的 先天性出血性疾病
FⅧ/FⅨ基因 突 变导致水平缺乏所 致
隐性遗传，男性
发 病 ， 约 1/3 者 为 基 因突变
全球约40万血友 病患者，我国有 80000~120000名血友 病
血友病A型 (FⅧ缺乏) 为主，1/10000～1/5000
2020/9/28
16
血友病A间接基因诊断
限制性内切酶片段长度多态性（RFLP） PCR方法检测复等位基因—
可用于产前诊断及携带者的诊断 PCR 方法检测短重复顺序（STR） 多重荧光PCR 法进行多态性遗传连锁分析：
4 个距F8基因1.5 Mb内STR 位点 2 个F8 基因内STR 位点 产前诊断加用性别位点——牙釉蛋白基因（amelogenin gene，Amelo）
插入和点突变等 65%为单核苷酸突变
FⅧ合成障碍
内含子22 倒位突变
45%～50%为重型
wenku.baidu.com
FⅧ基因拷贝数变异： 大片段缺失，见于3%~5% 重型血友病A 大片段重复，见于0.6%~0.7% 血友病A
2020/9/28
内源性凝血活酶生成障碍 出血
12
血友病B发病机制
FⅨ由位于X染色体Xq27的F9 基因编码合成
2020/9/28
临床表现
2/3患者有家族出 血史，检测到FⅧ 或FⅨ水平缺乏
出血程度与凝血 因子水平相一致
轻型血友病没有外伤 或手术时可以不出血
3
血友病常见出血部位
关节出血
2020/9/28
肌肉出血
口腔出血
鼻出血
4
关节畸形及血肿
2020/9/28
5
临床表现：肌肉萎缩 （血友病关节）
2020/9/28
血友病A直接基因诊断基因突变类型
F8 基因其他突变的检测——可发生在全部序列中 至今已报道突变2,107 种
错义突变983 种 无义突变208 种 剪接位点突变158 种 小缺失突变357 种 大缺失突变255 种 插入突变146 种 直接核苷酸测序法是检测突变的“金标准” DNA 测序法可在98%的患者中发现突变所在
HhaⅠ等位点识别力较高 对中国汉族人群中Ⅸ基因外的6 个多态位点（DXS8094、
DXS1211、DXS1192、DXS102、DXS8013、DXS1227）识别 能力达到99.99%
2020/9/28
19
血友病治疗
替代治疗
综合治疗
偶尔替代 治疗
需要时替代 预防性替代
治疗
治疗
提倡：有规律的输入相应凝血因子 保证血浆因子浓度长期维持一定水平，减少反复出血和关节致残
2020/9/28
20
发达国家较早建立中心，开展综合医疗
血友病综合关怀的概念起源于20世纪40年代末期的英国血友病治疗中心 1976年美国建立Hemophilia Treatment Centre（HTC）网络
加拿大
3250万人口，2921名病人 1969年在蒙特利尔儿童医院开办首家 血友病诊疗中心
1疗209为世78中纪年心8血0的友年提病代美议综有被国合1法0认防所：国可治中1目：9原心前763则；5251年和0所401家开中万所庭始心人中治建口心立
关节血肿
有关节受累
关节受累罕见
每周约出血1-2次
2020/9/28
每月可出血1次
可以从不出血
9
家 族 史
2020/9/28
血友病诊断
•筛选
血小板正常
临
仅APTT延长
床
•确诊
病
FⅧ/FⅨ水平降低
史
除外其他疾病
•携带者和胎儿进行基因诊断
•就近医院，标本送检实验室诊断
•确定治疗方案类型，告知
10
血友病A发病机制
6
每年几次关节出血肿胀？ 出血部位？ 关节功能？
2020/9/28
7
人口学特征
美国的血友病因科学合理治疗增加了存活到65岁以上
的病人数
治疗合并症
长期关怀
我国？
关怀成本
2020/9/28
8
血友病严重程度与出血
重型
因子水平 < 2% 特征是自发出血
中间型
因子水平 2-5% 轻微损伤出血
轻型
因子水平 5-40% 严重损伤、外科手术 侵入性检查时出血
导致F8 基因不能合成正常FⅧ
2020/9/28
11
血友病A发病机制
FⅧ由位于X染色体长臂末端Xq28的F8 基因编码合成
内含子1 倒位突变 2%~5％为重型
基因缺陷 每个血友病A家系含基因缺失、
血友病B型 (FⅨ缺乏) 1/30000～1/25000
A型血友病比B型更
常见，约占血友病总数 的80%-85%
2020/9/28
2
自发性出血倾向，伴 随终身，婴幼儿期容 易出现瘀伤
合理的治疗提高了存 活到65岁以上的病人 数（国外）
负重关节、肌肉、 口腔、皮肤黏膜 或内脏的自发性 出血
外伤或手术时过量 出血
基因缺陷 (类型复杂、无明显突变热点)
FⅨ合成障碍
内源性凝血活酶生成障碍
出血
2020/9/28
13
血友病基因诊断方式
• 直接基因诊断 • 间接基因诊断
2020/9/28
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血友病A直接基因诊断
检测方法：Southern 印迹法（Southern blot）
长链PCR（long-distance polymerase chain reaction LD-PCR）
2020/9/28
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血友病B直接基因诊断
F9 基因直接检测——直接核酸测序法 F9 基因拷贝数变异检测方法：
Accu-Copy 多重荧光竞争PCR 法 实时荧光定量PCR 多重连接依赖的探针扩增技术
2020/9/28
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血友病B间接基因诊断
多重PCR多态性遗传连锁分析： 西方人群在MseI、BamHⅠ、XmnⅠ、TaqⅠ、MnlⅠ、
液相色谱多重PCR（liquid chromatography-quantitative multiplex PCR）
多重连接依赖的探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe
amplification）
AccuCopy 多重荧光竞争PCR
2020/9/28
15
反向PCR（inverse polymerase chain reaction I – PCR）
改良后的LD-PCR
双步PCR法，分别对Int1h-1与Int1h-2片段扩增分析
F8 基因拷贝数变异的检测
外显子电泳条带缺失推测大片段缺失
实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）
血友病诊治进展课件
血友病（hemophilia，HA ）
定义
特征
类型
X染色体连锁的 先天性出血性疾病
FⅧ/FⅨ基因 突 变导致水平缺乏所 致
隐性遗传，男性
发 病 ， 约 1/3 者 为 基 因突变
全球约40万血友 病患者，我国有 80000~120000名血友 病
血友病A型 (FⅧ缺乏) 为主，1/10000～1/5000
2020/9/28
16
血友病A间接基因诊断
限制性内切酶片段长度多态性（RFLP） PCR方法检测复等位基因—
可用于产前诊断及携带者的诊断 PCR 方法检测短重复顺序（STR） 多重荧光PCR 法进行多态性遗传连锁分析：
4 个距F8基因1.5 Mb内STR 位点 2 个F8 基因内STR 位点 产前诊断加用性别位点——牙釉蛋白基因（amelogenin gene，Amelo）
插入和点突变等 65%为单核苷酸突变
FⅧ合成障碍
内含子22 倒位突变
45%～50%为重型
wenku.baidu.com
FⅧ基因拷贝数变异： 大片段缺失，见于3%~5% 重型血友病A 大片段重复，见于0.6%~0.7% 血友病A
2020/9/28
内源性凝血活酶生成障碍 出血
12
血友病B发病机制
FⅨ由位于X染色体Xq27的F9 基因编码合成
2020/9/28
临床表现
2/3患者有家族出 血史，检测到FⅧ 或FⅨ水平缺乏
出血程度与凝血 因子水平相一致
轻型血友病没有外伤 或手术时可以不出血
3
血友病常见出血部位
关节出血
2020/9/28
肌肉出血
口腔出血
鼻出血
4
关节畸形及血肿
2020/9/28
5
临床表现：肌肉萎缩 （血友病关节）
2020/9/28
血友病A直接基因诊断基因突变类型
F8 基因其他突变的检测——可发生在全部序列中 至今已报道突变2,107 种
错义突变983 种 无义突变208 种 剪接位点突变158 种 小缺失突变357 种 大缺失突变255 种 插入突变146 种 直接核苷酸测序法是检测突变的“金标准” DNA 测序法可在98%的患者中发现突变所在
HhaⅠ等位点识别力较高 对中国汉族人群中Ⅸ基因外的6 个多态位点（DXS8094、
DXS1211、DXS1192、DXS102、DXS8013、DXS1227）识别 能力达到99.99%
2020/9/28
19
血友病治疗
替代治疗
综合治疗
偶尔替代 治疗
需要时替代 预防性替代
治疗
治疗
提倡：有规律的输入相应凝血因子 保证血浆因子浓度长期维持一定水平，减少反复出血和关节致残
2020/9/28
20
发达国家较早建立中心，开展综合医疗
血友病综合关怀的概念起源于20世纪40年代末期的英国血友病治疗中心 1976年美国建立Hemophilia Treatment Centre（HTC）网络
加拿大
3250万人口，2921名病人 1969年在蒙特利尔儿童医院开办首家 血友病诊疗中心
1疗209为世78中纪年心8血0的友年提病代美议综有被国合1法0认防所：国可治中1目：9原心前763则；5251年和0所401家开中万所庭始心人中治建口心立
关节血肿
有关节受累
关节受累罕见
每周约出血1-2次
2020/9/28
每月可出血1次
可以从不出血
9
家 族 史
2020/9/28
血友病诊断
•筛选
血小板正常
临
仅APTT延长
床
•确诊
病
FⅧ/FⅨ水平降低
史
除外其他疾病
•携带者和胎儿进行基因诊断
•就近医院，标本送检实验室诊断
•确定治疗方案类型，告知
10
血友病A发病机制
6
每年几次关节出血肿胀？ 出血部位？ 关节功能？
2020/9/28
7
人口学特征
美国的血友病因科学合理治疗增加了存活到65岁以上
的病人数
治疗合并症
长期关怀
我国？
关怀成本
2020/9/28
8
血友病严重程度与出血
重型
因子水平 < 2% 特征是自发出血
中间型
因子水平 2-5% 轻微损伤出血
轻型
因子水平 5-40% 严重损伤、外科手术 侵入性检查时出血