水样中细菌菌落总数的测定原理及方法电子教案(精)

《水处理微生物》教案

教学重点

教学难点无菌操作的实施各环节操作要求

参考资料环境微生物陈剑虹、胡肖容主编科学出版社

环境微生物周凤霞、白京生主编化学工业出版社

一、训练目标

1．能准确地采样和稀释样品，会制备平板。

2．能正确报告样品中的活菌数。

二、材料用具

1.材料与试剂待测样品，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，75%酒精棉球，

试纸等。

2.仪器与用具天平，培养箱，干燥箱，超净工作台，水浴锅，称样瓶，吸管，培养皿，玻璃珠，试管，三角瓶，试管架，酒精灯，记号笔等。

三、训练操作规程

1、稀释平板菌落计数法操作流程及技术要点

操作

流程

操作技术要点

训练准备提前分组，建议2人一组，每组准备以下物品：

1．培养基：150mL牛肉膏蛋白胨培养基1瓶

2．无菌水：9mL无菌水5～7支（吸取9mL蒸馏水装入试管中，所需数量根据样品中含菌量而定），然后塞上塞子

培养基、无菌水采取高压蒸汽灭菌，于121℃灭菌20min

3．1mL吸管8支，10mL吸管1支，培养皿9套。用报纸包扎好，在干燥箱中于160℃灭菌2h

取样超净工作台里操作，也可室内操作（需70%酒精净空，酒精灯无菌区操作）1．提前30min打开超净工作台风机和紫外线开关（注意：操作前关闭紫外灯）

2．在超净工作台上，按无菌操作法准确量取待测样品1mL，注入到第1

装有9mL无菌水试管中（注意：吸管吸液端不要接触到液面），振荡制成10-1菌悬液

系列稀释再取1支吸管伸进10-1菌悬液吹吸数次，吸取1mL菌液注入到第2支装有9mL无菌水的试管中，混匀即成10-2菌液

依此法按10倍序列稀释至适宜稀释度（图6-3）（注意：每换一个稀释度取1支新吸管）

标记取12套培养皿，在皿底注明稀释度，每个稀释度重复3皿（含无菌水3

加样取连续的3个稀释度菌液，用一支无菌吸管吸取1mL菌液加入对应的培养

菌落计数一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度，算出同一稀释度3重复的菌落平均数，再根据公式求出样品的含菌量

平板菌液注入量

稀释释倍

数

平均

同一稀释

ml)

(cf u/

样品含菌数

⨯

=

菌落

度

菌数报告1.若只有一个稀释度的平均菌落数在30～300，则该平均菌落数乘以稀释倍数即为该样品中的细菌总数

2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数；若其比值大于2，则报告其中较小的菌数

3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之

4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之

5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之

6.若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之

菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示

2、稀释度选择及菌落数报告方式

例次

不同稀释度的菌落数两稀释度

菌落数之

比

菌落总数报告方式10-510-610-7

1 1365 135 20 —135 1.4×10

2 多不可计295 46 1.6 377.5 3.8×10

3 多不可计271 60 2.2 27100 3.7×10

4 多不可计多不可计313 —313 3.1×10

5 27 11 5 —27 2.7×10

6 多不可计315 12 —315 3.2×10

7 0 0 0 —<105<10

四、训练报告

报告所测定样品中的微生物活细胞数。

思考：测定样品中菌数时为什么要选择三个连续的稀释度？