食用菌栽培技术综合性实验

植物生产国家级实验教学示范中心《食用菌栽培技术综合性实验》

实验项目一览表

序号实验名称建议学时数每组人数必选/可选

1原种、栽培种的培育2学时4人必选

2菌种保藏及复壮2学时4人必选

3平菇袋栽4学时4人必选

实验一、原种、栽培种的培育

一、实验教学目的

能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种结果。

二、实验基本原理

母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。

三、所涉及的课程及知识点

在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（菌丝降解纤维素等，…）、仪器分析(……)，……

四、仪器设备及实验材料

1. 器具：菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。

2．材料：棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。

五、实验内容与方法

（一）实验内容

1、培养料的配制

2、菌种瓶及菌种袋的分装

3、原种的接种

4、栽培种的接种

（二）方法步骤

两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。

1.培养基的配制

（1）配方与配制

①颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）

配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。

配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15～20min(熟而不烂，勿破皮)，捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。

②棉籽壳麦麸培养基

配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。

配制：将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%～65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。

（2）分装原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。

栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。

2.培养基的灭菌

原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1℃条件下，保持灭菌时间1～2h。若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。

3.接种

灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30℃，进行抢温接种。

（1）接原种用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1支母种约接5～8瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。

（2）接栽培种用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。

4.培养

接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔4～5天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。

常检查：及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。

逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温2～3℃，以免料温升高，并有壮丝作用。

注意菌龄：原种约30～40天、栽培种约20～30天菌丝长满，再继续培养7～10天是使用的最好菌龄。

六、实验报告与实验汇报

及时对实验数据进行整理和分析，按江西农业大学学报格式要求写作小论文。每组同学做好1份实验论文PPT，在全班进行交流汇报，老师进行点评。

七、思考题

1.记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？

2.比较原种与栽培种生产过程的异同点

3.颗粒为何要进行泡和煮？

4.菌种的表面有一块残留的琼脂块，证明该菌种是哪级菌种？

5.菌种表面有少许玉米粒或麦粒，证明该菌种是哪级菌种？

6.一批菌种在适宜条件下培养了十多天，发现有一瓶菌种块丝毫未萌动，请分析原因？

实验二、菌种保藏及复壮

一、实验教学目的

学会利用自然基质保藏菌种。掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。

二、实验基本原理

创造低温、干燥、缺氧、少营养等不利于菌种生长的一切条件，使其代谢降到休眠状态。菌种经长期人工培养及保藏，难免引起某些优良性状的减弱或丧失，必须及时进行菌种复壮。菌种的使用、保藏、复壮应密切结合。保藏，复壮都是为使用服务的，不会保藏、复壮菌种，就容易使好种退化或者绝种。

三、所涉及的课程及知识点

在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（真菌的保藏和复壮等，…）、仪器分析(……)，……

四、仪器设备及实验材料

1. 器具：试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。

2. 材料：麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等。