双黄连粉针剂静脉注射血管刺激性试验研究

双黄连粉针剂静脉注射血管刺激性试验研究

【摘要】目的：观察双黄连粉针剂在体外条件下能否引起家兔红细胞溶血和凝集，为本品的临床使用提供参考。方法：将不同体积的双黄连粉针剂溶液与2%兔红细胞悬液37℃共同孵育4小时，同时设阴性对照组和阳性对照组，通过肉眼观察、分光光度计法及红细胞计数法，判断受试物是否存在溶血作用。结果：观察显示受试药物试验过程中均未见溶血现象。结论：本次试验条件下，双黄连粉针剂溶液4小时内不引起家兔红细胞溶血和凝集，提示双黄连粉针剂体外条件下不具有溶血和促凝集作用。

【关键词】双黄连粉针剂溶血性试验

双黄连粉针剂[1，2]是由哈药集团中药二厂生产的中药粉针剂，临床用于外感风热所致的发热、咳嗽、咽痛以及上呼吸道感染、轻型肺炎、扁桃体炎见上述症候者。本实验是通过体外试管法观察双黄连粉针剂是否会引起家兔红细胞溶血和凝集，为该药的临床使用提供相关资料。

1 材料

双黄连粉针剂，标示量：600mg/支。哈药集团中药二厂提供，批号：0910235。溶剂：0.9%氯化钠注射液，包装和规格：500ml，批号：0906163W，0910301，0910304。生产单位：北京双鹤药业股份有限公司。其它试剂均为分析纯。7222k 型全自动血球计数仪，日本NIHON KOHDEN；酶标仪，澳大利亚DIALAB BLX800UV。

日本大耳白兔，普通级，雄性。动物年龄：12～15周龄。动物体重：4.0 kg。动物来源：北京富豪实验动物养殖中心，生产许可证号：SCXK（京）2005-0009。饲料：实验兔配合饲料，北京华阜康生物科技股份有限公司，生产许可证号：SCXK（京）2009-0008。饲养条件：动物饲养于普通环境设施内。标准不锈钢笼具，每笼1只，盒内保持清洁干燥。房间定时通风消毒，室温23.3±0.5℃，湿度38.9±1.4 %。

2 实验方法

2.1 实验方法[3、4]

2.1.1 供试品配制

双黄连粉针剂临床静脉使用浓度为100mg·ml-1（1g/10ml），因此实验设置供试品浓度为100mg·ml-1。

2.1.2 2%红细胞混悬液的制备

家兔1只，兔耳中央动脉取血约10ml，放入有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，再加0.9%氯化钠注射液，摇匀后将混悬液移入10ml刻度离心管中，每管8ml，共5管，以2500rpm离心5min，弃上清。每管再加0.9%氯化钠注射液6ml，离心弃上清，反复洗红细胞3～4次，至上清液无色透明止。将所得红细胞用生理盐水配成2%红细胞混悬液，供试验用。

2.1.3 实验操作

取10ml玻璃试管9只，编号后按顺序排列于试管架上，按表中配比量依次加入2%红细胞混悬液和0.9%氯化钠注射液，混匀后置37℃恒温水浴箱中孵浴30min，然后向1～5号试管加入不同量的供试品。6、7号管不加供试品，为空白对照。第8、9管加2.5ml蒸馏水，为溶血阳性对照。以上样品各制备两份，待两种检查方法备用。（见表1）

2.1.4 体外试管法

肉眼观察：上述各管混匀后置37℃恒温水浴箱中。开始每隔15min观察1次，1h后每隔1h观察1次，观察4h，如溶液呈透明红色，即表示溶血；如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。分光光度计检测：上述各管混匀后置37℃恒温水浴箱保温4h后，将各管的溶液以2500rpm离心5min，自每管取上清液在分光光度计上、波长545 nm处读取各自的光密度值。

溶血率（%）=（Dt-Dnc）÷（Dpc-Dnc）×100

（Dt、Dnc和Dpc分别为试验样品、阴性对照和阳性对照的吸光度）。

2.1.5 体外红细胞计数法

首先将上述各管混匀，测定各管的红细胞数值（RBC1）；放置于37℃恒温水浴箱保温4h后，再次测定各管红细胞数值（RBC2）。

红细胞保存率（%）=RBC2÷RBC1×100。

2.2 结果判断

2.2.1 体外试管法

肉眼观察以0.3ml供试品，在2h内不产生溶血作用者认为可供注射用；分光光度计检测溶血率小于5%为可供注射用。

2.2.2 体外红细胞计数法

受试样品的红细胞的保存率大于70%为可供注射用。

3 实验结果

3.1 体外试管法

3.1.1 肉眼观察法

本次试验过程中，阳性8、9号管在加药后15min即出现溶血现象，溶液呈透明红色，并持续至试验结束；加有双黄连粉针剂的1～5号试管及阴性对照6、7号试管37℃孵育4小时内红细胞沉降良好，分层明显，上层清亮透明，管底有部分红细胞沉积，轻轻震荡后，红细胞分散良好。试验中所有试管均未产生红色絮状物。肉眼观察结果见表2。

3.1.2 分光光度计法

1～7号试管的溶血率分别为-1.5%、-0.3%、-6.4%、2.1%、-0.3%、0.9%、-0.9%，8～9号试管的溶血率均大于90%，分别为100.6%和99.4%。

3.2 体外红细胞计数法

4 结语

综上所述，本次试验条件下，双黄连粉针剂溶液4小时内不引起家兔红细胞发生溶血和凝集，实验结果证明双黄连粉针剂静脉注射不会引起红细胞溶血和凝集。

5 讨论

本实验进行过程中，动物房的湿度稍低于40%，但动物一般状况良好，我们认为对实验结果的影响可以忽略不计。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.国家食品药品监督管理局国家药品标准-新药转正标准（第16-26册）[S].2003，206-209.

[2]中国药典[S].一部，2005，205-206.

[3]国家食品药品监督管理局，中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则，2005.

[4]国家食品药品监督管理局，药物非临床研究质量管理规范，2003年.